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树突状细胞吞噬PLA-AFP_(218-226)微球后诱导细胞毒性T淋巴细胞反应

四川大学学报（医学版） 2006年第3期37卷 378-380,448页

作者：张兵陈玮董薇蔡美英四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室成都610041

目的研究树突状细胞(DC)吞噬包被有甲胎蛋白HLA-A2限制性表位肽(AFP218-226,LLNQHACAV)的聚乳酸微球(PLA-AFP218-226)后诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞株HepG2和负载有AFP218-226的T2细胞株的毒性作用。方法用GM-CSF和I... 详细信息

目的研究树突状细胞(DC)吞噬包被有甲胎蛋白HLA-A2限制性表位肽(AFP218-226,LLNQHACAV)的聚乳酸微球(PLA-AFP218-226)后诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞株HepG2和负载有AFP218-226的T2细胞株的毒性作用。方法用GM-CSF和IL-4诱导HLA-A2+的健康志愿者外周血单核细胞,LPS诱导成熟,使其分化为高纯度DC,在诱导过程中加入PLA-AFP218-226微球,用吞噬了PLA-AFP218-226微球的DC诱导自身T淋巴细胞,使其成为肝细胞癌(HCC)特异性CTL。用流氏细胞仪检测DC膜分子标志,T2细胞与AFP218-226结合实验检测HLA-A2分子与AFP218-226之间的亲合力,MTT法检测特异性CTL杀伤HepG2和T2细胞株的能力。结果AFP218-226与HLA-A2分子具有较高的亲合力,吞噬微球后的成熟DC高表达CD83、CD86、CD40等膜分子,其诱导的特异性CTL对HepG2和负载有AFP218-226的T2细胞株具有强的细胞毒作用。结论PLA-AFP218-226被DC细胞吞噬后,能够诱导HCC特异性CTL的产生,可能成为一种新型的抗肿瘤表位肽疫苗,在肝癌的防治中得到应用。

关键词：树突状细胞 PLA CTL 甲胎蛋白 HLA—A2限制性表位肽 T淋巴细胞细胞毒性

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DNA疫苗引发局部肌肉组织DCs、CD4^+T细胞的聚集浸润

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四川大学学报（医学版） 2005年第4期36卷 519-521,565页

作者：邓小玲王霞魏大鹏张平蔡美英毕建红胡丽娟四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室成都610041

目的观察在注射DNA疫苗后的不同时间段内,肌肉注射部位细胞的聚集情况,并对细胞表型进行检测,为阐述DNA疫苗激活机体免疫反应机制提供直接的组织学证据。方法分别于DNA注射小鼠后6h、12h、1d、2d、3d、4d、5d、6d切取注射部位肌肉组织,H... 详细信息

目的观察在注射DNA疫苗后的不同时间段内,肌肉注射部位细胞的聚集情况,并对细胞表型进行检测,为阐述DNA疫苗激活机体免疫反应机制提供直接的组织学证据。方法分别于DNA注射小鼠后6h、12h、1d、2d、3d、4d、5d、6d切取注射部位肌肉组织,HE染色观察细胞聚集情况;LSAB法检测聚集细胞CD205、CD4及CD8分子的表达。结果疫苗注射后6h～6d,在肌肉组织间隙中发现有不同程度的细胞浸润,早期主要以巨噬细胞样细胞和淋巴细胞为主,晚期巨噬细胞样细胞占优势。在疫苗注射后24h的肌肉组织中有少量的CD205阳性细胞,第3d时数量稍多,其余时间段CD205染色均为阴性。对浸润的淋巴细胞的亚型进行鉴定发现,在6h～6d的肌肉切片中只检测到CD4+T细胞,未发现CD8+T细胞的细胞。结论DNA疫苗免疫注射引发的细胞浸润与一般的炎症反应不同,有其特有的特征。DCs、CD4+T细胞参与DNA免疫并可能起着重要的作用;DNA免疫激活的CTL发挥免疫效应可能不在肌肉组织。

关键词： DNA疫苗树突状细胞 CD4^+T细胞细胞浸润

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肝癌外泌体LINC ROR对巨噬细胞炎症反应的影响

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四川大学学报（医学版） 2019年第2期50卷 177-181页

作者：李雪李楠四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室成都610041

目的探究肝癌细胞分泌的外泌体中长链非编码RNA(long intergenic non-coding RNA)LINC ROR对巨噬细胞功能的调节作用。方法差速离心分离得到肝癌细胞PLC/PRF/5上清中的外泌体。电镜和纳米颗粒追踪分析仪检测外泌体形态特征和粒径分布。... 详细信息

目的探究肝癌细胞分泌的外泌体中长链非编码RNA(long intergenic non-coding RNA)LINC ROR对巨噬细胞功能的调节作用。方法差速离心分离得到肝癌细胞PLC/PRF/5上清中的外泌体。电镜和纳米颗粒追踪分析仪检测外泌体形态特征和粒径分布。激光共聚焦荧光显微镜观测外泌体与巨噬细胞的空间相对位置。实时荧光定量PCR技术检测LINC ROR在外泌体中的表达水平。ELISA法检测巨噬细胞中LINC ROR小干扰RNA(siRNA)基因沉默后在脂多糖刺激下促炎症因子白细胞介素(IL)-1β的表达水平。结果肝癌细胞分泌的外泌体呈圆状,直径为100 nm左右,同时观测到巨噬细胞能接收肝癌细胞来源的外泌体。相对于正常肝细胞来源的外泌体,肝癌细胞PLC/PRF/5来源的外泌体中高表达LINC ROR。巨噬细胞中LINC ROR基因沉默后,在脂多糖诱导的炎症反应下,巨噬细胞促炎症因子IL-1β的表达水平明显增强。结论肝癌细胞分泌的外泌体中LINC ROR能对邻近巨噬细胞的炎症反应产生调控作用。

关键词：外泌体长非编码RNA LINC ROR 肝癌巨噬细胞

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卵巢恶性肿瘤患者T细胞亚群及其与IL-2、sIL-2R的相关性研究

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华西医科大学学报 1997年第2期28卷 210-213页

作者：王红静彭芝兰章崇杰附属第二医院妇产科基础医学院免疫学教研室

为探讨卵巢恶性肿瘤（ＭＯＴ）与细胞免疫的关系，对４０例ＭＯＴ患者和３０例正常对照（ＮＣ）妇女的Ｔ淋巴细胞亚群和白细胞介素－２（ＩＬ－２）、可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）进行了同步检测及相关性研究。结果：ＭＯ... 详细信息

为探讨卵巢恶性肿瘤（ＭＯＴ）与细胞免疫的关系，对４０例ＭＯＴ患者和３０例正常对照（ＮＣ）妇女的Ｔ淋巴细胞亚群和白细胞介素－２（ＩＬ－２）、可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）进行了同步检测及相关性研究。结果：ＭＯＴ组ＩＬ－２、ＣＤ＋３、ＣＤ＋４、ＣＤ＋４／ＣＤ＋８均低于ＮＣ组，ｓＩＬ－２Ｒ、ＣＤ＋８均高于ＮＣ组（Ｐ＜０．０１～０．００１），其中ＣＤ＋３、ＣＤ＋４、ＣＤ＋４／ＣＤ＋８与ＩＬ－２呈正相关，与ｓＩＬ－２Ｒ呈负相关（Ｐ＜０．０１～０．００１）。提示本病患者Ｔ淋巴细胞免疫功能低下，ＣＤ＋３、ＣＤ＋４、ＣＤ＋４／ＣＤ＋８值的降低与ＩＬ－２活性下降和ｓＩＬ－２Ｒ水平增高有关，它们均可能是本病发生发展的重要因素。

关键词：卵巢肿瘤 T淋巴细胞亚群 IL-2 sIL-2R 相关性

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添加RGD短肽的新型培养基对细胞生长、融合及外源基因表达的影响

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四川大学学报（医学版） 2018年第2期49卷 200-204页

作者：王佩佩魏大鹏朱彤波四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室成都610041

目的在普通培养基中添加RGD短肽制备新型培养基,观察新型培养基对细胞生长状态、杂交瘤细胞融合和外源基因表达的影响。方法以普通培养基为对照,在普通培养基中添加不同质量浓度的RGD制备新型培养基,通过观察人胰腺上皮细胞株HPDE6-C7... 详细信息

目的在普通培养基中添加RGD短肽制备新型培养基,观察新型培养基对细胞生长状态、杂交瘤细胞融合和外源基因表达的影响。方法以普通培养基为对照,在普通培养基中添加不同质量浓度的RGD制备新型培养基,通过观察人胰腺上皮细胞株HPDE6-C7的生长增殖情况确定RGD的最佳质量浓度,然后,在培养基中接种不同浓度(5×10~4、10~5、5×10~5 mL^(-1))的HPDE6-C7细胞,通过倒置显微镜观察细胞的形态、贴壁、长势和密度情况;再分别用普通培养基和添加RGD短肽的新型培养基进行杂交瘤细胞的融合,比较两种培养基融合后克隆形成率和克隆阳性率的差异;通过转染含绿色荧光蛋白(GFP)的质粒观察其荧光强度的方法和转染过表达KRAS质粒观察其蛋白表达的方法,观察添加RGD短肽的新型培养基相比普通培养基在转染外源基因表达水平方面的优势。结果 RGD短肽使用的最佳质量浓度为10~ng/mL;添加RGD短肽的新型培养基所培养的细胞相比普通培养基形态更佳、贴壁更好、增殖更快。同时,添加RGD短肽的新型培养基应用于细胞融合所形成克隆的百分率和克隆阳性率均高于普通培养基(P<0.05);与普通培养基比较,此新型培养基在转染外源基因GFP后荧光强度更高(P<0.05),表达外源基因KRAS的蛋白水平也更高(P<0.05)。结论添加RGD短肽的新型培养基在细胞生长状态、杂交瘤细胞融合及外源基因表达方面有突出优势,RGD短肽应用于细胞培养可能具有广泛前景和潜在的价值。

关键词：新型培养基 RGD 细胞融合外源基因

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抑制Jak3激酶活性诱导NALM-6白血病细胞凋亡

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华西医科大学学报 2002年第1期33卷 25-27页

作者：胡为民章崇杰张平魏大鹏赵宗蓉蔡美英四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室成都610041

目的　研究 Jak3的活化与急性淋巴细胞白血病 (AL L)之间的关系。方法　在不同浓度的 Jak3抑制剂 AG490处理 Jak3活化的 AL L 前 B细胞株 NAL M- 6细胞后 ,用流式细胞术及噻唑蓝法分析细胞的凋亡、增殖情况。结果　除 5 μm ol/ L 组外 ... 详细信息

目的　研究 Jak3的活化与急性淋巴细胞白血病 (AL L)之间的关系。方法　在不同浓度的 Jak3抑制剂 AG490处理 Jak3活化的 AL L 前 B细胞株 NAL M- 6细胞后 ,用流式细胞术及噻唑蓝法分析细胞的凋亡、增殖情况。结果　除 5 μm ol/ L 组外 ,经 10、15、2 0 μm ol/ L AG490处理后 NAL M- 6细胞均有明显的亚 G1 峰 ,与 DMSO对照相比 ,凋亡率均有显著增加 (P<0 .0 5 ) ;噻唑蓝法示除 5 μmol/ L 组外 ,与 DMSO对照相比 ,10、15、2 0 μm ol/ LAG490均能显著抑制 NAL M- 6细胞的增殖 (P<0 .0 5 )。以上作用呈剂量依赖性关系。结论　 Jak3抑制剂 AG490能抑制 NAL M- 6细胞的增殖并诱导凋亡 ,提示 Jak3的活化与前 B型 AL L

关键词： Jak3激酶 AG490 急性淋巴细胞白血病 NALM-6细胞系细胞凋亡

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组蛋白去乙酰化酶抑制剂影响肿瘤进程相关基因的生物信息学分析

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基因组学与应用生物学 2017年第3期36卷 1139-1149页

作者：姚印温剑平柳忠辉赵佳吉林大学基础医学院医学遗传学教研室长春130021 吉林大学基础医学院医学免疫学教研室长春130021

肿瘤是一种威胁人类身体健康的常见病和多发病,很难治愈。目前,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)已经作为靶向治疗研究的新热点,恩替诺特(Entinostat)等HDACi已经开始应用于肿瘤治疗的临床试验阶段,但是其作用机制尚不明确。本试验通过Pub... 详细信息

肿瘤是一种威胁人类身体健康的常见病和多发病,很难治愈。目前,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)已经作为靶向治疗研究的新热点,恩替诺特(Entinostat)等HDACi已经开始应用于肿瘤治疗的临床试验阶段,但是其作用机制尚不明确。本试验通过Pubmed等数据库进行文献检索,利用DAVID进行GO分析以及Cytoscape等多种数据库进行数据处理、挖掘,得到HDACi肿瘤相关基因的调控网络及代谢路径。经过相关分析,得到的HDACi肿瘤关联基因的功能作用模块,这将为HDACi作用机制的预测和今后开拓HDACi肿瘤治疗的研究提供依据,同时也为寻找HDACi的辅助药物提供了指导。

关键词：肿瘤 HDACi GO分析调控网络

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小鼠体内抗牛血清白蛋白B细胞克隆对McAb筛选的影响

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四川大学学报（医学版） 2003年第4期34卷 691-693页

作者：王霞魏大鹏蔡美英四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室成都610041

目的　探讨小鼠体内存在的抗牛血清白蛋白 B细胞克隆对抗原特异性 Mc Ab筛选的影响。方法　在Mc Ab筛选过程中 ,采用间接 EL ISA法 ,分别以人重组高效复合干扰素 (r SIFN- co)和 BSA为抗原包被酶标板 ,对杂交瘤细胞培养上清进行“双筛”... 详细信息

目的　探讨小鼠体内存在的抗牛血清白蛋白 B细胞克隆对抗原特异性 Mc Ab筛选的影响。方法　在Mc Ab筛选过程中 ,采用间接 EL ISA法 ,分别以人重组高效复合干扰素 (r SIFN- co)和 BSA为抗原包被酶标板 ,对杂交瘤细胞培养上清进行“双筛”,建立 r SIFN- co/ BSA双阳性杂交瘤细胞克隆和 r SIFN- co单阳性杂交瘤细胞克隆 ,并且对所建立的各株杂交瘤细胞培养上清和正常小鼠血清 ,用 BSA进行吸附抑制实验。结果　建立了 1株r SIFN- co/ BSA双阳性杂交瘤细胞株 ,3株 r SIFN- co单阳性杂交瘤细胞株 ,双阳性杂交瘤细胞株培养上清经 BSA预先吸附后 ,与 r SIFN- co的反应性被显著抑制 (P<0 .0 5 )。而且正常小鼠血清与 r SIFN- co呈阳性反应 ,经 BSA吸附后 ,与 r SIFN- co的反应也被显著抑制。结论　在杂交瘤细胞筛选中 ,存在对特异性抗原和用于封闭酶标板的BSA显示双阳性的杂交瘤细胞克隆 ,提示小鼠体内可能天然存在抗 BSA的 B细胞克隆 ,它们在 Mc Ab筛选过程中会引起假阳性反应 ,因而在杂交瘤细胞筛选过程中应该用特异性抗原和 BSA进行“双筛”。

关键词： McAb 制备牛血清白蛋白酶联免疫吸附试验小鼠

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重组人L型丙酮酸激酶N末端单克隆抗体的制备与鉴定

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四川大学学报（医学版） 2010年第4期41卷 571-574页

作者：廖婷婷张晨阳蒋小梅魏大鹏章崇杰四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室成都610041

目的制备抗人L型丙酮酸激酶N末端(PK-N)的单克隆抗体并对其特异性进行鉴定。方法以PK-N-GST-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用EL... 详细信息

目的制备抗人L型丙酮酸激酶N末端(PK-N)的单克隆抗体并对其特异性进行鉴定。方法以PK-N-GST-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、Western blot、免疫组化对此单克隆抗体特性进行鉴定。结果筛选到两株能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的细胞株,亚类鉴定重链为IgG2b,轻链为kappa链。ELISA法测定腹水效价分别为1∶409600和1∶102400,抗体相对亲和力分别为3.54×108L/mol和2.72×108L/mol。Western blot显示抗体能特异识别免疫原和人肝细胞株HL-7702中的天然丙酮酸激酶蛋白。免疫组化进一步显示了其在细胞及组织中的定位,均匀的分布于细胞的胞浆中。结论成功制备了抗PK-N单克隆抗体。

关键词：单克隆抗体重组人L型丙酮酸激酶糖代谢

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嵌合免疫受体活性的体外检测

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中国免疫学杂志 2011年第6期27卷 511-513页

作者：骆耐香刘菁桂林医学院微生物学与免疫学教研室桂林541004

目的:体外检测嵌合免疫受体3(CIR3)的活性,为肿瘤的过继免疫治疗提供可靠依据。方法:将已经构建好的CIR3通过电穿孔法转染人T淋巴细胞,检测其在T淋巴细胞的表达及与CEA阳性胃癌细胞株MKN-45的结合情况和IL-2产生情况。结果:CIR3成功转... 详细信息

目的:体外检测嵌合免疫受体3(CIR3)的活性,为肿瘤的过继免疫治疗提供可靠依据。方法:将已经构建好的CIR3通过电穿孔法转染人T淋巴细胞,检测其在T淋巴细胞的表达及与CEA阳性胃癌细胞株MKN-45的结合情况和IL-2产生情况。结果:CIR3成功转染并表达在T细胞的表面,转染CIR3的T细胞体外能够识别胃癌细胞株MKN-45并与之结合形成典型的花环结构,受CEA刺激后能产生细胞因子IL-2。结论:表达在T淋巴细胞表面的CIR3能够有效结合肿瘤细胞并不受MHC的限制,受CEA刺激后能产生细胞因子IL-2,为下一步的体内实验提供可靠依据。

关键词：嵌合免疫受体流式细胞术 ELISA 体外

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