检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医科大学学报 2015年第2期44卷 123-126页

作者：封瑞刘彦杨磊胡慧媛郭凤赵美眯赵金生郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

目的克隆豚鼠钙调蛋白2(Ca M2)基因编码区及3′端非编码区,为豚鼠Ca M基因功能等研究提供遗传学信息。方法以豚鼠心肌组织作为实验材料提取RNA,通过RT-PCR和3′-RACE PCR的方法扩增Ca M2的编码区和3′端非编码区序列,应用基因工程技术... 详细信息

目的克隆豚鼠钙调蛋白2(Ca M2)基因编码区及3′端非编码区,为豚鼠Ca M基因功能等研究提供遗传学信息。方法以豚鼠心肌组织作为实验材料提取RNA,通过RT-PCR和3′-RACE PCR的方法扩增Ca M2的编码区和3′端非编码区序列,应用基因工程技术插入克隆载体构建重组质粒后基因测序及分析。结果克隆出豚鼠Ca M2基因编码区450 bp序列和3′端非编码区660 bp序列。分析编码区序列所编码的氨基酸序列与其他种属其他亚型完全一致。而3′端非编码区与其他亚型的同源性较低。结论成功获得了豚鼠Ca M2基因编码区和3′端非编码区序列,为进一步研究Ca M2的基因功能及其在相关疾病中的作用奠定基础。

关键词：钙调蛋白基因克隆序列编码区

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番石榴酸抗H_2O_2诱导的INS-1胰岛β细胞氧化损伤作用及其机制分析

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中国药学杂志 2015年第3期50卷 233-238页

作者：王婧茹叶开和吕艳青魏崧丞张晓琦叶文才叶春玲暨南大学药学院药理学教研室广州510632 瑞典卡罗林斯卡医学院瑞典斯德哥尔摩17177 暨南大学中药与天然药物研究所广州510632

目的考察番石榴酸(guavenoic acid,GA)对INS-1胰岛β细胞氧化损伤的作用。方法培养INS-1胰岛β细胞,给予番石榴酸0.3、1、3、10、30 nmol·L-1,并设空白对照组、溶媒对照组及阳性药组,药物作用时间均为48 h。650μmol·L-1H2O2... 详细信息

目的考察番石榴酸(guavenoic acid,GA)对INS-1胰岛β细胞氧化损伤的作用。方法培养INS-1胰岛β细胞,给予番石榴酸0.3、1、3、10、30 nmol·L-1,并设空白对照组、溶媒对照组及阳性药组,药物作用时间均为48 h。650μmol·L-1H2O2干预细胞2 h建立氧化损伤模型,用四甲基偶氮唑蓝法检测药物对INS-1β细胞氧化损伤的保护作用,用核染色法观察细胞核变化,用流式细胞术检测药物对细胞活性氧生成的作用,用双染-流式细胞术检测药物对细胞凋亡的保护作用。结果与氧化损伤模型组比较,低剂量的番石榴酸(0.3、1 nmol·L-1)能显著保护INS-1β细胞活力(P<0.05或P<0.01);核染色结果显示,与氧化损伤模型组相比,低浓度番石榴酸(0.3 nmol·L-1)作用下,细胞荧光强度较弱。0.3、1、3 nmol·L-1番石榴酸均能十分显著地降低二氯荧光黄(DCF)荧光强度(P<0.01),即减少细胞内活性氧的产生。0.3 nmol·L-1番石榴酸能显著抵抗细胞凋亡的发生(P<0.05)。结论番石榴酸能对抗INS-1细胞氧化损伤,可能与其抑制细胞内活性氧的产生、对抗细胞凋亡有关。

关键词：番石榴酸 INS-1胰岛β细胞氧化损伤

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Ca_v1.2钙通道GST-CT1蛋白片段与胞浆钙调蛋白提取纯化的比较

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解剖科学进展 2016年第2期22卷 121-123页

作者：晏珊封瑞杨磊孙宇王千慧郭凤赵美眯孙雪菲郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122 天津出入境检验检疫局工业品安全技术中心天津300308

目的对比分析心肌Ca_V1.2钙通道片段GST-CT1融合蛋白与胞浆钙调蛋白(calmodulin,CaM)提取与纯化方法的异同。方法将pGEX-6p-3/CT1和pGEX-6p-3/CaM重组质粒转入*** BL21菌株,筛选得到转化成功的菌株并用IPTG诱导其表达,GS-4B beads分离纯... 详细信息

目的对比分析心肌Ca_V1.2钙通道片段GST-CT1融合蛋白与胞浆钙调蛋白(calmodulin,CaM)提取与纯化方法的异同。方法将pGEX-6p-3/CT1和pGEX-6p-3/CaM重组质粒转入*** BL21菌株,筛选得到转化成功的菌株并用IPTG诱导其表达,GS-4B beads分离纯化,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定目的蛋白及其相对纯度,Pull down assay方法鉴定GST-CT1融合蛋白和CaM蛋白的生物学活性。结果采用超声破碎法,应用N-laurylsarcosine和Triton X-100处理后提取的GST-CT1融合蛋白浓度和纯度显著高于未用两者处理的对照组,而N-laurylsarcosine和Triton X-100对胞浆蛋白CaM的提取和纯化无明显影响。结论细胞膜通道蛋白GST-CT1的提取和纯化方法与胞浆蛋白Ca M存在明显差别。

关键词：融合蛋白胞浆蛋白钙通道钙调蛋白

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Cav1.2通道CT1片断突变体的质粒构建和蛋白表达

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中国医科大学学报 2015年第9期44卷 837-839,843页

作者：雷明赵美眯封瑞王红梅毛楠朱彤郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122 东北大学环境生物学教研室沈阳110004

目的构建心肌Cav1.2通道CT1片段及其突变体与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体,并进行蛋白表达和纯化。方法以豚鼠Cav1.2通道CT1质粒(p GEX-6p-3/CT1)为模板,采用定点突变技术构建CT1 T1603A和CT1 T1603D两种突变体质粒... 详细信息

目的构建心肌Cav1.2通道CT1片段及其突变体与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体,并进行蛋白表达和纯化。方法以豚鼠Cav1.2通道CT1质粒(p GEX-6p-3/CT1)为模板,采用定点突变技术构建CT1 T1603A和CT1 T1603D两种突变体质粒。转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养后用IPTG诱导GST融合蛋白表达,分离纯化后采用SDS-PAGE检测CT1及其突变体蛋白的相对分子量和纯度。结果 CT1片段及其突变体融合蛋白得到了正确、大量表达,提取纯化后的CT1片段及其突变体融合蛋白具有较高的纯度。结论成功构建了Cav1.2通道CT1片断及其突变体融合蛋白原核表达载体,获得了CT1突变体融合蛋白,为深入研究CT1片断在Cav1.2通道调节中的作用和机制奠定基础。

关键词：融合蛋白 CT1 突变体

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番石榴酸改善INS-1胰岛β细胞胰岛素抵抗

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中成药 2015年第4期37卷 710-715页

作者：魏崧丞王婧茹叶开和王小康马锦锦张晓琦叶文才叶春玲暨南大学药学院药理学教研室广东广州510632 瑞典卡罗林斯卡医学院瑞典斯德哥尔摩17177 暨南大学中药与天然药物研究所广东广州510632

目的考察番石榴酸对INS-1胰岛β细胞胰岛素抵抗的作用,并探讨其可能的作用机制。方法 40 mmol/L葡萄糖干预INS-1胰岛β细胞48 h建立胰岛素抵抗模型,设番石榴酸干预组(0.3、1、3、10、30 nmol/L),以及空白对照组、二甲亚砜对照组,胰岛素... 详细信息

目的考察番石榴酸对INS-1胰岛β细胞胰岛素抵抗的作用,并探讨其可能的作用机制。方法 40 mmol/L葡萄糖干预INS-1胰岛β细胞48 h建立胰岛素抵抗模型,设番石榴酸干预组(0.3、1、3、10、30 nmol/L),以及空白对照组、二甲亚砜对照组,胰岛素抵抗模型组,正钒酸钠组(1 mmol/L)和罗格列酮组(1 mmol/L),药物作用48 h。分别以5.6、16.7 mmol/L葡萄糖干预细胞1 h作为基础胰岛素分泌(BIS)、高糖刺激胰岛素分泌(GSIS)条件,用放射免疫法检测药物对胰岛素分泌的影响,结果以该细胞总蛋白量校正。荧光定量PCR法检测药物对胰岛素抵抗INS-1细胞内PTP1B、PPARγmRNA表达的作用。结果与胰岛素抵抗模型组比较,0.3 nmol/L番石榴酸便能促进胰岛素抵抗INS-1细胞的GSIS(P<0.05或P<0.01);1 nmol/L番石榴酸即可显著促进基础胰岛素分泌(P<0.01)。0.3、3、30 nmol/L番石榴酸均能显著下调胰岛素抵抗INS-1细胞的PTP1B mRNA相对表达(P<0.05或P<0.01),其中0.3和3 nmol/L番石榴酸下调作用优于正钒酸钠,上调PPARγmRNA相对表达作用优于罗格列酮。结论番石榴酸能够改善INS-1细胞胰岛素抵抗,可能通过下调PTP1B和上调PPARγ基因表达有关。番石榴酸可能通过改善胰岛β细胞自身胰岛素抵抗而发挥抗糖尿病作用。

关键词：番石榴酸 INS-1胰岛β细胞胰岛素抵抗 PTP1B PPARγ

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壬基苯酚对H9c2心肌细胞钙信号和细胞增殖的影响及其作用机制

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中国医科大学学报 2015年第2期44卷 109-113页

作者：高青华刘水策郭凤刘书源于向沉夏尔巴提吾马尔孙雪菲毛楠赵美眯朱彤郝丽英中国医科大学基础医学院生理学教研室沈阳110122 中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122 东北大学环境生物研究室沈阳110004

目的探讨壬基苯酚(NP)对H9c2心肌细胞内钙离子浓度和细胞增殖的影响以及GPR30受体的作用。方法采用细胞内钙测定方法来记录H9c2心肌细胞内钙离子浓度变化,采用MTT法来观察H9c2心肌细胞增殖程度。结果 1×10-10mol/L NP使细胞内钙离... 详细信息

目的探讨壬基苯酚(NP)对H9c2心肌细胞内钙离子浓度和细胞增殖的影响以及GPR30受体的作用。方法采用细胞内钙测定方法来记录H9c2心肌细胞内钙离子浓度变化,采用MTT法来观察H9c2心肌细胞增殖程度。结果 1×10-10mol/L NP使细胞内钙离子浓度升高的幅度增加,并促进H9c2细胞增殖,而1×10-6mol/L NP使细胞内钙离子浓度升高的幅度降低,并抑制细胞增殖。G15可以阻断1×10-10mol/L NP对细胞内钙离子浓度和细胞增殖的促进作用,但不能阻断1×10-6mol/L NP对细胞内钙离子和细胞增殖的抑制作用。结论 NP对H9c2细胞的快速钙信号变化和细胞增殖具有非单调的剂量依赖性作用,其机制可能是由于GPR30受体在不同浓度下参与的机制不同。

关键词：壬基苯酚 H9c2细胞钙离子细胞增殖 GPR30

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ATP对心肌Cav1.2钙通道的直接调节作用

ATP对心肌Cav1.2钙通道的直接调节作用

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中国生理学会张锡钧基金会第十三届全国青年优秀生理学学术论文交流及评奖会议、中国生理学会第十一届全国青年生理学工作者学术会议

作者：封瑞徐建军郭凤胡慧媛赵美眯孙雪菲龟山正树郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室

L型钙通道是一种电压依赖性钙通道,其由4个亚单位组成,分别为α1,α2δ,β1-4和γ,其中α1亚单位是主要的功能单位。钙离子信号与很多重要的生理功能密切相关,而L型钙通道严格控制着钙离子进出细胞的过程,因此,研究L型钙通道的精细调节... 详细信息

L型钙通道是一种电压依赖性钙通道,其由4个亚单位组成,分别为α1,α2δ,β1-4和γ,其中α1亚单位是主要的功能单位。钙离子信号与很多重要的生理功能密切相关,而L型钙通道严格控制着钙离子进出细胞的过程,因此,研究L型钙通道的精细调节机制至关重要。三磷酸腺苷（adenosine-triphosphate,ATP）是体内组织细胞一切生命活动所需能量的直接来源,其参与蛋白质、脂肪、糖和核苷酸的合成。在心肌细胞中,钙离子的跨膜转运需要消耗大量的能量,ATP为其能量的重要来源之一。研究发现,ATP可缩短患者心脏发作时间,或缩短患者接受心脏手术后的恢复时间,并且,ATP可改善因心脏压力造成的心脏能量低的状态,因此,ATP在维持心脏功能方面起到了非常重要的作用,然而详细的调节机制并不清楚。早期的研究发现ATP和钙调蛋白（Camodulin,CaM）同时应用的情况下,能够逆转L型钙通道的Run-Down现象,单独应用其中任何一个都不能很好的恢复通道活性。有研究报道从心肌组织中提取的细胞内组分只有与ATP同时应用,才能维持L型钙通道活性,由此可见,不仅CaM在维持钙通道活性中起到重要作用,ATP同样也起到必不可少的作用。ATP对L型钙通道的调节作用机制复杂,其可通过激活蛋白激酶C使通道磷酸化,然也有研究报道其可能通过其他非磷酸化途径对L型钙通道进行调节,本研究拟从非磷酸途径角度对ATP与L型钙通道的关系进行探索研究。本研究应用蛋白与蛋白结合的方法,首次发现ATP能够直接与心肌Cav1.2钙通道结合。依据本研究的结果分析,推测至少2个分子的ATP可以与1个分子的Cav1.2钙通道结合,而且这两个ATP与钙通道的结合的亲和力可能不同,一个为较高亲和力,另外一个为较低亲和力,这也与前期电生理学研究结果非常相似。我们早期的实验同时应用ATP和CaM才能很好地恢复L型钙通道的活性,在CaM缺失的情况下,ATP单独不能很好的恢复具有Run-Down现象的钙通道活性,由此推测可能ATP对钙通道的调节会受到CaM的影响,即CaM可能会对ATP与钙通道的结合具有一定的调节作用。因此,进行了更进一步的研究。研究发现,CaM确实对ATP与心肌Cav1.2钙通道的结合有影响。已有很多的研究报道CaM可以直接与Cav1.2钙通道结合,对钙通道的功能进行调节。我们以前的研究报道,1个分子L型钙通道可以结合2个分子CaM,并且这2个分子的CaM,分别介导Ca依赖性易化与失活。本研究在不同分子数CaM存在的情况下,检测ATP与Cav1.2钙通道的结合情况,发现随着CaM分子数的增加,ATP与Cav1.2钙通道的结合先增加后减少,这说明CaM对ATP的结合作用具有双向调节作用,这种双向调节作用可能是ATP对L型钙通道功能的调节的基础。然ATP、CaM和Ca三种分子之间的相互作用的详细机制可能会更加复杂,需要进一步的实验研究。本研究对ATP与心肌Cav1.2钙通道的结合作用进行了一系列的研究,ATP,Ca,CaM对L型钙通道调节作用机制非常复杂,相关的研究也是非常的丰富,本研究提出了ATP对L型钙通道调节的新机制,不仅为L型钙通道调节机制增添了新的内容,也为临床上与ATP和L型钙通道相关的疾病的病因及治疗提供了新的思路。

关键词：钙通道三磷酸腺苷钙调蛋白信号通路

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豚鼠心室肌细胞中镁离子对L型钙通道易化与失活作用

豚鼠心室肌细胞中镁离子对L型钙通道易化与失活作用

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中国生理学会张锡钧基金会第十三届全国青年优秀生理学学术论文交流及评奖会议、中国生理学会第十一届全国青年生理学工作者学术会议

作者：赵美眯李卓郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室

本实验拟研究细胞内镁离子对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的调节机制。采用膜片钳单通道记录模式,记录不同细胞内镁离子浓度(intracellular Mgconcentration,[Mg])下,L型钙通道的单通道电流。结果发现,细胞内存在1.4 uM钙调蛋白（calmodulin... 详细信息

本实验拟研究细胞内镁离子对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的调节机制。采用膜片钳单通道记录模式,记录不同细胞内镁离子浓度(intracellular Mgconcentration,[Mg])下,L型钙通道的单通道电流。结果发现,细胞内存在1.4 uM钙调蛋白（calmodulin,CaM）和3 mM ATP的情况下,当游离[Mg]为0,10,10,10,10,和10M时,钙通道活性分别恢复至细胞贴附模式的44%,117%,202%,181%,147%和20%,呈现"钟形"的浓度依赖性曲线。并且

关键词：钙通道心室肌细胞镁离子失活作用

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豚鼠钙调蛋白2基因编码区及3'端非编码区序列分析

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解剖科学进展 2015年第1期21卷 10-13页

作者：封瑞刘彦胡慧媛郭凤赵美眯赵金生郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110122

目的比较分析豚鼠CaM2基因编码区及3'端非编码区序列,获得丰富的豚鼠CaM2基因生物遗传学信息。方法基因测序获得豚鼠CaM2基因编码区及3'端非编码区序列,通过genebank数据库获得不同种属CaM核苷酸序列,采用DNASTAR软件对CaM2不... 详细信息

目的比较分析豚鼠CaM2基因编码区及3'端非编码区序列,获得丰富的豚鼠CaM2基因生物遗传学信息。方法基因测序获得豚鼠CaM2基因编码区及3'端非编码区序列,通过genebank数据库获得不同种属CaM核苷酸序列,采用DNASTAR软件对CaM2不同部位序列进行多序列的比较分析。结果豚鼠CaM2基因编码区与人、小鼠和大鼠的同源率分别为96.7%、91.4%和90.5%,与人、小鼠、大鼠的CaMl和CaM3基因编码区序列的同源率在80%-85%之间。豚鼠CaM2基因3'端非编码区序列与人、小鼠和大鼠的同源率分别为94.2%、93.3%和90.0%,与人、小鼠、大鼠的CaM3基因3'端非编码区序列的同源率分别为26.8%、29.2%和25.9%,与CaMl的同源率在25%-63%之间。结论豚鼠CaM2基因编码区具有种属和亚型较高同源性特征,而CaM2基因3'端非编码区虽在不同种属中具有很高同源性,但在不同种属与其它亚型比对中同源性较低。

关键词：钙调蛋白豚鼠序列分析同源性

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癫痫电压门控性钙通道辅助亚基的研究进展

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解剖科学进展 2015年第6期21卷 670-673页

作者：张钰汇郝丽英郭凤中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110001

电压门控性钙通道结构和功能的变化引发外钙内流,而过度的钙内流引起神经元异常放电。因此,电压门控性钙通道作为神经元兴奋性的关键因素,在癫痫这种神经元异常放电疾病中发挥重要作用。β、α_2δ和γ作为其辅助亚基,可调节癫痫中神经... 详细信息

电压门控性钙通道结构和功能的变化引发外钙内流,而过度的钙内流引起神经元异常放电。因此,电压门控性钙通道作为神经元兴奋性的关键因素,在癫痫这种神经元异常放电疾病中发挥重要作用。β、α_2δ和γ作为其辅助亚基,可调节癫痫中神经元电压门控性钙通道的活性、靶向定位、表达密度等通道特性。本文对于电压门控性钙通道辅助亚基β、α_2δ在癫痫发病中的作用作一概述。

关键词：异常放电神经元兴奋性钙通道神经元细胞钙离子内流抗癫痫药物慢性脑部疾病靶向定位神经病理性疼痛神经系统疾病

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