检索结果-内蒙古大学图书馆

生理学报 2009年第5期61卷 485-492页

作者：和树同朱林燕杨林杰何斯纯毛建文王立伟陈丽新暨南大学医学院生理学系广州510632 暨南大学医学院药理学系广州510632 广东药学院生物学教研室广州510006

本研究采用膜片钳全细胞记录技术记录低渗诱发的人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)钾电流,用图像分析技术测量细胞容积,探讨不同类型K+通道在调节性容积回缩(regulatory volume decrease,RVD)中的作用。结果显示,细胞外灌流160mOsm/L低渗液诱... 详细信息

本研究采用膜片钳全细胞记录技术记录低渗诱发的人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)钾电流,用图像分析技术测量细胞容积,探讨不同类型K+通道在调节性容积回缩(regulatory volume decrease,RVD)中的作用。结果显示,细胞外灌流160mOsm/L低渗液诱发CNE-2Z细胞产生容积激活性钾电流和RVD,中等电导钙依赖性钾通道阻断剂clotrimazole(100μmol/L)几乎完全抑制低渗诱发的钾电流和RVD。去除细胞外液的Ca2+后,低渗刺激不能诱发钾电流,RVD显著减弱。电压依赖性钾通道阻断剂4-aminopyridine(4-AP,5mmol/L)部分抑制低渗诱发的钾电流。上述结果提示,钙依赖性钾通道是低分化鼻咽癌细胞容积激活性钾通道的主要类型;钙依赖性钾通道在鼻咽癌细胞RVD中发挥了关键性作用,而电压依赖性钾通道在其中起部分作用。

关键词：鼻咽肿瘤低渗溶液细胞大小钾离子通道

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3′-羟基葛根素对脂肪细胞3T3-L1胰岛素抵抗的影响及其机制研究

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中草药 2014年第16期45卷 2352-2357页

作者：王小康刘清霞叶开和魏崧丞马锦锦叶春玲暨南大学药学院药理学教研室广东广州510632 顺德区伍仲珮纪念医院广东佛山528300

目的探讨3′-羟基葛根素改善胰岛素抵抗的作用及其机制。方法采用MTT法检测3′-羟基葛根素对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响;油红O染色法检测其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。以地塞米松诱导分化成熟的脂肪细胞,建立胰岛素抵抗模型,分别... 详细信息

目的探讨3′-羟基葛根素改善胰岛素抵抗的作用及其机制。方法采用MTT法检测3′-羟基葛根素对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响;油红O染色法检测其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。以地塞米松诱导分化成熟的脂肪细胞,建立胰岛素抵抗模型,分别采用葡萄糖氧化酶法和比色法检测细胞培养上清液中葡萄糖消耗量和游离脂肪酸（FFA）生成量;实时荧光定量PCR法分析脂肪细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxysome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ）和蛋白酪氨酸磷酸酶1B（protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B）的基因表达。采用嵌合蛋白基因试验检测3′-羟基葛根素的PPARγ配体结合活性和比色法检测其对PTP1B酶活性的影响。结果与溶媒对照组相比,1～10μmol/L 3′-羟基葛根素显著促进3T3-L1前脂肪细胞增殖及细胞分化（P〈0.05、0.01）。与模型组相比,无论在基础状态还是胰岛素刺激状态,3′-羟基葛根素均能显著增加胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖利用率、减少FFA的产生（P〈0.05、0.01）;同时显著上调胰岛素抵抗脂肪细胞PPARγ基因的表达,但对PTP1B基因表达无明显影响（P〉0.05）。与溶媒对照组相比,3′-羟基葛根素在0.1、10.0μmol/L时能对PPARγ产生激活作用（P〈0.05、0.01）,但对PTP1B酶活性没有明显抑制作用（P〉0.05）。结论 3′-羟基葛根素能促进胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖利用、抑制FFA产生,从而改善胰岛素抵抗,其机制可能与上调PPARγ基因表达有关。

关键词： 3′-羟基葛根素 3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗过氧化物酶体增殖物激活受体γ 蛋白酪氨酸磷酸酶1B

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钙调蛋白N_2和C_2突变体载体的构建、表达纯化和鉴定

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中国医科大学学报 2017年第5期46卷 401-405页

作者：晏珊雷帅陈思充于佳慧祝旭东孙嘉瑶杜逸李墨唐子鉴郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

目的构建钙调蛋白(CaM)N_2和C_2突变体的表达性载体,表达纯化并进行活性鉴定,为进一步研究CaM与钙通道片段的相互作用奠定基础。方法将CaM的N-lobe和C-lobe的cDNA分别与相应的N-lobe和C-lobe的cDNA相连,制备N_2和C_2突变体的cDNA。将N_2... 详细信息

目的构建钙调蛋白(CaM)N_2和C_2突变体的表达性载体,表达纯化并进行活性鉴定,为进一步研究CaM与钙通道片段的相互作用奠定基础。方法将CaM的N-lobe和C-lobe的cDNA分别与相应的N-lobe和C-lobe的cDNA相连,制备N_2和C_2突变体的cDNA。将N_2和C_2的cDNA分别插入p GEX-6p-3载体,并将重组质粒转入*** BL21菌株,IPTG诱导转化成功的菌株表达GST融合蛋白,超声破碎法提取,GS-4B beads纯化,SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白相对分子质量及纯度,pull-down实验鉴定活性。结果酶切鉴定以及DNA测序结果证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE电泳图显示突变体蛋白纯度和浓度均较高;pulldown实验结果证明突变体蛋白有生理活性,能与钙通道片段结合。结论本研究成功构建了N_2和C_2表达质粒,并提取、纯化了有活性的钙调蛋白N_2和C_2突变体。

关键词：钙调蛋白 N-lobe C-lobe N2 C2 pull-down实验

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银杏叶提取物对体外培养大鼠肾成纤维细胞作用的实验研究

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中国实验诊断学 2010年第1期14卷 45-47页

作者：李相军王丹石艳苗春生孙波吉林大学药学院实验药理与毒理学教研室吉林长春130021

目的观察银杏叶提取物(ginkgobiobaextract,GBE)对大鼠肾间质成纤维细胞增殖能力的影响,及其对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾间质成纤维细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的抑制作用。方法取SD大鼠肾间质成纤... 详细信息

目的观察银杏叶提取物(ginkgobiobaextract,GBE)对大鼠肾间质成纤维细胞增殖能力的影响,及其对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾间质成纤维细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的抑制作用。方法取SD大鼠肾间质成纤维细胞进行体外培养并鉴定,以未处理细胞作为正常对照组(C),将AngII作为刺激因素,分别加入终浓度为0,25,50,100和200mg.L-1的GBE,采用MTT法检测GBE对各组细胞增殖能力的影响,RT-PCR检测各组细胞TGF-β1和CTGFmRNA表达。结果与正常对照组比较,AngⅡ刺激后使细胞增殖能力明显增强(P<0.05),AngⅡ的这种作用可被含GBE的培养液所抑制,且与GBE的浓度和培养时间有关;RT-PCR结果显示,AngⅡ组细胞TGF-β及CTGFmRNA表达量明显高于正常对照组(P<0.01),GBE则可以抑制AngⅡ诱导的TGF-β及CTGFmRNA表达量的上调(P<0.05,P<0.01)。结论银杏叶提取物能抑制大鼠肾成纤维细胞增殖,并且下调AngⅡ诱导的TGF-β及CTGFmRNA的过表达,这可能是银杏叶提取物防治肾纤维化的作用机制之一。

关键词：银杏叶提取物肾间质纤维化成纤维细胞

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钙调蛋白镁结合位点突变体载体的构建、表达纯化及鉴定

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中国医科大学学报 2016年第5期45卷 394-397页

作者：赵美眯李卓邵冬雪梁洪玥晏珊封瑞孙雪菲郭凤郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

目的构建钙调蛋白3种镁离子结合位点突变体的质粒载体,并进行表达纯化及鉴定,为深入研究钙调蛋白的生物学功能奠定基础。方法利用钙调蛋白cDNA进行点突变,制备3种镁离子结合位点突变的cDNA。将突变后的cDNA分别插入pGEX-6P-3载体,制备... 详细信息

目的构建钙调蛋白3种镁离子结合位点突变体的质粒载体,并进行表达纯化及鉴定,为深入研究钙调蛋白的生物学功能奠定基础。方法利用钙调蛋白cDNA进行点突变,制备3种镁离子结合位点突变的cDNA。将突变后的cDNA分别插入pGEX-6P-3载体,制备钙调蛋白突变体载体质粒。质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,培养大肠杆菌,并诱导GST融合蛋白表达。利用Glutathione-Sepharose 4B珠子和PreScission蛋白酶分离纯化蛋白。结果酶切鉴定和DNA测序证实成功构建钙调蛋白突变体质粒;表达纯化得到的钙调蛋白突变体经电泳图鉴定纯度较高,浓度约1.0mg/mL。结论本研究成功构建了钙调蛋白镁结合位点突变体融合蛋白原核表达质粒,分离纯化可获得较高浓度较高纯度的钙调蛋白突变体。

关键词：钙调蛋白突变体融合蛋白 pGEX-6P-3

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豚鼠钙调蛋白2基因编码区及3′端非编码区序列克隆

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中国医科大学学报 2015年第2期44卷 123-126页

作者：封瑞刘彦杨磊胡慧媛郭凤赵美眯赵金生郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

目的克隆豚鼠钙调蛋白2(Ca M2)基因编码区及3′端非编码区,为豚鼠Ca M基因功能等研究提供遗传学信息。方法以豚鼠心肌组织作为实验材料提取RNA,通过RT-PCR和3′-RACE PCR的方法扩增Ca M2的编码区和3′端非编码区序列,应用基因工程技术... 详细信息

目的克隆豚鼠钙调蛋白2(Ca M2)基因编码区及3′端非编码区,为豚鼠Ca M基因功能等研究提供遗传学信息。方法以豚鼠心肌组织作为实验材料提取RNA,通过RT-PCR和3′-RACE PCR的方法扩增Ca M2的编码区和3′端非编码区序列,应用基因工程技术插入克隆载体构建重组质粒后基因测序及分析。结果克隆出豚鼠Ca M2基因编码区450 bp序列和3′端非编码区660 bp序列。分析编码区序列所编码的氨基酸序列与其他种属其他亚型完全一致。而3′端非编码区与其他亚型的同源性较低。结论成功获得了豚鼠Ca M2基因编码区和3′端非编码区序列,为进一步研究Ca M2的基因功能及其在相关疾病中的作用奠定基础。

关键词：钙调蛋白基因克隆序列编码区

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氯化卡咪唑铵抑制钙调蛋白与心肌CaV1.2通道结合的作用

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中国医科大学学报 2022年第11期51卷 987-991页

作者：郝明杰孙伟楠苏敬阳郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

目的探讨钙调蛋白(CaM)拮抗剂氯化卡咪唑铵(CMZ)在不同浓度Ca^(2+)条件下,对CaM与心肌Ca_(V)1.2通道C末端CT1蛋白片段结合的抑制作用,为探究CaM拮抗剂调节细胞内Ca^(2+)浓度的作用机制以及临床应用提供理论基础。方法利用GST pulldown a... 详细信息

目的探讨钙调蛋白(CaM)拮抗剂氯化卡咪唑铵(CMZ)在不同浓度Ca^(2+)条件下,对CaM与心肌Ca_(V)1.2通道C末端CT1蛋白片段结合的抑制作用,为探究CaM拮抗剂调节细胞内Ca^(2+)浓度的作用机制以及临床应用提供理论基础。方法利用GST pulldown assay技术检测在不同Ca^(2+)浓度(100 nmol/L和10μmol/L)下,CMZ对CaM与CT1蛋白片段的结合的影响。用Scanwizard Bio系统扫描并数字化SDS-PAGE凝胶,用CS Analyzer软件定量灰度值,用SigmaPlot软件分析CaM与CT1蛋白片段结合的变化与趋势。结果与对照组相比,在100 nmol/L和10μmol/L Ca^(2+)浓度下,CMZ可显著抑制CaM与心肌Ca_(V)1.2通道CT1蛋白片段的结合,且结合具有CaM浓度依赖性和Ca^(2+)浓度依赖性。结论CaM拮抗剂CMZ通过抑制CaM与心肌Ca_(V)1.2通道C末端CT1片段的结合,调节Ca^(2+)通道活动。

关键词：钙调蛋白拮抗剂 Ca_(V)1.2通道 Ca^(2+)浓度心血管系统疾病

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CaM突变体质粒的构建、表达纯化及活性鉴定

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中国医科大学学报 2018年第2期47卷 97-101页

作者：苏敬阳王蓉蓉袁媛李松霖朱正南黄露婷封瑞邵冬雪孙雪菲郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

目的制备钙调蛋白(CaM)突变体CaM_(E141G)的融合蛋白质粒,并进行蛋白表达、提取纯化和活性鉴定。方法利用定点突变技术将野生型CaM的第141个氨基酸E(GAG)突变为G(GGG),再将突变体质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养后诱导其GST融... 详细信息

目的制备钙调蛋白(CaM)突变体CaM_(E141G)的融合蛋白质粒,并进行蛋白表达、提取纯化和活性鉴定。方法利用定点突变技术将野生型CaM的第141个氨基酸E(GAG)突变为G(GGG),再将突变体质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养后诱导其GST融合蛋白表达,GS-4B beads纯化,Pre Scission protease酶切GST标签,采用Bradford方法测定纯化后蛋白浓度,SDS-PAGE凝胶电泳检测CaM_(E141G)蛋白的相对分子量和纯度,pull-down实验鉴定纯化后蛋白的生物活性。结果提取纯化后的CaM_(E141G)蛋白具有较高的浓度和纯度,且能与心肌CaV1.2钙通道C末端的PreIQ蛋白片段结合,并具有CaM_(E141G)蛋白浓度依赖性,提示该蛋白具有与心肌CaV1.2钙通道结合的能力。结论成功构建了CaM_(E141G)融合蛋白质粒,并获得了纯化后的CaM_(E141G)蛋白,为深入研究CaM突变体在心肌CaV1.2钙通道中的调节作用及其与心血管系统疾病的关系奠定了基础。

关键词：钙调蛋白突变体质粒表达纯化 pull-down实验

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基于长QT综合征的钙调蛋白突变体CaM_(D130G)与心肌钠通道Na_(V)1.5 IQ基序的结合作用

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中国医科大学学报 2021年第3期50卷 193-197页

作者：张晓琳邵秀丽朱荣利张瑞佳郝丽英封瑞中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

目的制备并纯化心肌Na_(V)1.5通道IQ蛋白,探讨钙调蛋白(CaM)突变体CaM_(D130G)与IQ基序的结合作用,为后续体外实验明确长QT综合征的发病机制奠定基础。方法采用同源建模和蛋白对接的方法预测突变体CaM_(D130G)与IQ蛋白的结合,利用基因... 详细信息

目的制备并纯化心肌Na_(V)1.5通道IQ蛋白,探讨钙调蛋白(CaM)突变体CaM_(D130G)与IQ基序的结合作用,为后续体外实验明确长QT综合征的发病机制奠定基础。方法采用同源建模和蛋白对接的方法预测突变体CaM_(D130G)与IQ蛋白的结合,利用基因重组技术将重组质粒pGEX-6P-1/GST-IQ转化至原核表达载体大肠杆菌中,并诱导表达该蛋白,通过超声破碎方法提取蛋白并使用GS-4B孵育纯化IQ蛋白,SDS-PAGE确认蛋白的制备效果,Pull-down assay方法检测CaM_(D130G)与IQ蛋白的结合作用。结果蛋白对接结果显示,CaM/CaM_(D130G)和心肌Na_(V)1.5通道IQ蛋白建模成功且具有结合的可能性。SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,制备的心肌Na_(V)1.5通道IQ蛋白浓度和纯度均较高,且与CaM_(D130G)有很好的结合活性。结论本研究成功制备出浓度和纯度较高的心肌Na_(V)1.5通道的IQ蛋白,并探讨了CaM_(D130G)与心肌Na_(V)1.5通道IQ基序的结合作用。

关键词：长QT综合征钙调蛋白突变体心肌Na_(V)1.5

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心肌Cav1.2钙通道NT片段的提取纯化及其与CaM的相互作用

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中国医科大学学报 2017年第5期46卷 397-400页

作者：苏敬阳邵冬雪雷明康泽赵君方涵田郭凤赵美眯郝丽英封瑞中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

目的探讨心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段提取与纯化的方法,并研究其与CaM的相互作用。方法将NT的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导NT的GST融合蛋白表达,GS-4B be... 详细信息

目的探讨心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段提取与纯化的方法,并研究其与CaM的相互作用。方法将NT的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导NT的GST融合蛋白表达,GS-4B beads分离纯化,Pre Scission蛋白酶切除GST标签,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)检测蛋白纯度和相对分子质量。采用GST pull-down实验研究NT片段与Ca M的相互作用。结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得NT蛋白片段,且具有较高的纯度。GST pull-down实验结果显示NT可与Ca M结合,且具有浓度依赖性。结论本研究成功制备与纯化了心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段,为深入研究蛋白相互作用及NT的生物学功能奠定了基础。

关键词： NT 提取纯化 CaM GS Tpull-down实验

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