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眼科研究 2010年第5期28卷 416-419页

作者：唐光霞陈建苏徐锦堂吴连胜潘红卫林熙唐建军暨南大学医学院眼科研究所广州510632 温州市龙湾区第一人民医院眼科 325024 暨南大学医学院药理学系广州510632 暨南大学医学院生理学系广州510632

目的观察房水对角膜基质细胞生长的作用。方法将新西兰大白兔的角膜去除后弹力层、内皮层和上皮层后,得到基质层,用组织块培养法体外培养角膜基质细胞。在实验组的培养基中加入10%房水,对照组使用常规培养基培养。通过CCK8实验测得角膜... 详细信息

目的观察房水对角膜基质细胞生长的作用。方法将新西兰大白兔的角膜去除后弹力层、内皮层和上皮层后,得到基质层,用组织块培养法体外培养角膜基质细胞。在实验组的培养基中加入10%房水,对照组使用常规培养基培养。通过CCK8实验测得角膜基质细胞的吸光度(A)值以分析细胞增生的情况。分别在培养基中加入2.5%、5%、10%、15%、20%的房水,用明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(MMPs)的活性。结果倒置显微镜观察可见培养的角膜基质细胞呈多角形或树枝状,与对照组相比,实验组的细胞生长状态良好,培养的角膜基质细胞数量明显增加。明胶酶谱法显示实验组的条带比对照组清晰。实验第1～5天分别测角膜基质细胞的A值,实验组的检测条带明显强于对照组,>10%的房水培养组检测的条带明显强于2.5%、5%房水培养组。CCK8检测表明,培养1～5d实验组的角膜基质细胞A值明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论房水作用于角膜基质细胞后,可促进角膜基质细胞的生长,10%房水对体外培养角膜细胞有促细胞增生的作用。

关键词：房水角膜基质细胞细胞培养

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兔角膜重度碱烧伤后异种猫前板层角膜移植重建角膜眼表

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眼科新进展 2010年第2期30卷 105-108,114页

作者：吴连胜陈建苏徐锦堂丁勇唐光霞郑佩娥雷自鸣暨南大学医学院眼科研究室再生医学教育部重点实验室广东省广州市510632 暨南大学附属第一临床医学院眼科广东省广州市510632 暨南大学医学院病理教研室广东省广州市510632 侏罗纪生化有限公司广东省恩平市529458 浙江省温州市龙湾区第一人民医院眼科

目的研究猫新鲜前板层角膜移植治疗兔右眼角膜重度碱烧伤的疗效。方法将16只5个月龄的健康雄性新西兰白兔右眼制作重度角膜碱烧伤模型,随机分成A、B两组,每组各8只兔,其中A组为猫(4只)→兔异种前板层角膜移植组,植片直径为11.0mm,植床... 详细信息

目的研究猫新鲜前板层角膜移植治疗兔右眼角膜重度碱烧伤的疗效。方法将16只5个月龄的健康雄性新西兰白兔右眼制作重度角膜碱烧伤模型,随机分成A、B两组,每组各8只兔,其中A组为猫(4只)→兔异种前板层角膜移植组,植片直径为11.0mm,植床直径为10.0mm;B组未行手术。A组兔术后及B组造模后用500g.L-1葡萄糖及复方氯霉素滴术眼直至处死,记录两组疗效指数,并分别于术后1个月、2个月、3个月取材进行术眼角膜病理学及扫描电镜检查。结果3个月内A组8只角膜碱烧伤兔经异种猫前板层角膜移植后,7只移植角膜保持透明,1只出现局限性角膜混浊和角膜新生血管;而B组未手术的8只兔中出现角膜白斑、新生血管4只,角膜溃疡、穿孔3只,角膜溶解穿孔1只,并且有4只发生睑球粘连等并发症。A、B两组治疗后1个月、2个月、3个月平均疗效指数差异均有统计学意义(均为P<0.05)。A组透明角膜中组织学及扫描电镜下的结构特征清晰;B组兔角膜中有明显的角膜水肿和炎性细胞浸润,组织学及扫描电镜下的结构特征显示细胞连接混乱、消失。B组扫描电镜还提示随着时间的延长,上皮细胞部分生长、增多,细胞连接差,角膜上皮排列紊乱;角膜内皮细胞数量明显减少或无,细胞连接混乱、消失。结论用异种猫新鲜前板层材料对重度兔碱烧伤角膜进行板层移植手术治疗在一定程度上可减轻伤后炎症反应,防止严重并发症的发生,维持眼表结构并可达到一定的光学治疗效果。

关键词：异种角膜移植前板层角膜移植角膜碱烧伤兔猫

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猫角膜内皮中央与周围部端粒酶活性比较及其与增生潜能关系的研究

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眼科新进展 2009年第5期29卷 333-335页

作者：何文婷吴静侯光辉陈剑徐锦堂暨南大学附属第一临床医学院眼科广东省广州市510632 暨南大学医学院眼科研究室广东省珠海市人民医院眼科 519000

目的比较不同年龄猫角膜内皮周围部和中央部的增生潜能。方法实验所用眼球取自不同年龄猫进行分组:幼年猫组(18个月龄)各7只,每只猫均取一只眼球作中央部和外周部的分离,其角膜用9.5mm直径环钻分离巩膜组织,6.0mm直径环钻分离中央部和... 详细信息

目的比较不同年龄猫角膜内皮周围部和中央部的增生潜能。方法实验所用眼球取自不同年龄猫进行分组:幼年猫组(<6个月龄)和成年猫组(>18个月龄)各7只,每只猫均取一只眼球作中央部和外周部的分离,其角膜用9.5mm直径环钻分离巩膜组织,6.0mm直径环钻分离中央部和周围部,然后完整撕取带有角膜内皮细胞的后弹力层,根据每眼角膜取材部位不同分为周围部组和中央部组。用实时荧光定量PCR检测端粒酶活性,探讨角膜内皮中央部与周围部增生潜能是否存在差异。结果经实时荧光定量PCR检测猫角膜内皮周围部组和中央部组端粒酶表达,组间比较差异有显著统计学意义(F=58.510,P=0.000),周围部组高于中央部组,中央部组仅有微量表达。成年猫组和幼年猫组比较差异无统计学意义(F=6.210,P=0.028),即端粒酶活性表达不受年龄因素影响。结论猫角膜内皮周围部具有增生潜能,且其增生能力不受年龄因素影响。

关键词：角膜内皮端粒酶活性增生中央部周围部猫

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异种全厚板层角膜和前板层角膜植片板层移植术后拆线时间探讨

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眼科新进展 2009年第3期29卷 165-169页

作者：吴连胜陈建苏徐锦堂丁勇郑佩娥暨南大学医学院眼科研究室再生医学教育部重点实验室广东省广州市510630 暨南大学附属第一临床医学院眼科暨南大学医学院病理教研室东莞市凤岗镇雁田广济医院眼科

目的研究全厚板层和前板层角膜移植后不同的角膜缝线拆除时间对植片的影响。方法将32只健康新西兰白兔随机分成4组,每组各8只:A组、B组(A、B2组又合为M组)为猫→兔异种全厚板层移植组。C组、D组(C、D2组又合为N组)为猫→兔异种前板层移... 详细信息

目的研究全厚板层和前板层角膜移植后不同的角膜缝线拆除时间对植片的影响。方法将32只健康新西兰白兔随机分成4组,每组各8只:A组、B组(A、B2组又合为M组)为猫→兔异种全厚板层移植组。C组、D组(C、D2组又合为N组)为猫→兔异种前板层移植组。术眼为右眼,植片直径为9.0mm,植床直径为8.0mm。A、C2组拆线时间为10d(A、C2组又合为G组),B、D2组拆线时间为1个月(B、D2组又合为H组)。观察时间为3个月。结果用两因素方差分析法分析3个月时的炎性反应指数:(1)角膜植片M组(2.560±2.065)与N组(5.250±2.887)比较差异有显著统计学意义(F=15.427,P=0.001<0.05),即M组炎性反应较轻;(2)拆线时间G组(2.560±2.128)与H组(5.250±2.840)比较差异有显著统计学意义(F=15.427,P=0.001<0.05),即G组炎性反应较轻;(3)角膜植片差异联合拆线时间差异:F=7.017,P=0.013<0.05,差异有统计学意义,即角膜植片差异和拆线时间之间存在交互影响角膜移植炎性反应作用。结论角膜植片差异和拆线时间差异均存在影响异种角膜移植炎性反应的作用,并且二者存在交互作用。

关键词：炎性反应指数异种角膜移植全厚板层角膜移植前板层角膜移植高渗葡萄糖角膜水肿兔猫

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脱细胞角膜材料的生物相容性研究

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眼科研究 2009年第5期27卷 359-363页

作者：吴连胜陈建苏徐锦堂丁勇郑佩娥徐国风黄慧研暨南大学医学院眼科研究室再生医学教育部重点实验室广州510632 东莞市凤岗镇雁田广济医院 523690 暨南大学附属第一临床医学院眼科广州510632 暨南大学医学院病理教研室广州510632 广东冠昊生物科技有限公司广州510632

目的研究异种脱细胞猫角膜板层角膜移植术后的组织相容性。方法24只18周龄的健康新西兰白兔随机平均分成3组:A组为脱细胞猫角膜材料→兔板层移植组,B组为猫→兔异种新鲜角膜植片板层移植组,C组为兔→兔同种异体新鲜角膜植片板层移植组... 详细信息

目的研究异种脱细胞猫角膜板层角膜移植术后的组织相容性。方法24只18周龄的健康新西兰白兔随机平均分成3组:A组为脱细胞猫角膜材料→兔板层移植组,B组为猫→兔异种新鲜角膜植片板层移植组,C组为兔→兔同种异体新鲜角膜植片板层移植组。用扫描电镜观察术后不同时期术眼角膜的组织病理学改变,抽取兔血测定CD4+/CD8+T细胞百分比。结果术后1个月3个组间角膜植片炎症反应指数组间比较差异均无统计学意义;2个月A组与B组、A组与C组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3个月A组与B组、A组与C组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3个组间术后同期7、15、30d兔外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞活化率差异均无统计学意义(P>0.05)。组织切片显示术后3个月内,B、C两组角膜植片炎症反应轻,植片内皮细胞吸收,组织结构基本正常。A组角膜植片炎症反应显著,结构较紊乱,新生血管增生。扫描电镜可见B、C2组角膜上皮结构基本正常,细胞连接较好。A组扫描电镜可见有上皮缺损。结论脱细胞处理的异种猫角膜移植后生物相容性较新鲜角膜差,免疫反应无显著差异。

关键词：角膜脱细胞生物材料板层角膜移植异种角膜移植免疫反应

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在旋转培养系统中构建组织工程角膜基质

在旋转培养系统中构建组织工程角膜基质

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中华医学会第十四次全国眼科学术大会

作者：李晓霞陈建苏暨南大学医学院眼科研究室暨南大学第一临床医学院暨南大学教育部再生医学重点实验室 510630

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模拟微重力条件下兔角膜基质细胞在复合材料上的三维培养

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眼科研究 2008年第4期26卷 241-244页

作者：李晓霞陈建苏李沁华郑佩娥吴连胜暨南大学医学院眼科研究室第一临床医学院眼科广州510632

目的探讨在模拟微重力条件下兔角膜基质细胞在复合材料上的三维生长特性,为构建组织工程角膜提供新的途径。方法Ⅱ型胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞,以密度为1×105/mL将第5代细胞种植于无菌复合载体材料上。以模拟微重力条件... 详细信息

目的探讨在模拟微重力条件下兔角膜基质细胞在复合材料上的三维生长特性,为构建组织工程角膜提供新的途径。方法Ⅱ型胶原酶消化法获取原代兔角膜基质细胞,以密度为1×105/mL将第5代细胞种植于无菌复合载体材料上。以模拟微重力条件下培养兔角膜基质细胞为实验组与传统静态培养系统进行细胞培养作对照。分别在6、12、18d取细胞和载体行苏木精-伊红染色光镜观察和扫描电镜观察;在3、6、9、12、15、18d取出行CCK-8法检测细胞增生功能。结果对照组只在材料表面可见单层细胞;实验组大量细胞与载体黏附紧密且生长入载体内部,载体材料降解显著。扫描电镜下实验组可见细胞胞体小且突触丰富,培养第18d细胞在材料表面分泌大量胶原膜样物;模拟微重力系统促进了细胞增生(P=0.004)。结论模拟微重力环境中在复合材料上培养的兔角膜基质细胞接近生理状态,更适用于组织工程三维构建,为构建更接近生理状态的组织工程角膜提供了依据。

关键词：模拟微重力基质细胞组织工程角膜

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低能量激光对体外培养的兔角膜内皮细胞超微结构的影响

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广东医学 2007年第4期28卷 507-509页

作者：刘存宁吴静徐锦堂陈建苏潘红卫赵松滨暨南大学附属第一医院眼科广州510632 暨南大学医学院眼科研究所广州510632

目的观察低能量激光照射对体外培养的兔角膜内皮细胞超微结构的影响。方法传代的兔角膜内皮细胞分为两组:一组为处理组,采用低能量激光照射,1次/d,连续7d;另外一组为对照组,不行激光照射。通过扫描电镜及透射电镜等检测观察兔角膜内皮... 详细信息

目的观察低能量激光照射对体外培养的兔角膜内皮细胞超微结构的影响。方法传代的兔角膜内皮细胞分为两组:一组为处理组,采用低能量激光照射,1次/d,连续7d;另外一组为对照组,不行激光照射。通过扫描电镜及透射电镜等检测观察兔角膜内皮细胞经激光照射前后形态学超微结构的变化。结果扫描电镜和透射电镜检测表明,与对照组相比,激光照射组内皮细胞表面可见丰富的微绒毛,细胞核较大,细胞核膜结构清晰,核仁明显且数目较多,染色质丰富,胞浆内细胞器发达。结论角膜内皮细胞经低能量激光照射后的超微结构变化表明其增殖活性提高。

关键词：低能量激光角膜内皮细胞超微结构增殖活性

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L-精氨酸对兔右冠状动脉缺血再灌注所致心律失常的影响

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中国病理生理杂志 2005年第6期21卷 1094-1096页

作者：王庆志朱晓谦李彦杨皓庄原林第一军医大学人体解剖学教研室广东广州510515 暨南大学医学院眼科研究所广东广州510632 暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632

目的:观察右冠状动脉缺血再灌注(IR)致心律失常的演变及L-Arg的干预效果。方法:采用在体兔右冠状动脉缺血再灌注模型,48只兔分为4组:IRa组(缺血30min再灌注120min),IRb组(缺血120min再灌注120min),IRa+L-Arg组,IRb+L-Arg组;每组12只。... 详细信息

目的:观察右冠状动脉缺血再灌注(IR)致心律失常的演变及L-Arg的干预效果。方法:采用在体兔右冠状动脉缺血再灌注模型,48只兔分为4组:IRa组(缺血30min再灌注120min),IRb组(缺血120min再灌注120min),IRa+L-Arg组,IRb+L-Arg组;每组12只。记录心电图,计算心律失常评分及与时间依赖关系并分析L-Arg干预效果。结果:①随右冠状动脉结扎时间延长,各组心律失常分数逐渐呈上升趋势,出现不同程度的房室传导阻滞、窦性及房性心律失常并逐渐加重;②再灌注期:房室传导阻滞发生次数减少,且由Ⅲ度→Ⅱ度→Ⅰ度→正常,窦性和房性心律失常逐渐恢复窦性心律;IRa组心律失常评分显著低于IRb组相同再灌注时段(P<0.01);③IRa+L-Arg组和IRb+L-Arg组再灌注心律失常分数分别明显低于IRa和IRb组相同再灌注时段(P<0.01);④IRa+L-Arg组心律失常评分明显低于IRb+L-Arg组(P<0.01)。结论:补充适量的L-Arg具有抗因右冠状动脉缺血所致的心律失常作用;缺血期时间越长,L-Arg抗再灌注心律失常作用越差。

关键词：缺血再灌注心律失常精氨酸冠状血管兔

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晶状体上皮细胞端粒酶活性及细胞衰老的实验研究

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眼科研究 2005年第6期23卷 607-609页

作者：郭海科金海鹰王丽娅张洪洋杨鑫金海燕广东省人民医院眼科广州510080 河南省眼科研究所郑州450003 郑州大学第一附属医院眼科 450052 暨南大学医学院广州510632

目的明确晶状体上皮细胞(LEC)是否存在端粒酶活性表达;研究端粒酶活性的变化与LEC衰老的关系,为探讨年龄相关性白内障的发生机制提供理论依据.方法体外培养兔LEC并传代.以端粒重复扩增-免疫酶标(TRAP-ELISA)试剂盒检测细胞端粒酶活性;... 详细信息

目的明确晶状体上皮细胞(LEC)是否存在端粒酶活性表达;研究端粒酶活性的变化与LEC衰老的关系,为探讨年龄相关性白内障的发生机制提供理论依据.方法体外培养兔LEC并传代.以端粒重复扩增-免疫酶标(TRAP-ELISA)试剂盒检测细胞端粒酶活性;对各代细胞进行β-半乳糖苷酶组织化学染色检测衰老细胞,计算衰老细胞百分数.结果兔LEC存在端粒酶活性表达,在体外培养、传代过程中端粒酶活性逐渐减弱,至第4代低于检测水平,活体、原代、第1、2、3代的端粒酶活性分别为:0.46±0.046,0.32±0.026,0.25±0.029,0.19±0.019,0.11±0.038;衰老细胞随细胞的传代增加,活体与原代培养的LEC未发现衰老现象,第1～9代衰老细胞百分数(%)分别为:(0.98±0.39)、(4.93±1.35)、(11.08±1.69)、(24.98±3.55)、(33.89±3.74)、(41.17±5.24)、(51.75±8.32)、(73.00±5.98)、(77.00±14.18).结论LEC存在端粒酶活性表达,端粒酶活性的变化与LEC的衰老有关,可能在年龄相关性白内障发生的病理生理过程中发挥重要作用.

关键词： LEC 端粒酶活性细胞衰老

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