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硒对氧化偶氮甲烷所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部促肾上腺皮质激素阳性细胞的影响

解剖学报 2008年第4期39卷 493-497页

作者：孙红亚唐军民唐岩甄昱扬州大学医学院组织学与胚胎学教研室扬州225001 北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083

目的观察硒对致癌剂氧化偶氮甲烷(AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部ACTH阳性细胞的影响。方法随机将20只3周龄SPF级断乳雄性SD大鼠分为正常对照组、实验对照组、致癌剂前补硒组、致癌剂后补硒组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连... 详细信息

目的观察硒对致癌剂氧化偶氮甲烷(AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部ACTH阳性细胞的影响。方法随机将20只3周龄SPF级断乳雄性SD大鼠分为正常对照组、实验对照组、致癌剂前补硒组、致癌剂后补硒组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连续2周,诱导大鼠结肠癌形成。亚硒酸钠(Na2SeO3)水溶液(4mg/L)分别在AOM前、后干预,并持续至实验结束。各组均于34周后取大鼠垂体,用免疫组织化学SP法,观察垂体远侧部ACTH阳性细胞的形态结构及免疫组织化学反应强度,并进行图像分析。结果亚甲基蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝(AC)和异常隐窝灶(ACF)。免疫组织化学法显示,实验对照组大鼠垂体远侧部ACTH阳性细胞与正常对照组比较,阳性反应显著性增强(P<0.01);硒干预的各组与实验对照组相比,ACTH阳性细胞的阳性反应进一步增强(P<0.01)。结论硒可增强AOM所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部ACTH阳性细胞的功能。

关键词：结肠癌亚硒酸钠 ACTH阳性细胞垂体氧化偶氮甲烷免疫组织化学大鼠

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人细胞色素P450 2A13与GFP融合基因共表达慢病毒载体的构建与表达

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重庆医科大学学报 2011年第10期36卷 1228-1232页

作者：范晓丽谭宁孙莉桂林医学院基础医学院组织学与胚胎学教研室桂林541004

目的:构建人细胞色素P450 2A13(CYP2A13)基因与绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)共表达的慢病毒载体,并转染肺腺癌A549细胞使之持续高表达CYP2A13基因。方法:采用基因重组技术,将CYP2A13基因与GFP连接,构建慢病毒载体。转染... 详细信息

目的:构建人细胞色素P450 2A13(CYP2A13)基因与绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)共表达的慢病毒载体,并转染肺腺癌A549细胞使之持续高表达CYP2A13基因。方法:采用基因重组技术,将CYP2A13基因与GFP连接,构建慢病毒载体。转染293T细胞,包装后产生病毒液,测定其滴度。包装后的病毒感染A549细胞。激光共聚焦显微镜检测GFP-CYP2A13融合蛋白在A549细胞中的定位;Real-time PCR和Western blot检测A549细胞中CYP2A13表达情况。结果:成功构建人细胞色素CYP2A13基因与GFP共表达的慢病毒载体,转染293T细胞后,荧光显微镜下可见有大量的绿色荧光。激光共聚焦显微镜观察,感染后的A549细胞的胞核和胞浆中有绿色荧光,Real-time PCR和Western blot检测到A549细胞中CYP2A13的高表达。结论:成功构建了CYP2A13与GFP基因共表达的慢病毒表达载体,为研究CYP2A13基因与呼吸系统肿瘤的关系,提供了稳定的感染细胞的载体。

关键词： CYP2A13 绿色荧光蛋白慢病毒载体转染

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大鼠生殖道沙眼衣原体感染后C3a、γ干扰素和白血病抑制因子在子宫蜕膜的表达及其意义

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解剖学报 2010年第4期41卷 587-591页

作者：王菲菲吴求吉谢哲肖长纪孟运莲武汉大学基础医学院组织学与胚胎学教研室武汉430071

目的观察生殖道沙眼衣原体(CT)初次感染后妊娠大鼠在胚胎着床窗口期子宫蜕膜C3a,γ干扰素(IFN-γ)和白血病抑制因子(LIF)表达量的变化。方法选择成年健康状况良好的雌性SD大鼠35只(除去不符合标准的雌鼠5只,最终以30只作统计学分析),随... 详细信息

目的观察生殖道沙眼衣原体(CT)初次感染后妊娠大鼠在胚胎着床窗口期子宫蜕膜C3a,γ干扰素(IFN-γ)和白血病抑制因子(LIF)表达量的变化。方法选择成年健康状况良好的雌性SD大鼠35只(除去不符合标准的雌鼠5只,最终以30只作统计学分析),随机均分为实验组和对照组两组。实验组通过阴道接种沙眼衣原体D型株,对照组阴道注射等量生理盐水。分别在大鼠妊娠后第5、第6和第7天(即胚胎着床窗口期)处死大鼠,并从子宫取材,通过免疫组织化学法定量检测在胚胎着床窗口期子宫蜕膜C3a、IFN-γ和LIF表达量。结果 30只大鼠子宫蜕膜组织均有C3a、IFN-γ和LIF表达。实验组C3a和IFN-γ表达量均低于对照组(P<0.01);实验组在妊娠第5天和第6天LIF比对照组低表达(P<0.01),妊娠第7天两组表达量无显著差异(P>0.05)。实验组中IFN-γ和C3a在子宫蜕膜中的表达呈正相关(r=0.9965),IFN-γ与LIF的表达无相关性(r=0.2331)。结论生殖道感染CT后,子宫局部C3a、IFN-γ和LIF表达量有变化并与着床有密切联系。

关键词： C3a γ干扰素白血病抑制因子沙眼衣原体蜕膜免疫组织化学大鼠

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4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

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中国药理学与毒理学杂志 2007年第2期21卷 107-112页

作者：陈焱齐社宁兰州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室甘肃兰州730000

目的比较4-[4”-（2”，2”，6”，6”．四甲基-1”-哌啶氮氧自由基）氨基]4’-去甲表鬼臼毒素（GP-7）对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞（K562／ADM细胞）的抑制作用是否优于依托泊苷。方法以依托泊苷和K562细胞... 详细信息

目的比较4-[4”-（2”，2”，6”，6”．四甲基-1”-哌啶氮氧自由基）氨基]4’-去甲表鬼臼毒素（GP-7）对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞（K562／ADM细胞）的抑制作用是否优于依托泊苷。方法以依托泊苷和K562细胞为对照，用不同浓度GP-7处理K562／ADM细胞不同时间，MTT比色法测定细胞增殖，流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率，普通光学显微镜观察细胞凋亡形态，琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果8～128mol·L^-1GP-7处理48h或64μmol·L^-1GP-7处理24～72h，GP-7对K562／ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性（r=0．947，P〈0．05）和时间依赖性（r=0．999，P〈0．01）。GP-7及依托泊苷对K562／ADM的IC∞分别为（45．9±1．8）及（68．7±4．6）***·L^-1；64μmol·L^-1GP-7作用48h可使G2／M期细胞明显增多，相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多；GP-7可引起K562／ADM和K562细胞凋亡，但其引起的K562／ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异；GP-7可引起K562／ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解，但GP-7引起的K562／ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞；128及256μmol·L^-1GP-7或依托泊苷处理K562／ADM和K562细胞48h，GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷，但32和64μmol·L^-1时作用则相反。结论GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562／ADM的增殖，诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562／ADM的作用优于依托泊苷。

关键词：鬼臼毒素白血病髓样慢性细胞凋亡抗药性多药

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NGF诱导PC12细胞向神经元的分化

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吉林大学学报（医学版） 2007年第5期33卷 827-830页

作者：王秀力陈东刘佳梅吉林大学基础医学院组织学与胚胎学教研室吉林长春130021 广东医学院组织学与胚胎学教研室广东湛江524023

目的:研究NGF诱导PC12细胞向神经元的分化情况。方法:实验分为10、20、50和80μg.L-1NGF组及含10%胎牛血清的对照组。不同浓度的NGF组均诱导PC12细胞72h,在24、48和72h分别观察细胞的突起长度和细胞最大直径的变化情况;在诱导72h后利用... 详细信息

目的:研究NGF诱导PC12细胞向神经元的分化情况。方法:实验分为10、20、50和80μg.L-1NGF组及含10%胎牛血清的对照组。不同浓度的NGF组均诱导PC12细胞72h,在24、48和72h分别观察细胞的突起长度和细胞最大直径的变化情况;在诱导72h后利用免疫细胞化学技术,观察不同剂量NGF作用后PC12细胞向MAP2阳性细胞分化的情况。结果:20、50和80μg.L-1NGF组MAP2阳性细胞数明显高于对照组,且以50μg.L-1组最为明显(P<0.05)。与对照组比较,加入NGF组分化的细胞其突起和细胞直径明显增长和增大,以50μg.L-1组最为明显(P<0.01)。结论:NGF能够诱导PC12细胞向神经元分化,50μg.L-1的NGF浓度是诱导PC12细胞向神经元分化的最适浓度。

关键词： PC12细胞神经生长因子分化

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Islet-1基因逆转录病毒表达载体的构建

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吉林大学学报（医学版） 2007年第5期33卷 831-833页

作者：刘佳梅陈东孟晓婷吉林大学基础医学院组织学与胚胎学教研室吉林长春130021 广东医学院组织学与胚胎学教研室广东湛江523808

目的:分离大鼠胰岛素基因增强结合蛋白1(Islet-1)基因,构建plEGFP-C1-Islet-1逆转录病毒表达载体。方法:利用RT-PCR技术钓取大鼠Islet-1基因,克隆到测序载体PGET-1TA中,测序后再亚克隆到逆转录病毒载体plEGFP-C1中,通过脂质体2000将其... 详细信息

目的:分离大鼠胰岛素基因增强结合蛋白1(Islet-1)基因,构建plEGFP-C1-Islet-1逆转录病毒表达载体。方法:利用RT-PCR技术钓取大鼠Islet-1基因,克隆到测序载体PGET-1TA中,测序后再亚克隆到逆转录病毒载体plEGFP-C1中,通过脂质体2000将其导入包装细胞PA317中,经G418筛选后,获得阳性克隆。结果:RT-PCR产物为1050bp条带,经测序鉴定与GenBank中Islet-1基因的序列相同;构建的plEGFP-C1-Islet-1载体经酶切鉴定,证实Islet-1基因片段正确插入逆转录表达载体中。用共聚焦激光扫描显微镜观察导入Islet-1基因的PA317细胞,可见细胞发出绿色荧光。结论:分离得到了大鼠Islet-1基因并成功构建了plEGFP-C1-Islet-1表达载体。

关键词：胰岛素基因增强结合蛋白1基因克隆重组逆转录病毒载体

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Islet-1基因变异体的发现及其在神经干细胞内的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第6期23卷 495-497页

作者：刘佳梅陈东孟晓婷吉林大学基础医学院组织学与胚胎学教研室吉林长春130021 广东医学院组织学与胚胎学教研室广东东莞523808

目的:构建大鼠Islet-1基因逆转录病毒表达载体,利用此载体将Islet-1基因转导入神经干细胞(NSC)内。方法:利用RT-PCR技术钓取大鼠Islet-1基因,将其插入到逆转录病毒载体plEGFP-C1中,利用包装细胞PA317将Islet-1基因转导入NSC内,观察Isle... 详细信息

目的:构建大鼠Islet-1基因逆转录病毒表达载体,利用此载体将Islet-1基因转导入神经干细胞(NSC)内。方法:利用RT-PCR技术钓取大鼠Islet-1基因,将其插入到逆转录病毒载体plEGFP-C1中,利用包装细胞PA317将Islet-1基因转导入NSC内,观察Islet-1基因在NSC内的表达。结果:经PCR、酶切及荧光检测等证实,成功构建了plEGFP-C1-Islet-1表达载体,并应用免疫组化技术证明Islet-1在NSC内有表达。在实验中首次发现了Islet-1基因的变异体。结论:重组Islet-1基因逆转录病毒载体的构建为进一步探讨Islet-1基因是否参与NSC向运动神经元分化及其可能的作用机制奠定了坚实的实验基础。

关键词： Islet-1基因克隆重组逆转录病毒载体变异体

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胶原蛋白具有促进肿瘤相关巨噬细胞向M1型极化的作用

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解剖学报 2019年第4期50卷 445-450页

作者：苏小薇吴波孙海梅杜雅兰周德山季凤清首都医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室

目的以临床结直肠肿瘤患者标本和原位癌小鼠模型以及小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,探讨结直肠肿瘤微环境中胶原蛋白促进肿瘤相关巨噬细胞极化的作用。方法应用免疫荧光染色检测结直肠癌患者肿瘤组织巨噬细胞的分布,检测原位癌模型小鼠肿... 详细信息

目的以临床结直肠肿瘤患者标本和原位癌小鼠模型以及小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,探讨结直肠肿瘤微环境中胶原蛋白促进肿瘤相关巨噬细胞极化的作用。方法应用免疫荧光染色检测结直肠癌患者肿瘤组织巨噬细胞的分布,检测原位癌模型小鼠肿瘤组织巨噬细胞的量和分布;Masson染色肿瘤组织内胶原纤维。提取小鼠腹腔巨噬细胞,接种于不同浓度Ⅰ型胶原蛋白包被的培养皿,Real-time PCR检测巨噬细胞的肿瘤坏死因子(TNF)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、CD163、CD206等基因表达。结果人结肠癌组织标本和小鼠原位癌模型可见巨噬细胞主要分布于肿瘤组织的间质,主要为M1型,肿瘤实质部分巨噬细胞主要为M2型;细胞实验表明,胶原蛋白明显促进巨噬细胞向促进炎症抑制肿瘤的M1型巨噬细胞极化,抑制巨噬细胞向促进肿瘤的M2型极化;Masson染色可见间质内含有大量胶原纤维,而肿瘤实质细胞周围胶原纤维较少。结论胶原蛋白具有促进巨噬细胞向M1型极化的作用,而肿瘤实质细胞周围胶原纤维减少,可能与巨噬细胞向M2型极化,发挥促进肿瘤发生发展的作用有关。

关键词： Ⅰ型胶原蛋白巨噬细胞结直肠癌极化实时定量聚合酶链反应人小鼠

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小鼠长髓襻肾单位在髓质的分布

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解剖学报 2012年第2期43卷 250-252页

作者：张萍温昱刘宁宇梁非任昊翟效月辽宁医学院组织学胚胎学教研室辽宁锦州121001 中国医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室沈阳110001

目的肾髓质渗透梯度的形成与髓襻走行及转运功能关系密切,本研究拟建立长髓袢肾单位在髓质的走行规律。方法 C57BL6/J小鼠3只,灌流固定后取肾组织块,树脂812包埋,垂直肾长轴连续半薄切片,从肾被膜到内髓,共得到2 000张2.5μm厚的连续切... 详细信息

目的肾髓质渗透梯度的形成与髓襻走行及转运功能关系密切,本研究拟建立长髓袢肾单位在髓质的走行规律。方法 C57BL6/J小鼠3只,灌流固定后取肾组织块,树脂812包埋,垂直肾长轴连续半薄切片,从肾被膜到内髓,共得到2 000张2.5μm厚的连续切片,显微镜下获取数字图像,计算机配准,C语言编程,进而追踪26条长髓襻肾单位。结果长髓襻肾单位来自中层和近髓质区的皮质,其髓襻襻曲分布在内髓不同水平,最深的可达肾乳头。通过数字追踪发现,在外髓内带外侧区,髓襻降支细段起始部高度盘曲走行,其盘曲部分的长度是其直线距离的2倍。在盘曲走行中,与同源的髓襻升支粗段间隔排列。最长的长髓襻升支粗段走行在外髓内带的血管丛。在外髓内带的内侧区,髓襻降支细段与髓襻升支粗段紧密相邻,直行进入内髓。结论降支细段在外髓内带高度盘曲走行,在增加了这一节段长度的同时,也增加了这一节段的转运功能,提示此结构特征对该区域的渗透梯度形成可能产生重要影响。

关键词：髓襻三维重建小鼠

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三氯化镧对体外培养人肝癌细胞的抑制作用

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吉林大学学报（医学版） 2006年第6期32卷 1029-1033页

作者：刘玉荣陈东姜文华陈爱军吉林大学基础医学院组织学与胚胎学教研室吉林长春130021 广东医学院组织学与胚胎学教研室广东湛江524023

目的:研究三氯化镧(LaCl3)对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响及其作用机理。方法:体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721,给予LaCl3(0.05、0.10、0.50及1.00 mmol.L-1)培养不同时间(1、3、5和7 d),观察癌细胞生长曲线、集落抑制率、培养上清... 详细信息

目的:研究三氯化镧(LaCl3)对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响及其作用机理。方法:体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721,给予LaCl3(0.05、0.10、0.50及1.00 mmol.L-1)培养不同时间(1、3、5和7 d),观察癌细胞生长曲线、集落抑制率、培养上清中甲胎蛋白(AFP)的变化。采用流式细胞术检测SMMC-7721细胞周期变化。免疫组织化学检测培养细胞CyclinD1、PCNA、CDK4及P16的表达情况。结果:MTT法显示0.50及1.00 mmol.L-1LaCl3对SMMC-7721生长具有明显的抑制作用,且具有剂量和时间的依赖性;0.10和0.50 mmol.L-1的LaCl3对肝癌细胞集落的形成抑制率分别为51%和67%(P<0.05),1.00 mmol.L-1LaCl3的集落形成抑制率达97%(P<0.01);不同剂量LaCl3作用SMMC-7721细胞3 d后,细胞周期发生明显变化,表现为G0/G1期细胞百分数增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。0.10、0.50及1.00 mmol.L-1LaCl3均可抑制AFP的分泌,其中以1.00 mmol.L-1LaCl3组作用最显著(P<0.01)。免疫细胞化学结果显示,LaCl3促进P16蛋白的表达,使Cyclin D1、PCNA和CDK4蛋白的表达下降。结论:LaCl3对SMMC-7721细胞生长具有明显的抑制作用,其机制可能与阻断细胞周期进程、降低细胞的恶性程度有关。

关键词：稀土元素癌肝细胞细胞周期

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