检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2006年第10期22卷 2066-2070页

作者：熊盛邢少璟钱垂文王一飞暨南大学药学院制药工程教研室暨南大学生物医药研究开发基地广东广州510632

Human Nm23 family consists of eight gene products that have been implicated in cellular differentiation,development and apoptosis,as well as oncogenesis and tumor *** protein products of Nm23 are nucleoside diphosphate kinases(NDPKs),the key metabolic enzymes that catalyze the synthesis of nucleoside triphosphates(NTP) by transfer of the terminal phosphate between NDP and *** investigations are focused on the extraordinary pleiotropy and its mechanism of Nm23/*** this article,we review the recent progress in studies of the mechanism of Nm23/NDPK as metastasis suppressors,and other bioactivities of NDPK out of phosphate transfer enzyme,as well as the character of NDPK’s quaternary structure and the relation between its structure and *** addition to these,the potential applications of NDPK as an enhancer of antiviral drugs or Nm23 as a drug target were also *** herein summarized provide new and intriguing suggestions for a more extensive understanding of the biological functions of the star molecule,Nm23/NDPK.

关键词：基因,Nm23 核苷二磷酸激酶

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50L规模中试发酵重组核苷二磷酸激酶A工程菌

50L规模中试发酵重组核苷二磷酸激酶A工程菌

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2006中国科协年会

作者：熊盛钱垂文黄立刘秋英张美英王一飞暨南大学药学院制药工程教研室暨南大学药学院制药工程教研室暨南大学生物医药研究开发基地暨南大学生物医药研究开发基地暨南大学生物医药研究开发基地暨南大学生物医药研究开发基地

中试规模生产重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)。摇瓶培养一级种子至OD600为5.0～5.5,以10%的比例接种二级种子培养基,在7L发酵罐中培养至OD600为9.6～10.5,然后转入80L发酵罐中进行补料分批培养,所得菌体经过高压匀浆后,微滤去除菌体残... 详细信息

中试规模生产重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)。摇瓶培养一级种子至OD600为5.0～5.5,以10%的比例接种二级种子培养基,在7L发酵罐中培养至OD600为9.6～10.5,然后转入80L发酵罐中进行补料分批培养,所得菌体经过高压匀浆后,微滤去除菌体残渣, 所得样品超滤浓缩后经离子交换层析和亲和层析两步纯化得重组蛋白制品。结果表明,50L培养液经过10h培养后,湿菌收量为31.27 g/L,1560 g/批,NDPK-A表达量为23.8%。另外,补料方式对发酵密度有明显影响。与单纯补加碳源相比,同时补加碳源和氮源可以显著提高菌体产量,但对目的蛋白表达量的提高不明显。在较优条件下,菌体密度为(38.30±0.28)OD600,菌体产量为(2220.00±169.71)g/批、(44.4±3.4)g/L,蛋白表达量为(22.00±0.42)%。中试规模制备重组rhNDPK-A为NDPK-A的基础研究和新药开发奠定了物质基础。

关键词：发酵工程核苷二磷酸激酶中试纯化

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50L规模中试发酵重组核苷二磷酸激酶A工程菌

50L规模中试发酵重组核苷二磷酸激酶A工程菌

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2006年全国生化与生物技术药物学术年会

中试规模生产重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)。摇瓶培养一级种子至OD600为5．0-5．5, 以10％比例接种二级种子培养基,在7L发酵罐中培养至OD600为9．6～10．5,然后转入80L发酵罐中进行补料分批培养,所得菌体经过高压匀浆后,微滤去除菌... 详细信息

中试规模生产重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)。摇瓶培养一级种子至OD600为5．0-5．5, 以10％比例接种二级种子培养基,在7L发酵罐中培养至OD600为9．6～10．5,然后转入80L发酵罐中进行补料分批培养,所得菌体经过高压匀浆后,微滤去除菌体残渣,所得样品超滤浓缩后经离子交换层析和亲和层析两步纯化得重组蛋白制品。结果表明,50L培养液经过10h培养后,湿菌收量为31．27g/L,1560g/批,NDPK-A表达量为23．8％。另外,补料方式对发酵密度有明显影响。与单纯补加碳源相比,同时补加碳源和氮源可以显著提高菌体产量,但对目的蛋白表达量地提高不明显．在较优条件下,菌体密度为(38.30±0．28)OD600,菌体产量为(2220．00±169．71)g/批(44．4±3．4)g／L, 蛋白表达量为(22．00±0．42)％。中试规模制备重组rhNDPK-A为NDPK-A的基础研究和新药开发奠定了物质基础。

关键词：核苷二磷酸激酶 DNA重组中试发酵纯化

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含有纯化标签的重组人表皮生长因子的构建及表达

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中国卫生检验杂志 2006年第10期16卷 1153-1155,1174页

作者：熊盛陈宇霞钱垂文黄立张美英黄文韬王一飞暨南大学药学院制药工程教研室广州510630 暨南大学生物医药研究开发基地广州510630 中科院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 2004级研究生上海200031

目的:高效表达和制备有活性的人表皮生长因子(hum an ep iderm al growth factor,hEGF)。方法:用DNA重组技术构建EGF基因并插入表达载体pQE-40,与载体上的6×H is标签融合,获得的表达质粒pQE-EGF转化***15[pREP4],得工程菌M15[pQE-E... 详细信息

目的:高效表达和制备有活性的人表皮生长因子(hum an ep iderm al growth factor,hEGF)。方法:用DNA重组技术构建EGF基因并插入表达载体pQE-40,与载体上的6×H is标签融合,获得的表达质粒pQE-EGF转化***15[pREP4],得工程菌M15[pQE-EGF]。MTT法测定活性,培养工程菌M15[pQE-EGF]并诱导目的蛋白表达,镍离子螯合亲和层析纯化重组EGF。结果:所构建的EGF序列正确,重组EGF在大肠杆菌中以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的21.2%,经镍离子亲和层析一步纯化后的重组EGF纯度达90%,得率为94%。复性后的重组EGF具有促Hela细胞生长活性。结论:以***15[pREP4]/pQE-40系统表达EGF具有技术路线简单、目的蛋白得率高、成本低等优点,是一种制备活性hEGF的有效手段。

关键词：人表皮生长因子纯化标签镍离子螯和亲和层析 Hela细胞

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核苷二磷酸激酶A的异构及其分子机制

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第6期21卷 815-821页

作者：熊盛钱垂文王一飞黄立李久香严玖凤王小宁张晓伟毕志刚暨南大学药学院制药工程教研室暨南大学生物医药研究开发基地广州510630 北京凯正生物工程发展有限责任公司北京100850

对核苷二磷酸激酶A(NDPKA)的异构及其分子机制进行研究.还原和非还原SDSPAGE观察重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPKA)的异构;RPHPLC分析rhNDPKA异构体的反相色谱行为,并测定rhNDPKA异构体的酶活性;多角度激光散射法测定rhNDPKA异构体在溶液... 详细信息

对核苷二磷酸激酶A(NDPKA)的异构及其分子机制进行研究.还原和非还原SDSPAGE观察重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPKA)的异构;RPHPLC分析rhNDPKA异构体的反相色谱行为,并测定rhNDPKA异构体的酶活性;多角度激光散射法测定rhNDPKA异构体在溶液中的表观分子量;飞行质谱分析异构体的质量肽谱.结果发现,rhNDPKA在非还原SDSPAGE上表现为4条带,对应于NDPKA的氧化型、还原型、氧化型二聚体和还原型二聚体,其分子量分别为18.1kD、21.3kD、35.2kD和***发现,还原型rhNDPKA和氧化型rhNDPKA疏水性有差异.新鲜制备的rhNDPKA在纯水溶液中,经空气氧化后,逐渐由还原型向氧化型过渡,而还原剂或生理盐水可使rhNDPKA稳定于还原型或氧化型.酶活测定结果表明,还原型rhNDPKA比活性为1965±166Umg,氧化型rhNDPKA比活性为974±53Umg.多角度激光散射检测发现,还原型rhNDPKA在溶液中仍可形成六聚体.质量肽谱结果证明,在氧化型rhNDPKA中,C4和C145位巯基形成二硫键,而C109位巯基游离存在.根据本文所确定的NDPKA单体中的二硫键位置,推导出rhNDPKA单体异构体和二聚体异构体的变构原理,这为进一步研究NDPKA的多能性调节机制打下了良好基础.

关键词：核苷二磷酸激酶A 异构多角度激光散射飞行质谱二硫键分子机制

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核苷二磷酸激酶A的异构及机制研究

核苷二磷酸激酶A的异构及机制研究

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中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会

作者：熊盛钱垂文王一飞黄立严玖凤王小宁张晓伟毕志刚暨南大学药学院制药工程教研室暨南大学生物医药研究开发基地暨南大学药学院制药工程教研室暨南大学生物医药研究开发基地暨南大学药学院制药工程教研室暨南大学生物医药研究开发基地暨南大学药学院制药工程教研室暨南大学生物医药研究开发基地北京凯正生物工程发展有限责任公司北京凯正生物工程发展有限责任公司北京凯正生物工程发展有限责任公司北京凯正生物工程发展有限责任公司

前言:核苷二磷酸激酶(NDPK)的研究历史可以追溯到50年前,作为一种管家酶,NDPK的首要功能是通过催化NDP和NTP之间的磷酸基转移反应来维持细胞内的NTP浓度。近年来的研究发现, NDPK可以调节细胞增殖、分化、发育和凋亡。尤其是NDPK-A,199... 详细信息

前言:核苷二磷酸激酶(NDPK)的研究历史可以追溯到50年前,作为一种管家酶,NDPK的首要功能是通过催化NDP和NTP之间的磷酸基转移反应来维持细胞内的NTP浓度。近年来的研究发现, NDPK可以调节细胞增殖、分化、发育和凋亡。尤其是NDPK-A,1990年发现NDPK-A由抑癌基因 nm23-H1编码,与多种肿瘤的转移负相关。自此,NDPK-A倍受关注,研究其多能性的调控基础对于揭示肿瘤的侵袭和转移机理有重要意义。

关键词：核苷二磷酸激酶机制研究

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