目的:研究第十号染色体上缺失的磷酸酶-张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)编码的蛋白与E钙粘蛋白在中耳胆脂瘤中的表达,并分析两者在中耳胆脂瘤中的作用及相关性,为中耳胆脂瘤采取...
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目的:研究第十号染色体上缺失的磷酸酶-张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)编码的蛋白与E钙粘蛋白在中耳胆脂瘤中的表达,并分析两者在中耳胆脂瘤中的作用及相关性,为中耳胆脂瘤采取非手术的基因治疗寻找理论依据。方法:1.标本收集和处理:以2021年4月至2022年1月在珠海市人民医院行手术治疗的21例中耳胆脂瘤患者为研究对象,收集其中耳胆脂瘤和患耳同侧耳后正常皮肤标本,分为2份,1份行4%多聚甲醛固化24h后制备为石蜡块,行免疫组化检测;1份置于-80℃冰箱保存,行Western blot方法检测。2.实验方法:2.1评估耳部骨质破坏情况:根据颞骨CT及术中所见评估所有患者耳部骨质破坏情况,分级记录。2.2免疫组化:将收集到的胆脂瘤标本21份、耳后正常皮肤标本14份。免疫组化检测PTEN蛋白和E钙粘蛋白在两组标本中的表达,比较其表达差异并进行相关性分析。2.3 Western Blot:将收集的胆脂瘤标本21份、耳后皮肤标本18份。Western blot方法检测PTEN蛋白和E 钙粘蛋白在两组标本中的表达,比较两者的表达差异并进行相关性分析。2.4将PTEN蛋白和E钙粘蛋白在中耳胆脂瘤中的表达情况与患者耳部骨质破坏情况进行相关性分析。结果:1.免疫组化:PTEN蛋白、E钙粘蛋白在中耳胆脂瘤中的平均光密度均显著低于在耳后正常皮肤中的平均光密度(P<0.05)。两者在中耳胆脂瘤中的表达呈正相关(r=0.711)。*** Blot:PTEN蛋白、E钙粘蛋白在中耳胆脂瘤中的相对灰度值均低于在耳后正常皮肤中的相对灰度值(P<0.05)。两者在中耳胆脂瘤中的表达呈正相关(r=0.725)。***蛋白、E钙粘蛋白与耳部骨质破坏程度的相关性:免疫组化、Western Blot检测均显示中耳胆脂瘤中PTEN蛋白、E钙粘蛋白与耳部骨质破坏程度呈显著负相关(PTEN蛋白的r分别为-0.728、-0.868,E钙粘蛋白的r分别为-0.882、-0.798),两者在耳部骨质破坏Ⅰ度、Ⅱ度、Ⅲ度组的平均光密度、相对灰度值均依次降低,组间比较差异显著(P<0.05)。结论:***蛋白和E钙粘蛋白在中耳胆脂瘤中的表达呈显著正相关,说明它们在中耳胆脂瘤中可能存在相互促进的关系。2.中耳胆脂瘤中PTEN蛋白、E钙粘蛋白的表达与其对耳部骨质的破坏程度呈显著负相关,表明它们可能在中耳胆脂瘤的发生发展中起抑制作用。
目的:气道微生态分布特征与哮喘的发病频率及临床预后密切相关,但不同哮喘表型患者的上、下呼吸道微生态特征尚不明确。本研究探讨了2型急性期哮喘患者上、下呼吸道微生态分布特征及与严重程度之间的关系,验证了上、下呼吸道特征菌群与Th2型炎症因子水平之间的相关性,以期为哮喘的气道微生态研究、个体化诊疗方案制定提供可靠的临床依据。方法:2020年6月至2021年9月共纳入暨南大学第二临床医学院(深圳市人民医院)45例2型急性期哮喘患者,同期按性别、年龄匹配16例健康对照者。所有纳入的哮喘患者按病情严重程度分为以下两组:(1)轻中度2型哮喘组,共23例;(2)重度2型哮喘组,共22例。收集所有受试者的一般信息,采集鼻咽拭子和诱导痰标本进行微生态16S r RNA测序;收集哮喘患者的血常规、诱导痰分类计数及肺功能结果,采集外周血标本进行白介素(IL)-4、IL-5、IL-13水平检测。运用SPSS 26.0软件将受试者的一般资料进行统计学检验,符合正态分布的计量资料采用t检验或方差分析,不符合正态分布的采用非参数检验,计数资料则采用卡方检验。微生态生信分析采用Mothur软件计算呼吸道微生态的α多样性指数,使用Wilcoxon秩和检验α多样性指数的组间差异;采用Bray-Curtis和unweighted Uni Frac距离算法分析微生态的β多样性,使用ANOSIM分析检验β多样性的组间差异;采用Wilcox秩和检验进行组间物种丰度的差异分析,运用LEf Se分析估计差异物种对组间区别的影响;运用Spearman等级相关分析和Ma As Lin分析评估呼吸道微生物菌群与Th2型炎症因子之间的相关性。结果:(1)2型哮喘患者的上呼吸道微生态分布特征如下:1)与健康对照相比,2型哮喘患者上呼吸道微生物的群落丰富度显著降低(P均≤0.01),而群落多样性和均匀度显著增高(P均<0.05),其β多样性亦存在显著差异(P=0.006);在门水平上,哮喘患者上呼吸道中变形菌门的相对丰度显著升高(P=0.049);在属水平上,哮喘患者上呼吸道中乳杆菌属的相对丰度显著降低(P=0.001)。2)与轻中度2型哮喘患者相比,重度2型哮喘患者上呼吸道微生物的群落多样性、丰富度、均匀度、β多样性、门水平及属水平各优势菌群的相对丰度均未见统计学差异(P均>0.05)。3)在2型哮喘患者上呼吸道中,变形菌门的相对丰度与IL-13水平呈显著负相关(Coeffencient=-0.009,P=0.033),棒状杆菌属的相对丰度与IL-13水平呈显著正相关(Coeffencient=0.014,P=0.031),放线菌门的相对丰度与IL-5水平呈显著正相关(Coeffencient=0.065,P=0.030),拟杆菌门、普雷沃氏菌属和不动杆菌属与外周血嗜酸粒细胞(Eos)计数呈显著负相关(Coeffencient分别=-0.103,-0.076,-0.175;P分别=0.046,0.015,0.017)。(2)2型哮喘患者的下呼吸道微生态分布特征如下:1)与健康对照相比,2型哮喘患者下呼吸道微生物的群落丰富度、多样性、均匀度及门水平各优势菌群的相对丰度均无统计学差异(P均>0.05),而重度哮喘患者的β多样性存在显著差异(P=0.044);在属水平上,哮喘患者下呼吸道中奈瑟菌属的相对丰度显著减少(P=0.010)、韦荣氏菌属的相对丰度显著升高(P=0.002)。2)与轻中度2型哮喘患者相比,重度2型哮喘患者下呼吸道微生物的群落丰富度、多样性、均匀度、β多样性及门水平各优势菌群的相对丰度均无统计学差异(P均>0.05);在属水平上,重度哮喘患者的韦荣氏菌属的相对丰度显著升高(P=0.002),而微单胞菌属、红球菌属的相对丰度显著降低(P分别=0.043,0.001)。3)在哮喘患者的下呼吸道中,消化链球菌属的相对丰度与IL-5水平呈显著正相关(Coeffencient=0.024,P=0.002),二氧化碳噬纤维菌属的相对丰度与IL-5水平呈显著负相关(Coeffencient=-0.011,P=0.001),消化链球菌属、微单胞菌属和放线菌属的相对丰度与IL-13水平呈显著正相关(Coeffencient分别=0.004,0.001,0.004;P分别=0.007,0.026,0.049),放线菌门的相对丰度与诱导痰Eos计数呈显著负相关性(Coeffencient=-0.009,P=0.019)。(3)重度2型哮喘患者的上、下呼吸道微生态分布对比如下:1)重度哮喘患者下呼吸道微生物的群落多样性和均匀度显著高于上呼吸道(P均<0.01)。2)与健康对照及轻中度哮喘患者相比,重度哮喘患者上、下呼吸道间微生物的群落结构差异度缩小(R=0.441,P=0.001)。3)在门水平
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