检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2019年第5期35卷 584-590页

作者：杨浩程龙球黄建芳朱柳蓉刘洋向军俭暨南大学抗体工程研究中心生命科学技术学院生物工程学系广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的:用自制重金属铜单抗和合成铜完全抗原,建立检测重金属铜离子的间接竞争化学发光酶联免疫(CLEIA)法,为植物中草药和土壤环境中铜的快速定量测定提供简便、可靠的方法。方法:使用本实验室前期制备并鉴定合格的优质铜单抗和合成铜抗原... 详细信息

目的:用自制重金属铜单抗和合成铜完全抗原,建立检测重金属铜离子的间接竞争化学发光酶联免疫(CLEIA)法,为植物中草药和土壤环境中铜的快速定量测定提供简便、可靠的方法。方法:使用本实验室前期制备并鉴定合格的优质铜单抗和合成铜抗原,建立铜间接竞争CLEIA法,并对其准确度、精密度、特异性和稳定性进行评价;采集植物中草药和土壤样品共31份,通过微波消解联合沉淀法进行前处理并制备待测样,由间接竞争CLEIA法进行铜含量测定,以ICP-AES仪器法所测结果为对照评价其可靠性。结果:该方法检测灵敏度为17. 9 ng/ml,检测限为1. 9 ng/ml,线性范围为3. 0～200 ng/ml;准确度试验回收率为98. 8%～105. 5%,精密度试验RSD≤5. 0%;特异性试验仅与Mg^(2+)、Zn^(2+)有13. 3%、3. 3%的交叉反应;酶标板置-20℃避光保存6周内其检测结果准确性未出现明显改变。对植物中草药和土壤样品进行前处理并制样检测,对比ICP-AES法检测结果,相关系数分别为0. 972和0. 989,两种方法具有较好相关性,表明间接竞争CLEIA法可应用于一般环境样品中铜的简便快速定量测定。结论:成功建立铜间接竞争CLEIA检测法,其灵敏度及各参数均符合国家法定相关样品铜离子检测技术指标的要求,可应用于一般环境样品中铜含量的快速测定。

关键词：铜离子单克隆抗体间接竞争化学发光酶联免疫

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FGF2人源化单抗E12及其联合顺铂/紫杉醇体外抑制乳腺癌细胞增殖作用的研究

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中国免疫学杂志 2018年第8期34卷 1187-1194页

作者：张宇黄建芳徐萌王宏向军俭暨南大学抗体工程研究中心生命科学技术学院生物工程学系广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632 暨南大学附属第一医院肿瘤科广州510630

目的:研究人源化FGF2单抗体E12体外联合化疗药物抑制乳腺癌肿瘤细胞增殖的作用。方法:分析人源化FGF2单抗可变区人源氨基酸序列比率;SDS-PAGE和HPLC检测单抗纯度;ELISA测定单抗效价;BSA法检测单抗浓度;CCK-8法检测单抗联合化疗药物对乳... 详细信息

目的:研究人源化FGF2单抗体E12体外联合化疗药物抑制乳腺癌肿瘤细胞增殖的作用。方法:分析人源化FGF2单抗可变区人源氨基酸序列比率;SDS-PAGE和HPLC检测单抗纯度;ELISA测定单抗效价;BSA法检测单抗浓度;CCK-8法检测单抗联合化疗药物对乳腺癌肿瘤细胞株的细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测FGF2单抗联合化疗药物对乳腺癌细胞株的促凋亡作用;使用Discovery Studio 4.5软件对单抗的表位进行分析。结果:单抗可变区人源氨基酸序列比率重链为98.89%,轻链为100.00%;单抗纯度为99.02%;单抗ELISA效价为1/243 000;单抗浓度为8.74 mg/ml;CCK-8结果表明顺铂为10、5、2.5、0.625μg/ml时,单抗+顺铂组比顺铂组对MCF-7细胞抑制率提高了14.5%、10.4%、1.5%、0.5%;对MDAMB453细胞抑制率提高了15.5%、14.8%、13.0%、6.8%,紫杉醇为1.0、0.1、0.01μg/ml时,单抗+紫杉醇组比紫杉醇组对MCF-7细胞抑制率提高了14.5%、11.1%、9.3%,紫杉醇为0.1、0.01、0.001μg/ml时,单抗+紫杉醇组比紫杉醇组对MDAMB453细胞的抑制率提高了18.6%、19.9%、6.8%;流式结果表明,单抗、紫杉醇及单抗+紫杉醇组的MCF-7细胞在Annexin V/PI双阳性区所占比例提高了6.13%、7.36%和12.83%,同理MDA-MB453细胞所占比例提高了4.86%、7.1%和14.1%,单抗、顺铂及单抗+顺铂组MCF-7细胞在Annexin V/PI双阳性区所占比例提高了6.39%、9.46%和17.76%,同理MDA-MB453细胞所占比例提高了5.38%、9.06%和19.39%;表位分析结果表明FGF2单抗有效封闭FGF2与受体结合的部分位点。结论:FGF2人源单抗E12人源化程度较高;FGF2人源化单抗联合化疗药物相对单药组可较明显地提高肿瘤细胞增殖抑制作用以及促细胞凋亡作用;本研究为FGF2抗体药物研发提供了前期基础。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子人源化单克隆抗体 E12 MCF-7 MDA-MB453 顺铂紫杉醇联合用药

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VEGF/bFGF复合多肽疫苗对雌性小鼠的毒性及其生殖的影响

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中国病理生理杂志 2015年第7期31卷 1184-1188页

作者：翁锐强潘磊彭卉彤吕成定邓宁暨南大学生命科学技术学院抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广东广州510632

目的:初步探究血管内皮生长因子(VEGF)/碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)复合多肽疫苗(VEGF/b FGF complex peptide vaccine,VBP3)对雌性小鼠的毒性及其生殖的影响。方法:通过镍离子亲和层析柱纯化VBP3蛋白,将纯化获得的VBP3免疫雌性BALB/... 详细信息

目的:初步探究血管内皮生长因子(VEGF)/碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)复合多肽疫苗(VEGF/b FGF complex peptide vaccine,VBP3)对雌性小鼠的毒性及其生殖的影响。方法:通过镍离子亲和层析柱纯化VBP3蛋白,将纯化获得的VBP3免疫雌性BALB/c小鼠,酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测小鼠血清抗体效价和特异性,监测亲本小鼠体重,测定亲本小鼠脏器重量并对小鼠脏器进行HE染色观察;将免疫小鼠与未免疫雄性小鼠交配后,测定F1代小鼠存活率、体重、相关脏器重量,并对相关脏器进行HE染色观察。结果:间接ELISA检测结果显示免疫小鼠血清中抗VEGF、抗b FGF抗体滴度分别为1∶3 000、1∶20 000,且免疫组F1代小鼠能检测出低滴度的抗b FGF抗体,但抗VEGF抗体不能检出。在小鼠生产率实验中,免疫组与对照组崽鼠数目未见明显差异,但免疫组F1代小鼠存活率较对照组降低(P<0.05)。在亲本小鼠中,免疫组小鼠各脏器重量与对照组比较均未有差异,而在F1代小鼠中,2个组别的小鼠肝脏重量存在差异,但其它脏器重量未有差异;HE染色显示,在亲本小鼠中,2个组别小鼠的各脏器形态未有明显差异;在F1代小鼠中,免疫组F1代小鼠的肝脏与对照组相比存在形态差异。结论:VEGF/b FGF复合多肽疫苗未对亲本小鼠主要脏器造成直接损伤,但对亲本小鼠的生殖及F1代小鼠健康具有一定的影响。

关键词：血管内皮生长因子碱性成纤维细胞生长因子多肽疫苗

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二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定

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免疫学杂志 2014年第6期30卷 550-559页

作者：张晋霞姜浩武亢中奎潘磊王金胜刘羿辰邓宁暨南大学生命科学技术学院暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中... 详细信息

目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化。间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用。结果成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1%甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L。SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合。CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,最大抑制率为43.4%。划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移。结论研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性。

关键词： bFGF ds—Diabody 毕赤酵母肺癌细胞

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VEGF/bFGF复合多肽抗体的制备及对卵巢癌细胞增殖抑制作用

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免疫学杂志 2014年第6期30卷 512-515,538页

作者：潘磊张晋霞王金胜翁锐强邓宁暨南大学生命科学技术学院抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632

目的研究VEGF/bFGF复合多肽(VBP3)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管新生和人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制的影响。方法通过镍离子柱亲和层析和离子交换层析方法纯化出诱导表达的VBP3蛋白,免疫Balb/c小鼠制备抗bFGF和抗VEGF的多克隆抗体,... 详细信息

目的研究VEGF/bFGF复合多肽(VBP3)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管新生和人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制的影响。方法通过镍离子柱亲和层析和离子交换层析方法纯化出诱导表达的VBP3蛋白,免疫Balb/c小鼠制备抗bFGF和抗VEGF的多克隆抗体,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测抗体效价和特异性。成管试验研究抗体对HUVEC细胞的成管影响,CCK-8检测抗体对SKOV3增殖抑制的影响。Western blot检测抗体对bFGF和VEGF下游信号通路中Erk1/2和Akt磷酸化的影响。结果 SDS-PAGE鉴定出了纯度较高的VBP3蛋白;ELISA方法检测出了高滴度的抗体;HUVEC的成管实验结果表明VBP3多克隆抗体在一定程度上抑制了HUVEC的成管;CCK-8检测出抗体体外抑制了SKOV3细胞增殖,在抗体质量浓度为100μg/ml时抑制率达到39.20%。Western blot结果表明抗bFGF和抗VEGF多克隆抗体显著抑制FGFR和VEGFR下游信号通路中Erk1/2和Akt的磷酸化。结论 VBP3可能作为一种多肽疫苗抑制肿瘤的生长。

关键词： bFGF VEGF 复合多肽血管新生增殖抑制

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人源性EGFL6的重组表达及多克隆抗体制备研究

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免疫学杂志 2013年第6期29卷 517-521,526页

作者：杨晶王金胜张辉挺王宏宋其芳黄建芳邓宁暨南大学生命科学技术学院暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632 暨南大学附属第一医院肝胆外科广州510000

目的研究发现人源性类表皮生长因子域EGFL6可促进组织血管新生并在肿瘤组织细胞中表达上调,预示其与肿瘤发生发展密切相关,本研究通过对EGFL6基因克隆,表达和纯化并制备其多克隆抗体,为深入研究EGFL6相关功能奠定基础。方法用实时荧光定... 详细信息

目的研究发现人源性类表皮生长因子域EGFL6可促进组织血管新生并在肿瘤组织细胞中表达上调,预示其与肿瘤发生发展密切相关,本研究通过对EGFL6基因克隆,表达和纯化并制备其多克隆抗体,为深入研究EGFL6相关功能奠定基础。方法用实时荧光定量PCR方法检测肿瘤及正常组织细胞系中EGFL6基因表达水平,并扩增EGFL6基因片段,采用基因重组技术构建EGFL6原核表达载体,经诱导表达后利用镍离子柱亲和纯化EGFL6重组蛋白,免疫昆明小鼠制备抗EGFL6多克隆抗体,ELISA、Western blot方法检测抗体灵敏度和特异性。结果 RT-PCR检测发现EGFL6在肿瘤细胞系A375及SKOV3中高表达。成功构建表达载体pET32a(+)-EGFL6,实现可溶性EGFL6蛋白的诱导表达,纯化和抗体制备。SDS-PAGE和Western blot证实,重组EGFL6蛋白质与预期结果一致,抗血清能够特异地识别重组片段蛋白,重组全长蛋白及细胞系中天然EGFL6蛋白。结论 qRT-PCR检测得知EGFL6在肿瘤细胞系A375及SKOV3中表达量较高,并成功实现了EGFL6的重组表达,抗体制备及初步应用研究。

关键词：肿瘤细胞 EGFL6 实时荧光定量RT—PCR 重组表达多克隆抗体

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