检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2007年第9期27卷 792-796页

作者：刘云英罗冬娇郑伟李立伟严杰浙江大学医学院病原生物学系杭州310058 杭州师范学院基础医学部病原生物学教研室

目的了解问号钩端螺旋体(简称钩体)感染宿主细胞后吞噬泡形成、吞噬泡与溶酶体融合及感染细胞超微结构改变。方法用问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染小鼠单核巨噬样细胞J774A.1和猴肾成纤维细胞Cos-7。采用透射电镜观察J774A.1细胞和C... 详细信息

目的了解问号钩端螺旋体(简称钩体)感染宿主细胞后吞噬泡形成、吞噬泡与溶酶体融合及感染细胞超微结构改变。方法用问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染小鼠单核巨噬样细胞J774A.1和猴肾成纤维细胞Cos-7。采用透射电镜观察J774A.1细胞和Cos-7细胞胞内钩体吞噬泡的形成及感染细胞超微结构的改变。采用免疫双荧光染色法和激光共聚焦显微镜,观察含钩体吞噬泡与溶酶体融合情况。结果问号钩体56601株感染J774A.1细胞30 min、感染Cos-7细胞15 min即可在胞浆中发现膜包绕的含钩体吞噬泡,吞噬泡内钩体均保持原有生理弯曲。56601株问号钩体感染Cos-7细胞2h后,钩体吞噬泡膜开始消失,但未发现J774A.1细胞内钩体吞噬泡膜消失的现象。J774A.1细胞内钩体吞噬泡与溶酶体发生共区域化,表明吞噬泡与溶酶体发生融合。J774A.1细胞感染钩体后出现染色质浓缩形成的凋亡小体样结构、细胞空泡变性、线粒体肿胀等超微结构病变,但Cos-7细胞感染钩体后其超微结构基本正常。结论问号钩体感染J774A.1细胞和Cos-7细胞后可迅速形成吞噬泡并可能与钩体Ⅲ型分泌系统产物有关。J774A.1细胞内钩体吞噬泡可与溶酶体发生融合。不同细胞的钩体吞噬泡膜消失及超微结构改变有明显差异。

关键词：问号钩端螺旋体 J774A.1细胞/Cos-7细胞吞噬泡/溶酶体融合超微结构改变

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我国4个钩端螺旋体血清群lipL21基因序列分析及其表达产物的鉴定

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中国人兽共患病杂志 2005年第9期21卷 744-747页

作者：刘云英罗冬娇严杰浙江大学医学院病原生物学教研室杭州310031 杭州师范学院基础医学部

目的本文采用高保真PCR从我国主要流行的问号钩体黄疸出血群赖型56601株、波摩那群波摩那型56608株、流感伤寒群临型56609株及腐生性双曲钩体参考标准株三宝垄群patoc型PatocⅠ株基因组DNA中扩增了全长lipL21基因片段。序列分析结果表明... 详细信息

目的本文采用高保真PCR从我国主要流行的问号钩体黄疸出血群赖型56601株、波摩那群波摩那型56608株、流感伤寒群临型56609株及腐生性双曲钩体参考标准株三宝垄群patoc型PatocⅠ株基因组DNA中扩增了全长lipL21基因片段。序列分析结果表明,所克隆的4株钩体lipL21基因与已报道的相应序列(GenBankNo.:AY187271)比较,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.64～99.82%和99.46～100%。所构建的问号钩体黄疸出血群赖型56601株lipL21基因原核表达系统在IPTG诱导下,能有效地表达目的重组蛋白rLipL21,其产量约为细菌总蛋白的10%。Westernblot结果证实,兔抗钩体TR/patocⅠ属特异性抗原血清能识别rLipL21并与之结合。上述实验结果提示,lipL21基因序列非常保守,其表达产物有良好免疫原性,可作为研制通用型钩体基因工程疫苗的候选抗原。

关键词：问号钩端螺旋体 LipL21基因克隆/表达免疫原性/鉴定

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葡萄球菌肠毒素B基因原核表达系统的构建及其表达产物促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的研究

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浙江大学学报（理学版） 2006年第5期33卷 553-558页

作者：毛亚飞徐水凌罗冬娇严杰浙江大学医学院病原生物学教研室浙江杭州310031 杭州师范学院基础医学部浙江杭州310018

构建葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxins B，SEB）基因原核表达系统，了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用．采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段，T—A克隆后测序，构建SE... 详细信息

构建葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxins B，SEB）基因原核表达系统，了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用．采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段，T—A克隆后测序，构建SEB基因原核表达系统pET32α-SEB—***2IDE3．采用SDS-PAGE检测rSEB表达产量，Ni—NTA亲和层析法提纯rSEB．采用TCID50法测定rSEB对Vero细胞的细胞毒性作用并计算TCID50值．采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEB体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞（PBMC）的促增殖作用以及对HepG2细胞（人肝腺癌细胞）、HeLa细胞（人宫颈癌上皮细胞）的生长抑制作用．与公布的相关序列比较，所克隆的SEB基因核苷酸序列相似性为100％．rSEB表达量约为细菌总蛋白的40％．rSEB对Vero细胞的TCIC50为3．02μg．5．0～20．0μg／ml的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用（P〈0．05）．5．0～20．0μg／ml rSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长（P〈0．05）．本研究成功地构建了rSEB高效原核表达系统．rSEB仍然具有生物学活性．所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法，为以后减毒rSEB突变体的筛选奠定了基础．

关键词：葡萄球菌肠毒素B SEB基因/克隆原核表达系统/构建重组蛋白/表达细胞毒性淋巴细胞/增殖肿瘤细胞/抑制

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我国主要问号钩端螺旋体血清群lipL21基因序列及其产物免疫反应性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第11期26卷 979-984页

作者：罗冬娇胡野孙百莉田菊霞胡美多严杰杭州师范学院基础医学部 310018 浙江金华职业技术学院医学院浙江大学医学院病原生物学教研室

目的分析我国15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)参考标准株外膜脂蛋白lipL21基因序列,构建该基因原核表达系统并鉴定表达产物的免疫原性,了解lipL21基因自然表达状况。方法高保真PCR扩增上述问号钩体株及双曲钩体Patoc型PatocⅠ株基因组... 详细信息

目的分析我国15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)参考标准株外膜脂蛋白lipL21基因序列,构建该基因原核表达系统并鉴定表达产物的免疫原性,了解lipL21基因自然表达状况。方法高保真PCR扩增上述问号钩体株及双曲钩体Patoc型PatocⅠ株基因组DNA中全长lipL21基因片段,T-A克隆后测序并构建其原核表达系统。分别用钩体TR/PatocⅠ和rLipL21兔抗血清为一抗的Western blot鉴定目的重组蛋白rLipL21的免疫原性,显微镜凝集试验(MAT)检测rLipL21兔抗血清的交叉凝集效价。以盐变-去垢剂处理法提取钩体外膜蛋白,用SDS-PAGE和免疫印迹法检测上述钩体株lipL21基因自然表达情况。结果上述钩体株均存在序列高度保守的lipL21基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98．75％～99．82％和99．46％～100％。rLipL21能与TR/PatocⅠ及rLipl21兔抗血清发生结合反应。rLipL21免疫家兔能产生抗体,该抗体对上述15株问号钩体MAT效价为1：16～1：128。问号钩体外膜标本中均可检出LipL21,双曲钩体则否。结论我国钩体群参考标准株均含有序列保守的lipL21基因并自然表达于外膜,双曲钩体PatocⅠ株虽含有lipL21基因但未表达。rLipL21具有良好的抗原性和免疫反应性,有可能作为新型钩体疫苗或检测试剂盒的候选属特异性表面抗原之一。

关键词：钩端螺旋体 lipL21基因属特异性蛋白抗原重组表达外膜蛋白免疫原性

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问号钩体lipL32/1-lipL41/2融合基因的构建及其表达产物免疫性的鉴定(英文)

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中国人兽共患病学报 2007年第5期23卷 427-432页

作者：周金成罗冬娇严杰杭州师范学院基础医学院杭州310018 浙江大学医学院病原生物学教研室

目的构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL41/2融合基因及其原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫性。方法采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL41/2融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测... 详细信息

目的构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL41/2融合基因及其原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫性。方法采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL41/2融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测目的重组蛋白rLipL32/1-LipL41/2表达情况。采用Western blot鉴定rLipL32/1-LipL41/2的免疫反应性。采用ELISA检测228例钩体病人血清中lipL32/1、lipL41/2基因和lipL32/1-lipL41/2融合基因表达产物的抗体。结果 lipL32/1-lipL41/2融合基因核苷酸和氨基酸序列与报道的相关序列相似性分别为99 .9 %和99 .8 %。rLi-pL32/1-LipL41/2表达量约为细菌总蛋白的10 %。rLipL32/1和rLipL41/2兔抗血清均能识别并与rLipL32/1-LipL41/2结合。97 .4 %、78 .5 %和99 .1 %病人血清rLipL32/1、rLipL41/2和rLipL32/1-LipL41/2抗体阳性。结论本研究成功地构建了问号钩体lipL32/1-lipL41/2融合基因及其原核表达系统,rLipL32/1-LipL41/2不仅同时具有两个单一重组抗原的免疫反应性,且能提高钩体病人血清中抗体检测阳性率,可作为研制钩体属特异性基因工程疫苗或检测试剂盒的候选抗原。

关键词：问号钩端螺旋体 lipL32基因 lipL41基因融合基因构建/表达免疫性

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蔷薇科植物果核油性提取物体外抗真菌细菌作用

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中国公共卫生 2005年第12期21卷 1462-1463页

作者：罗冬娇田菊霞周金成李立伟严杰杭州师范学院基础医学部杭州310018 浙江大学医学院病原生物学教研室

目的观察蔷薇科植物果核油性提取物初提液和提纯液体外抗病原真菌和细菌的作用.方法以二性霉素B、阿莫西林、庆大霉素为对照,分别采用二倍平皿稀释法和试管法测定油性提取物初提液和提纯液对假丝酵母菌、毛癣菌、金黄色葡萄球菌和大肠... 详细信息

目的观察蔷薇科植物果核油性提取物初提液和提纯液体外抗病原真菌和细菌的作用.方法以二性霉素B、阿莫西林、庆大霉素为对照,分别采用二倍平皿稀释法和试管法测定油性提取物初提液和提纯液对假丝酵母菌、毛癣菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌临床菌株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC).结果初提液和提纯液对79株假丝酵母菌菌株的MIC90分别为1.25%和2.5%(V/V)、对34株毛癣菌的MIC90分别为0.62%～1.25%和1.25%～2.5%(V/V).初提液和提纯液对38株金黄色葡萄球菌、20株大肠埃希菌的MIC90均分别为0.31%和0.62%(V/V).0.31%初提液作用15min、0.62%提纯液作用30min可杀灭白假丝酵母菌7374株和红色毛癣菌6180株.0.16%初提液作用5min、0.31%提纯液作用15min可杀灭金黄色葡萄球菌ATCC25923株和大肠埃希菌ATCC25922株.结论较低浓度的蔷薇科植物果核油性提取物初提液和提纯液即有体外抑制和杀灭常见皮肤和粘膜感染病原真菌和细菌的作用,具有成为高效外用消杀剂的前景.

关键词：蔷薇科植物果核油性提取物抑菌作用杀菌作用

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淋病奈瑟菌临床菌株PⅠ基因型及PⅠB基因点突变分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第9期26卷 790-794页

作者：孙爱华罗冬娇胡美多周晓辉严杰浙江医学高等专科学校杭州师范学院基础医学部浙江大学医学院病原生物学教研室杭州310031

目的分析浙江地区淋病奈瑟菌株外膜孔蛋白PⅠ基因序列及其点突变与耐药性关系,了解本地区淋病奈瑟菌株PⅠA与PⅠB基因分布及其优势基因型。方法采用高保真PCR扩增34株淋病奈瑟菌全长PⅠ基因序列,T-A克隆后测序。根据测序结果,建立多重PC... 详细信息

目的分析浙江地区淋病奈瑟菌株外膜孔蛋白PⅠ基因序列及其点突变与耐药性关系,了解本地区淋病奈瑟菌株PⅠA与PⅠB基因分布及其优势基因型。方法采用高保真PCR扩增34株淋病奈瑟菌全长PⅠ基因序列,T-A克隆后测序。根据测序结果,建立多重PCR同时检测113株淋病奈瑟菌PⅠA和PⅠB基因。分析测序菌株PⅠB基因中与耐药性密切相关的G120和A121变异情况,采用二倍琼脂稀释法确定PⅠB菌株的耐药性。结果11株PⅠA+淋病奈瑟菌均为ⅠA6血清型。23株PⅠB+淋病奈瑟菌中,6株(26．1％)为ⅠB3血清型、5株(21．7％)为ⅠB3／6血清型、2株(8．7％)为ⅠB4血清型、9株(39．1％)为ⅠB3／6-ⅠB2嵌合血清型、1株(4．3％)为ⅠB2-ⅠB4嵌合血清型。所建立的多重PCR可特异和准确地对PⅠA和PⅠB基因分型,检测灵敏度为10 ng DNA模板。113株淋病奈瑟菌中,26株(23．0％)和87株(77．0％)分别携带PⅠA和PⅠB基因。经测序的23株PⅠB+淋病奈瑟菌中,1株(4．3％)G120和A121均未突变,3株(13．0％)G120或A121突变,2株8．7％)G120突变但A121缺失,17株(73．9％)双位点突变。22株G120和／或A121突变的PⅠB+菌株均对青霉素和四环素耐药。结论所建立的多重PCR可用于淋病奈瑟菌PⅠA和PⅠB基因的分型检测。本地区流行的淋病奈瑟菌主要携带PⅠB基因。ⅠA6为PⅠA菌株优势血清型。PⅠB菌株以ⅠB3／6-ⅠB2嵌合、ⅠB3和ⅠB3／6血清型常见,但主要为耐药性G120和,或A121突变株。

关键词：淋病奈瑟菌 PorinⅠ基因序列分析多重PCR 突变

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葡萄球菌肠毒素A基因原核表达系统的构建及其表达产物的鉴定

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中国病理生理杂志 2007年第1期23卷 163-167页

作者：徐水凌毛亚飞张梅光罗冬娇严杰浙江大学医学院病原生物学教研室浙江杭州310031 嘉兴学院医学院微生物与免疫学教研室浙江嘉兴314001 杭州师范学院基础医学部浙江杭州310018

目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因原核表达系统,了解重组表达产物rSEA促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用。方法:采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增全长SEA基因片段,T-A克隆后测序,构建SEA基因原核表达系统***21DE... 详细信息

目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因原核表达系统,了解重组表达产物rSEA促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用。方法:采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增全长SEA基因片段,T-A克隆后测序,构建SEA基因原核表达系统***21DE3。采用SDS-PAGE检测rSEA表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rSEA。采用TCID50法测定rSEA对Vero细胞的细胞毒性并计算TCIC50值。采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEA体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞(PBMC)的促增殖作用以及对HepG2细胞(人肝癌细胞)、HeLa细胞(人宫颈癌上皮细胞)的生长抑制作用。结果:与公布的相关序列比较,所克隆的SEA基因核苷酸序列相似性为100%。rSEA表达量约为细菌总蛋白的25%。rSEA对Vero细胞的TCIC50为3.14μg。1.0-20.0mg/L的rSEA对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用(P<0.05)。5.0-20.0mg/LrSEA作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长(P<0.05)。结论:成功地构建了rSEA原核表达系统。rSEA仍然具有生物学活性。所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为以后减毒rSEA突变体的筛选奠定了基础。

关键词：葡萄球菌肠毒素A 基因表达原核表达 HepG2细胞 HeLa细胞 Veto细胞

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问号钩端螺旋体病人血清中LipL21抗体检测

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第3期27卷 291-292页

作者：罗冬娇郭宗琪孙百莉蒋晓崎周金成严杰杭州师范学院基础医学部 310018 四川省疾病预防控制中心浙江大学医学院病原生物学教研室

寻找钩体属特异性保护抗原，对于研制通用型钩体疫苗及实验室诊断试剂盒均有重要价值。Cullen等首先报告了致病性问号钩体均具有属特异性lipL21脂蛋白基因。我们也曾证实我国15群15型问号钩体参考标准株均含有序列保守的lipL21基因。已... 详细信息

寻找钩体属特异性保护抗原，对于研制通用型钩体疫苗及实验室诊断试剂盒均有重要价值。Cullen等首先报告了致病性问号钩体均具有属特异性lipL21脂蛋白基因。我们也曾证实我国15群15型问号钩体参考标准株均含有序列保守的lipL21基因。已知钩体病免疫保护作用主要依赖血清抗体为主的体液免疫。我们采用显微镜凝集试验（MAT）检测了156份钩体病人血清的凝集效价，并建立rLipL21-IgM／IgG-ELISAs对血清标本中LipL21的IgG和IgM型抗体进行了检测。

关键词：抗体检测病人血清问号钩端螺旋体 lipL21基因显微镜凝集试验特异性保护钩体疫苗免疫保护作用

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蔷薇科植物果核油性提取物的体内外抗幽门螺杆菌作用

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中国现代应用药学 2006年第5期23卷 355-358页

作者：蒋锦琴罗冬娇严杰浙江医学高等专科学校杭州310053 杭州师范学院基础医学部杭州310018 浙江大学医学院病原生物学教研室杭州310031

目的观察蔷薇科植物果核油性提取物初提液和提纯液体内外抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的作用。方法从胃炎和消化性溃疡患者胃黏膜活检标本中分离Hp临床菌株。分别采用二倍平皿稀释法和试管法测定油性提取物初提液和提纯液对96... 详细信息

目的观察蔷薇科植物果核油性提取物初提液和提纯液体内外抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的作用。方法从胃炎和消化性溃疡患者胃黏膜活检标本中分离Hp临床菌株。分别采用二倍平皿稀释法和试管法测定油性提取物初提液和提纯液对96株Hp的M IC和MBC。建立Hp小鼠感染模型,检测油性提取物初提液和提纯液体内抗Hp的效果。结果从患者胃黏膜活检标本中分离获得96株Hp。油性提取物初提液和提纯液对上述Hp菌株的M IC90分别为体积分数0.16%和0.32%。体积分数为0.16%油性提取物初提液作用5 m in及体积分数为0.16%的提纯液作用15 m in即可杀灭HpNCTC11637株、临床菌株75b和81 a株。所有感染小鼠胃窦部组织Hp SS1株分离培养结果均阳性,体积分数为0.5%的油性提取物初提液和提纯液灌小鼠Hp分离培养结果均阴性。结论较低浓度的蔷薇科植物果核油性提取物初提液和提纯液即有体内抗Hp的作用,具有进一步开发抗Hp口服液的价值。

关键词：蔷薇科植物果核油性提取物幽门螺杆菌押菌作用杀菌作用

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