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食物过敏中肥大细胞释放组胺的研究进展

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医学理论与实践 2007年第3期20卷 269-271页

作者：蒋红玲向军俭暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室广州510632

组胺是Ⅰ型变态反应中最重要的炎性介质,深入研究肥大细胞的组胺释放,对食物过敏的防治具有重要的意义。本文介绍食物过敏中肥大细胞组胺释放机制、组胺检测方法及检测组胺的意义等方面的研究进展。

关键词：组胺肥大细胞食物过敏

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重组人源性抗HBsAg Fab抗体的肽质量图谱分析

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中国生物工程杂志 2005年第B04期25卷 224-227页

作者：邓宁向军俭唐勇王宏暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室广州510632

重组人源性抗HBsAg Fab抗体具有较好的特异性和抗原结合活性,为了更好的阐明毕赤酵母表达的重组人源性抗HBsAg Fab抗体的性质,用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI- TOF-MS)对重组Fab抗体的分子质量和肽质量图谱进行了分析。结果显示... 详细信息

重组人源性抗HBsAg Fab抗体具有较好的特异性和抗原结合活性,为了更好的阐明毕赤酵母表达的重组人源性抗HBsAg Fab抗体的性质,用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI- TOF-MS)对重组Fab抗体的分子质量和肽质量图谱进行了分析。结果显示,毕赤酵母表达的重组人源性抗HBsAg Fab抗体的分子质量为50678．49Da,与根据其一级结构计算的理论分子质量相比多2763．84 Da,显示酵母表达的重组Fab抗体为糖蛋白。用胰蛋白酶酶解重组Fab抗体后进行 MALDI-TOF-MS分析显示,大部分的酶解肽段均能检测出来。结果表明毕赤酵母表达的重组Fab 抗体与预期的结构一致。

关键词：重组Fab 分子质量肽质量图谱质谱

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重组人源抗HBsAg Fab的糖基化分析

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第5期21卷 658-660页

作者：邓宁向军俭唐勇王宏粟宽源暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室广东广州510632 解放军第458医院全军传染病研究中心广东广州510601

目的:分析重组人源抗HBsAgFab的糖基化。方法:应用PAS糖染色法和经酶切糖苷酶H去糖基后,用MALDI-TOF-MS质谱仪对重组人源抗HBsAgFab的糖基化进行分析。结果:PAS染色法的结果显示,毕赤酵母(Pichiapastoris)表达的重组人源抗HBsAgFab呈淡... 详细信息

目的:分析重组人源抗HBsAgFab的糖基化。方法:应用PAS糖染色法和经酶切糖苷酶H去糖基后,用MALDI-TOF-MS质谱仪对重组人源抗HBsAgFab的糖基化进行分析。结果:PAS染色法的结果显示,毕赤酵母(Pichiapastoris)表达的重组人源抗HBsAgFab呈淡红色。用质谱仪测定***表达的经内切糖苷酶H去糖基后的重组人源抗HBsAgFab的相对分子质量(Mr),从50678.49降低到49245,相差1433.49(约相当于少了8个甘露糖基)。结论:***表达的重组人源抗HBsAgFab,为一种具有生物活性的低糖基化的蛋白,为深入研究其性质及功能奠定了基础。

关键词： HBsAg Fab 糖基化毕赤酵母

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重组人源抗HBsAg Fab的糖基化分析

重组人源抗HBsAg Fab的糖基化分析

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中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会

作者：邓宁向军俭唐勇王宏暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室

通过噬菌体展示技术获得1株人源抗HBsAg Fab基因,在***中高效表达并对表达产物进行了纯化和性质分析。为了深入研究该重组人源抗HBsAg Fab的糖基化性质和功能,我们分别应用 PAS糖染色法和经内切糖苷酶H去糖基后,用基质辅助激光解吸电离... 详细信息

通过噬菌体展示技术获得1株人源抗HBsAg Fab基因,在***中高效表达并对表达产物进行了纯化和性质分析。为了深入研究该重组人源抗HBsAg Fab的糖基化性质和功能,我们分别应用 PAS糖染色法和经内切糖苷酶H去糖基后,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(matrix-assisted laser desorption ionization,time of flight,mass spectrometer,MALDI-TOF-MS)对其糖基化进行了分析。

关键词： HBsAg Fab TOF 糖基化 Fab

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人源性抗HBsAg单链Fab基因在酵母中的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第2期25卷 120-120页

作者：邓宁向军俭粟宽源暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室广州510632 解放军第458医院传染病研究中心

抗乙肝表面抗原的人源性抗体(Fab)在临床上有防治乙型肝炎病毒的应用前景,如用于预防新生儿乙型肝炎病毒的垂直传播和治疗性乙肝制剂等.本文将噬菌体抗体库筛选得到的人源性抗HBsAg Fab抗体基因,通过重叠PCR的方法借Linker将Fab的轻链(L... 详细信息

抗乙肝表面抗原的人源性抗体(Fab)在临床上有防治乙型肝炎病毒的应用前景,如用于预防新生儿乙型肝炎病毒的垂直传播和治疗性乙肝制剂等.本文将噬菌体抗体库筛选得到的人源性抗HBsAg Fab抗体基因,通过重叠PCR的方法借Linker将Fab的轻链(L链)和重链(H链)融合构建单一的链,即单链Fab(Single chain Fab)基因,并插入到酵母表达载体pPICZαA中.将构建的表达载体质粒pPICZαA-HL线性化,通过LiCl转化法转化毕赤酵母GS115,利用ZeocinTM抗生素筛选重组酵母,并用高剂量的ZeocinTM平板来筛选多拷贝整合有融合L、H链基因的重组酵母。

关键词：抗HBsAg Fab基因单链乙型肝炎病毒抗乙肝表面抗原 Linker 酵母表达载体人源性抗体噬菌体抗体重叠PCR chain 垂直传播抗体基因治疗性新生儿库筛选

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亲和层析纯化重组人源性抗HBsAg Fab抗体

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第5期20卷 575-577页

作者：邓宁陈文吟向军俭饶桂荣唐勇暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室广东广州510632 解放军第458医院广东广州510602

目的 :纯化酵母发酵产生的重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,建立稳定、适于生产应用的纯化工艺。方法 :以原核表达的重组人源性抗HBsscFv免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备大量分泌mAb的杂交瘤细胞株 14F7。将该细胞株注入小鼠腹腔制备mAb腹... 详细信息

目的 :纯化酵母发酵产生的重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,建立稳定、适于生产应用的纯化工艺。方法 :以原核表达的重组人源性抗HBsscFv免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备大量分泌mAb的杂交瘤细胞株 14F7。将该细胞株注入小鼠腹腔制备mAb腹水 ,经辛酸沉淀纯化后 ,制备亲和层析柱 ,纯化酵母发酵产生的重组人源性抗HBsAgFab抗体。结果 :用抗scFvmAb亲和层析柱纯化的重组人源性抗HBsAgFab的纯度可达 95 %以上 ,回收率可达 70 %～ 85 %。结论 :人源性抗HBsscFv制备mAb作为亲和层析的介质 ,可有效地从酵母发酵上清中纯化重组人源性抗HBsAgFab,适用于大规模生产重组人源性抗HBsAgFab。

关键词： HBsAg 重组Fab 抗scFv单克隆抗体亲和层析

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抗rh-bFGF嵌合抗体真核表达载体的构建与表达

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第2期20卷 163-167页

作者：向军俭李洪庆邓宁杨红宇童贻刚李建民暨南大学生命科学技术学院分子免疫学和抗体工程实验室广东广州510632 军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

目的 :构建并在真核细胞中表达抗人重组碱性成纤维生长因子 (rh bFGF)人鼠嵌合抗体。方法 :从分泌抗rh bFGF鼠单抗(mAb) 1F11的杂交瘤细胞中扩增、克隆VL、VH 基因 ,从质粒pMDHC和pMDLC中扩增、克隆CL、CH 基因 ,测序鉴定后插入真核... 详细信息

目的 :构建并在真核细胞中表达抗人重组碱性成纤维生长因子 (rh bFGF)人鼠嵌合抗体。方法 :从分泌抗rh bFGF鼠单抗(mAb) 1F11的杂交瘤细胞中扩增、克隆VL、VH 基因 ,从质粒pMDHC和pMDLC中扩增、克隆CL、CH 基因 ,测序鉴定后插入真核表达载体 ,并转化二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢(CHO dhfr- )细胞进行表达。采用间接ELISA检测表达产物的人源性和其抗原结合活性。结果 :序列测定表明所克隆的抗体基因是功能性抗体的V区基因 ,在转化细胞的培养上清中可检测到抗rh bFGF嵌合抗体的表达。ELISA试验证实 ,该嵌合抗体具有人源C区 ,并具有鼠mAb 1F11的抗原结合活性。结论 :在真核细胞中成功地表达抗rh bFGF的人鼠嵌合抗体。

关键词：碱性成纤维生长因子嵌合抗体基因表达 CHO细胞

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重组人源性抗HBsAg Fab抗体纯化方法的比较研究

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生物工程学报 2004年第6期20卷 884-889页

作者：邓宁向军俭饶桂荣陈文吟暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室广州510632 人民解放军第458医院全军传染病研究中心广州510601

抗HBsAgFab抗体被认为在预防和治疗HBV引起的肝病中具有重要的作用。为了建立稳定的、适于生产应用的重组人源性抗HBsAgFab抗体的纯化工艺 ,本实验对不同纯化方法进行了比较研究。比较了抗Fab抗体亲和层析、ScFv单克隆抗体亲和层析和离... 详细信息

抗HBsAgFab抗体被认为在预防和治疗HBV引起的肝病中具有重要的作用。为了建立稳定的、适于生产应用的重组人源性抗HBsAgFab抗体的纯化工艺 ,本实验对不同纯化方法进行了比较研究。比较了抗Fab抗体亲和层析、ScFv单克隆抗体亲和层析和离子交换层析等 3套纯化工艺在酵母发酵生产的重组人源性抗HBsAgFab抗体纯化中的效率。结果显示 ,抗Fab抗体亲和层析柱纯化酵母表达的重组Fab ,纯度为 96 8% ,但回收率偏低 ,只有30 %～ 4 0 %。ScFv单克隆抗体亲和层析纯化的重组Fab ,纯度为 97 5 % ,回收率达 75 %～ 85 %。该工艺能很好的适应较小规模的生产应用。离子交换层析纯化的重组Fab ,纯度为 97% ,回收率为 75 %～ 85 %。该工艺能很好的适应较大规模的生产应用。以上结果表明 ,应用ScFv单克隆抗体亲和层析和离子交换层析纯化技术均能很好的纯化出重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,这两种纯化工艺不仅大大节约纯化成本 ,且纯化效率和回收率有很大提高。

关键词： HBsAg 重组Fab 纯化方法毕赤酵母

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小鼠过敏症模型的建立及虾过敏性组分的分析

小鼠过敏症模型的建立及虾过敏性组分的分析

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第6次全国微生物学与免疫学大会

作者：向军俭邓宁张在军唐勇王宏毛露甜暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室

虾是引起食物过敏的常见类型,通过复制其过敏动物模型,分析其中引起过敏的蛋白组分,并对主要过敏原蛋白进行分离纯化,获得单一的组分。单一过敏原组分的获得对于过敏原的标准化,临床上明确过敏原类型,提高过敏症诊断的灵敏度具有十分重... 详细信息

虾是引起食物过敏的常见类型,通过复制其过敏动物模型,分析其中引起过敏的蛋白组分,并对主要过敏原蛋白进行分离纯化,获得单一的组分。单一过敏原组分的获得对于过敏原的标准化,临床上明确过敏原类型,提高过敏症诊断的灵敏度具有十分重要的意义。此外有报道用纯化的过敏原组分用于特异性脱敏治疗,可大大提高脱敏疗效,减少副作用。制备河虾的蛋白粗提液,以氢氧化铝为佐剂,免疫Balb/c小鼠,致敏和激发各一次,于激发后第7d、14d、21d检测小鼠血清中过敏原特异性IgE。模型组小鼠血清sIgE水平比对照组均有明显升高,且在

关键词：组胺释放小鼠血清

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重组人源性抗HBsAg Fab抗体的酵母表达研究

重组人源性抗HBsAg Fab抗体的酵母表达研究

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第6次全国微生物学与免疫学大会

作者：邓宁向军俭陈文吟粟宽源暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室中国人民解放军第458医院传染病中心中国人民解放军第458医院传染病中心

乙型肝炎病毒不仅引起急慢性肝炎,且与肝硬化和肝癌的发生有密切的关系。现已公认针对乙肝表面抗原的抗体具有保护活性,是唯一能用于紧急预防的生物制品。本研究将噬菌体展示技术筛选的人源性抗HBsAg Fab抗体的轻、重链基因分别克隆到pP... 详细信息

乙型肝炎病毒不仅引起急慢性肝炎,且与肝硬化和肝癌的发生有密切的关系。现已公认针对乙肝表面抗原的抗体具有保护活性,是唯一能用于紧急预防的生物制品。本研究将噬菌体展示技术筛选的人源性抗HBsAg Fab抗体的轻、重链基因分别克隆到pPICZαA表达载体上,构建转化载体pPICZαA-L和pPICZαA-H,再将L链完整的表达盒与Fd链完整的表达盒克隆到同一个载体上,构建酵母双表达载体pPICZαA-H-L。电转化法转化GS115菌株,将Fab抗体的轻、重链基因分别整合到巴斯德毕赤酵母的染色体上构建高效分泌表达抗HBsAg Fab抗体的酵母工程菌。对表达的重组Fab抗体进行了离子交换纯化,对其分子量、等电点、糖基化以及抗原结合活性等特性进行了分析,并用5L发酵罐对人

关键词：抗体基因酵母工程菌人源性 HBsAg Fab Fab 酵母表达

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