检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2014年第10期30卷 1325-1329页

作者：孙一帆黄建芳王彩霞向军俭暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的：分析鉴定中国人群的虾、蟹致敏组分,确定主要过敏原及其致敏率,为深入研究食物过敏原检测及脱敏治疗提供依据。方法：通过46份虾蟹过敏症患者血清,对刀额新对虾、罗氏沼虾和锈斑鲟的蛋白粗提液进行Western blot分析,统计数据得出... 详细信息

目的：分析鉴定中国人群的虾、蟹致敏组分,确定主要过敏原及其致敏率,为深入研究食物过敏原检测及脱敏治疗提供依据。方法：通过46份虾蟹过敏症患者血清,对刀额新对虾、罗氏沼虾和锈斑鲟的蛋白粗提液进行Western blot分析,统计数据得出其全部过敏原组分及其致敏率,并确定主要过敏原。结果：Western blot结果显示,虾与过敏患者血清IgE的反应强于蟹,且虾、蟹间存在很多Mr相同的过敏原;32～38 kD原肌球蛋白（TM）、40 kD精氨酸激酶（AK）、60～80 kD血蓝蛋白（Hc）和21 kD肌质钙结合蛋白（SCP）是虾的主要致敏组分,TM、AK和Hc是虾、蟹共同的主要过敏原,其中TM的致敏率最高;与国外研究结果相比,AK、Hc和SCP的致敏率相对较高,且发现虾中48 kD蛋白组分（未知过敏原）也具有较高致敏率。结论：对中国人群而言,虾的致敏性强于蟹,且虾、蟹的主要致敏组分基本相同;中国人的虾蟹主要致敏组分及其致敏率与国外研究大致相同但略有差异;发现一种潜在的新型过敏原。

关键词：食物过敏过敏原 Western blot 虾蟹

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基于Au@Ag纳米花基底的高灵敏重金属镉SERS免疫层析试纸条

基于Au@Ag纳米花基底的高灵敏重金属镉SERS免疫层析试纸条

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中国化学会第十二届全国分析化学年会

作者：付强强刘宏武吴泽梁家杰罗志唐勇暨南大学生物工程系广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州 510632 暨南大学电子系暨南大学集成光学和光子学实验室广州 510632

镉离子通过食物链进入人体之后可以引起各种毒性作用,包括诱发肿瘤,肾损伤等.痕量镉污染的快速检测是食品安全分析研究中的重要挑战之一.本研究报道了一种基于表面增强拉曼散射(SERS）的新型免疫层析试纸条,用于快速检测镉离子(Cd2+).

关键词：

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原核表达MurA蛋白并制备其多克隆抗体用于免疫磁珠快速检测单增李斯特菌

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微生物学通报 2014年第6期41卷 1234-1242页

作者：童吉宇李志清闻一鸣李雨辰向军俭广东省分子免疫与抗体工程重点实验室暨南大学抗体工程研究中心广东广州510632

【目的】制备MurA多抗,结合免疫磁珠与选择平板进行单增李斯特菌的快速检测,建立单增李斯特菌的免疫磁珠快速检测方法。【方法】构建MurA的原核表达载体,转化大肠杆菌进行优化表达。镍柱纯化表达产物,质谱鉴定重组蛋白,再免疫小鼠,制备... 详细信息

【目的】制备MurA多抗,结合免疫磁珠与选择平板进行单增李斯特菌的快速检测,建立单增李斯特菌的免疫磁珠快速检测方法。【方法】构建MurA的原核表达载体,转化大肠杆菌进行优化表达。镍柱纯化表达产物,质谱鉴定重组蛋白,再免疫小鼠,制备其多克隆抗体。用所获多抗制备免疫磁珠,建立单增李斯特菌免疫磁珠-选择性培养基检测方法,并对人工污染牛奶样品进行检测。【结果】在大肠杆菌中高效表达了分子量约为72 kD的可溶性融合蛋白,质谱鉴定其为MurA蛋白;免疫小鼠获得的抗血清效价达1:10 000,与伤寒沙门氏菌、副溶血弧菌、大肠杆菌及属内其它病原菌均无交叉;所建立的免疫磁珠-选择性培养基检测法可检出浓度为103 CFU/mL及以上的单增李斯特菌,仅与英诺克李斯特菌存在一定交叉反应;牛奶样品单次仅需9 h增菌就能被检出,较常规增菌时间缩短39 h;检测限为0.4 CFU/mL。【结论】表达并纯化得到高纯度的单增李斯特菌MurA蛋白,制备的鼠源多克隆抗体亲和力高,特异性好;建立了快速检测单增李斯特菌的免疫磁珠联合选择性培养基法,在灵敏度不变的情况下,实现24 h内成功对牛奶样品的检测,较国标法减少42 h以上。

关键词：单增李斯特菌 MurA 多克隆抗体免疫磁珠

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重金属免疫学快速检测技术研究进展

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食品科学 2014年第17期35卷 306-311页

作者：刘艳梅钟辉向军俭广东省分子免疫与抗体工程重点实验室暨南大学抗体工程研究中心广东广州510632

重金属免疫学检测技术作为一种新型检测技术,与传统检测方法相比具有灵敏、快速、携带方便、费用低等优点,可用于现场快速检测。本文概述近年来重金属免疫学检测技术的最新研究进展,并对该类方法的发展趋势和应用前景进行展望。

关键词：重金属单克隆抗体免疫检测酶联免疫吸附反应胶体金免疫层析法荧光偏振免疫分析法

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基于独特型-抗独特型玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA检测方法的建立

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中国生物制品学杂志 2014年第3期27卷 419-422页

作者：黄婉君骆敏儿钟娜贾彦琼向军俭王宏暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广东广州510632

目的建立基于独特型．抗独特型玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）间接竞争ELISA检测方法，并进行验证。方法采用ProteinG亲和层析法纯化ZEN的p型抗独特型单抗1D5（Ab213-1D5）腹水；以ZEN单抗Fab片段包被酶标板，Ab2β-1D5为一抗，建立... 详细信息

目的建立基于独特型．抗独特型玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）间接竞争ELISA检测方法，并进行验证。方法采用ProteinG亲和层析法纯化ZEN的p型抗独特型单抗1D5（Ab213-1D5）腹水；以ZEN单抗Fab片段包被酶标板，Ab2β-1D5为一抗，建立ZEN的竞争ELISA检测方法，绘制标准抑制曲线，根据回归方程计算半数抑制浓度（IC50），并确定检出限（IC10）及线性范围。以ZEN类似物呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉素A代替ZEN作为竞争抗原，用建立的方法进行检测，验证方法的特异性；配制6个浓度的ZEN溶液（20、30、40、50、60和75ng／m1），用建立的方法进行检测，计算试验内及试验间回收率和变异系数（CV），验证方法的准确性和精密性。结果Ab2β-1D5单抗的纯化效果较好，浓度为4mg／ml，效价为1：6×104；ZEN单抗Fab片段的最佳包被浓度为1μg／ml。建立的ZEN竞争EHSA检测方法的线性回归方程为：y=-34．099x＋81．857，R2=0．9944，IC50为8．60ng／ml，IC10为0．58ng／ml，线性范围为0．58-128．03ng／ml；该方法检测ZEN类似物伏马毒素、赭曲霉素A和呕吐毒素的交叉反应率均小于0．01％；检测不同浓度ZEN的试验内平均回收率在98．65％-113．45％之间，试验间平均回收率在82．96％-98．00％之间；试验内cy值在0．48％。6．40％之间，试验间cy值在0．94％-8．27％之间。结论应用ZEN单抗的Fab片段和ZEN的B型抗独特型单抗建立了ZEN的间接竞争ELISA检测方法，该方法特异性较强，准确性和精密性良好，且成本较低，快速简便，易于标准化，适用于样品的大量筛选。

关键词：玉米赤霉烯酮单克隆抗体 Fab片段 β型抗独特型单抗间接竞争酶联免疫吸附测定

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呋喃唑酮代谢物单克隆抗体及其新型免疫层析检测试纸条的制备

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中国生物制品学杂志 2014年第7期27卷 927-931页

作者：周克楠唐勇蓝彩凤史聪颖付强强梁家杰暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广东广州510632

目的制备呋喃唑酮代谢物AOZ单克隆抗体及其胶体金与荧光淬灭免疫层析试纸条。方法将AOZ衍生成CPAOZ后,与载体蛋白BSA偶联,制备完全抗原CPAOZ-BSA,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,共5次,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,获得稳定分泌特异性... 详细信息

目的制备呋喃唑酮代谢物AOZ单克隆抗体及其胶体金与荧光淬灭免疫层析试纸条。方法将AOZ衍生成CPAOZ后,与载体蛋白BSA偶联,制备完全抗原CPAOZ-BSA,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,共5次,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,获得稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株。利用获得的抗CPAOZ单克隆抗体制备胶体金及荧光淬灭免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度及特异性进行验证。结果制备的完全抗原经紫外扫描鉴定偶联成功。共获得3株能稳定分泌抗CPAOZ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中效价和特异性最好的1株2H11针对CPAOZ的50%抑制质量浓度(IC50)为0.88 ppb。以该抗体制备的胶体金及荧光淬灭免疫层析试纸条的最低检测限分别为7.5和0.062 5 ppb;两种试纸条与其他3种硝基呋喃类代谢物CPAMOZ、CPAHD、CPSEM均不存在交叉反应。结论成功制备了抗CPAOZ单抗及其胶体金免疫层析和荧光淬灭免疫层析试纸条,两种试纸条均具有较高的灵敏度和较强的特异性,其中荧光淬灭免疫层析试纸条的灵敏度较胶体金免疫层析试纸条高约100倍,具有良好的应用前景。

关键词：呋喃唑酮代谢物单克隆抗体胶体金荧光免疫层析试纸条

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丙烯醛单克隆抗体的制备及ELISA方法的建立

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免疫学杂志 2014年第2期30卷 156-161页

作者：谢旋吕哲沈梓粤吴继美陈婷李任强暨南大学生物工程学系广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的利用丙烯醛阳性杂交瘤细胞株制备腹水型单克隆抗体，优化并建立丙烯醛的ELISA检测技术。方法采用直接人工合成法，将丙烯醛半抗原与载体耦合制备完全抗原（免疫原）。利用PEG法将免疫效价高的Balb／c小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞进... 详细信息

目的利用丙烯醛阳性杂交瘤细胞株制备腹水型单克隆抗体，优化并建立丙烯醛的ELISA检测技术。方法采用直接人工合成法，将丙烯醛半抗原与载体耦合制备完全抗原（免疫原）。利用PEG法将免疫效价高的Balb／c小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，采用有限稀释法进行4次亚克隆，筛选得到1株能稳定分泌抗丙烯醛抗体的亚型为IgG2b的杂交瘤细胞株1G7G6，并制备腹水型抗体。在此基础上，优化并建立检测丙烯醛的间接竞争ELISA方法。结果合成适于免疫和ELISA检测的完全抗原丙烯醛-KLH（免疫原）和丙烯醛-BSA（包被原），制备的丙烯醛抗体（腹水）的效价均在8×10^4以上，与其他丙烯醛类似物交叉反应率均小于1％，特异性高。优化后丙烯醛ELISA方法的检测灵敏度（IC50）为43．2ng／ml，检测线性范围为4．4-417．2ng／ml，检测限（LOD）为1．8ng／ml。结论成功制备得到高亲和力、高效价的丙烯醛腹水型单抗，筛选优化了间接竞争ELISA检测条件，建立了检测液相中丙烯醛的特异、快速、灵敏的ELISA检测技术。

关键词：丙烯醛完全抗原单克隆抗体间接竞争ELISA

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二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定

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免疫学杂志 2014年第6期30卷 550-559页

作者：张晋霞姜浩武亢中奎潘磊王金胜刘羿辰邓宁暨南大学生命科学技术学院暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中... 详细信息

目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化。间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用。结果成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1%甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L。SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合。CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,最大抑制率为43.4%。划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移。结论研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性。

关键词： bFGF ds—Diabody 毕赤酵母肺癌细胞

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替莫唑胺联合粉防己碱对人脑胶质瘤U87细胞的抑制作用

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中国药理学与毒理学杂志 2014年第3期28卷 367-372页

作者：张勇马继伟李海莹王绍祥闫雍容刘子豪杜彬钟雪云暨南大学医学院病理教研室广东广州510632 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广东广州510632 暨南大学生物医药研究开发基地广东省生物工程药物重点实验室广东广州510632

目的探讨粉防己碱与替莫唑胺联合用药对人脑胶质瘤细胞U87细胞存活、克隆形成、迁移能力及凋亡的影响。方法采用CCK-8法检测粉防己碱8～64μmol·L^-1,或替莫唑胺50～400μmol·L^-1,或替莫唑胺＋粉防己碱3.2和6.4μmol·L... 详细信息

目的探讨粉防己碱与替莫唑胺联合用药对人脑胶质瘤细胞U87细胞存活、克隆形成、迁移能力及凋亡的影响。方法采用CCK-8法检测粉防己碱8～64μmol·L^-1,或替莫唑胺50～400μmol·L^-1,或替莫唑胺＋粉防己碱3.2和6.4μmol·L^-1作用24 h后细胞存活率。粉防己碱6.4μmol·L^-1、替莫唑胺100μmol·L^-1或替莫唑胺＋粉防己碱3.2和6.4μmol·L^-1作用24 h后,Giemsa染色检测细胞的克隆形成;Transwell小室检测细胞迁移能力;流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡;Western蛋白质印迹法检测Bcl-XL、活化胱天蛋白酶3及活化聚ADP核糖聚合酶（PARP）蛋白表达。结果 CCK-8实验结果显示,单用粉防己碱和替莫唑胺均能抑制U87细胞的生长,且具有浓度依赖性（r=0.903,P〈0.05）,替莫唑胺100μmol·L^-1＋粉防己碱3.2和6.4μmol·L^-1抑制率高于两药单用,经分析两者作用为相加。替莫唑胺可抑制U87细胞的克隆形成和迁移能力,两药联用时比单用替莫唑胺抑制作用更明显（P〈0.05）;与单用替莫唑胺相比,两药联用时抗凋亡蛋白Bcl-XL明显减少,执行凋亡的活化的剪切胱天蛋白酶3蛋白及剪切PARP明显增多。结论粉防己碱联用替莫唑胺能明显抑制人脑胶质瘤U87细胞的生长、克隆形成及迁移能力,并诱导激活胱天蛋白酶3依赖的细胞凋亡。

关键词：粉防己碱替莫唑胺 U87细胞细胞凋亡

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VEGF/bFGF复合多肽抗体的制备及对卵巢癌细胞增殖抑制作用

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免疫学杂志 2014年第6期30卷 512-515,538页

作者：潘磊张晋霞王金胜翁锐强邓宁暨南大学生命科学技术学院抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的研究VEGF/bFGF复合多肽(VBP3)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管新生和人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制的影响。方法通过镍离子柱亲和层析和离子交换层析方法纯化出诱导表达的VBP3蛋白,免疫Balb/c小鼠制备抗bFGF和抗VEGF的多克隆抗体,... 详细信息

目的研究VEGF/bFGF复合多肽(VBP3)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管新生和人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制的影响。方法通过镍离子柱亲和层析和离子交换层析方法纯化出诱导表达的VBP3蛋白,免疫Balb/c小鼠制备抗bFGF和抗VEGF的多克隆抗体,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测抗体效价和特异性。成管试验研究抗体对HUVEC细胞的成管影响,CCK-8检测抗体对SKOV3增殖抑制的影响。Western blot检测抗体对bFGF和VEGF下游信号通路中Erk1/2和Akt磷酸化的影响。结果 SDS-PAGE鉴定出了纯度较高的VBP3蛋白;ELISA方法检测出了高滴度的抗体;HUVEC的成管实验结果表明VBP3多克隆抗体在一定程度上抑制了HUVEC的成管;CCK-8检测出抗体体外抑制了SKOV3细胞增殖,在抗体质量浓度为100μg/ml时抑制率达到39.20%。Western blot结果表明抗bFGF和抗VEGF多克隆抗体显著抑制FGFR和VEGFR下游信号通路中Erk1/2和Akt的磷酸化。结论 VBP3可能作为一种多肽疫苗抑制肿瘤的生长。

关键词： bFGF VEGF 复合多肽血管新生增殖抑制

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