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蛋白酶激活受体-2激动剂对肝癌细胞增殖的影响

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中华肝脏病杂志 2009年第9期17卷 701-702页

作者：郑艳敏谢立群赵军艳李轩陈小义陈莉海鸥周静武警医学院附属医院消化内科天津300162 武警医学院细胞生物学教研室武警内蒙古总队门诊部

本研究通过体外培养人肝癌细胞株HepG2细胞，初步探讨了HepG2细胞表达蛋白酶激活受体（PAR）-2的水平，以及胰蛋白酶和人工合成的PAR-2激动剂SLIGKV对其增殖的影响。

关键词：癌肝细胞蛋白酶激活受体-2 胰蛋白酶细胞增殖

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PAR-2激动剂对肝癌细胞增殖及Ca^(2+)水平的影响

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中国病理生理杂志 2009年第12期25卷 2371-2375页

作者：郑艳敏谢立群赵军艳李轩陈小义陈莉周静李飞武警医学院附属医院消化内科天津300162 武警医学院细胞生物学教研室天津300162

目的:研究PAR-2激动剂对人肝癌HepG2细胞增殖及细胞内Ca2+浓度([Ca2+]c)的影响。方法:培养人肝癌细胞HepG2,分别利用PAR-2激动剂SLIGKV-NH2及反PAR-2激动肽VKGILS-NH2干预肝癌细胞生长,用Fura-2荧光法测定肝癌细胞内[Ca2+]c,用MTT法检... 详细信息

目的:研究PAR-2激动剂对人肝癌HepG2细胞增殖及细胞内Ca2+浓度([Ca2+]c)的影响。方法:培养人肝癌细胞HepG2,分别利用PAR-2激动剂SLIGKV-NH2及反PAR-2激动肽VKGILS-NH2干预肝癌细胞生长,用Fura-2荧光法测定肝癌细胞内[Ca2+]c,用MTT法检测对肝癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术(FCM)检测细胞周期改变情况,RT-PCR法检测cyclin D1 mRNA表达变化。结果:50μmol/LSLIGKV-NH2刺激HepG2细胞后,[Ca2+]c迅速短暂升高(P<0.01);G0/G1期比例明显降低,S期和G2/M期细胞比例和细胞增殖指数(PI)明显提高(P<0.01);cyclin D1 mRNA的表达显著增加(P<0.01)。SLIGKV-NH2在1-50μmol/L时可以促进HepG2细胞增殖,呈剂量依赖性(P<0.01或P<0.05)。而VKGILS-NH2组与对照组相比差异无显著(P>0.05)。结论:PAR-2激动剂在体外能通过激活PAR-2,诱导HepG2细胞内[Ca2+]c升高,上调cyclin D1 mRNA的表达,加速HepG2细胞周期进程,促进DNA合成,促进肝癌细胞增殖。

关键词：蛋白酶激活受体-2 HepG2细胞细胞增殖钙

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纤维蛋白凝胶对成骨细胞增殖与分化的影响

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中国修复重建外科杂志 2009年第7期23卷 840-844页

作者：陈莉买霞扎拉嘎胡王英惠陈小义中国人民武警部队医学院细胞生物与医学遗传学教研室天津300162

目的分析MC3T3E1细胞在纤维蛋白凝胶(fibrin gel,FG)内的细胞形态学、细胞增殖和成骨细胞分化作用,为将FG应用于组织工程奠定基础。方法将MC3T3E1细胞接种于3种不同浓度(20、10、5mg/mL)的FG内,分别设为实验组A、B、C组,对照组(D组)采... 详细信息

目的分析MC3T3E1细胞在纤维蛋白凝胶(fibrin gel,FG)内的细胞形态学、细胞增殖和成骨细胞分化作用,为将FG应用于组织工程奠定基础。方法将MC3T3E1细胞接种于3种不同浓度(20、10、5mg/mL)的FG内,分别设为实验组A、B、C组,对照组(D组)采用无凝胶正常培养基培养。于不同时间点通过倒置相差显微镜和激光扫描共聚焦显微镜观察细胞在凝胶内的形态学变化,荧光分光光度计测定细胞增殖状态,酶标仪和von Kossa染色分析细胞ALP活性和钙盐沉积;培养14d和21d行RT-PCR检测ALP和骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)mRNA的表达。结果MC3T3E1细胞在A、B、C组FG内培养至21d,细胞具有较长突起且连接成网,而D组细胞呈纺锤形或立方形。D组细胞随培养时间延长荧光强度逐渐增高,至14d达最高,28d降至最低;A、B、C组细胞培养至28d时荧光强度达最高,与D组比较差异有统计学意义(P<0.05)。D组细胞随培养时间延长ALP活性逐渐升高,至28d达最高;A、B组培养21d时ALP活性最强,与D组比较差异有统计学意义(P<0.05),其余各组各时间点与D组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。von Kossa染色示培养21、28d,A组在细胞附近的凝胶区出现矿化结节,D组至28d仍未见矿化结节形成。RT-PCR检测示培养后21d,A组的ALPmRNA和BSP mRNA表达均较D组增强(P<0.05)。结论MC3T3E1细胞在FG内培养21d后成骨细胞分化最明显,细胞增殖维持活跃状态。

关键词：组织工程纤维蛋白凝胶成骨细胞细胞增殖细胞分化

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从噬菌体7肽库中筛选的哇巴因结合肽对血管内皮细胞的保护作用

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第10期25卷 870-874页

作者：徐忠伟徐瑞成陈小义刘英富武警医学院细胞生物学与遗传学教研室职业与环境危害生物标志物天津市重点实验室天津300162

目的:寻找与哇巴因高亲和力结合并抑制其生物功能的相关小分子肽,为治疗原发性高血压提供新策略。方法:以哇巴因为筛选分子,应用M13噬菌体呈现随机7肽库进行筛选。经过3轮生物淘筛,并通过ELISA法鉴定,对噬菌体阳性克隆ssDNA电泳鉴定和... 详细信息

目的:寻找与哇巴因高亲和力结合并抑制其生物功能的相关小分子肽,为治疗原发性高血压提供新策略。方法:以哇巴因为筛选分子,应用M13噬菌体呈现随机7肽库进行筛选。经过3轮生物淘筛,并通过ELISA法鉴定,对噬菌体阳性克隆ssDNA电泳鉴定和基因测序分析。委托合成筛选获得哇巴因结合肽,采用放射配基受体结合法检测其结合活性;MTT法检测血管内皮细胞的增殖抑制率,Hoechst33342/PI双荧光染色检测细胞形态学变化;利用RT-PCR和细胞免疫荧光检测钠泵α1、β1的表达水平;荧光探针检测细胞内游离Na+浓度变化。结果:筛选获得14个阳性克隆,基因测序显示:哇巴因结合肽一致率达64.3%(9/14)。委托合成肽(Arg-Cys-Met-Thr-Ser-Arg-Ser)。放射性配基受体结合法检测显示,合成的哇巴因结合肽能够与哇巴因结合。哇巴因结合肽+哇巴因的EAhy926细胞组增殖抑制率小于哇巴因组(P<0.05);Hoechst33342/PI双荧光染色显示细胞死亡数量减少;RT-PCR和免疫细胞化学检测钠泵α1、β1亚单位转录和翻译水平,显示哇巴因结合肽能拮抗哇巴因所引起钠泵α1亚单位表达的上调、β1亚单位的下调作用;荧光探针显示哇巴因结合肽能够拮抗哇巴因对钠泵的抑制作用。结论:哇巴因特异性结合肽能够阻抑哇巴因对血管内皮细胞的抑制增殖和诱导死亡作用,为研究哇巴因与钠泵的相互作用机制及进一步研究抗哇巴因的分子药物奠定基础。

关键词：哇巴因噬菌体展示肽库结合肽血管内皮细胞细胞死亡钠泵亚单位

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小鼠肾小球毛细血管及肾间质小血管扩张充血与蕨麻的关系

小鼠肾小球毛细血管及肾间质小血管扩张充血与蕨麻的关系

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第二届全国解剖学技术学术会议

作者：刘亚敏徐忠伟刘燕青刘春蓉李雪华刘静谷彦军魏焕萍武警医学院病理教研室武警医学院细胞生物与遗传学教研室

目的:探讨不同浓度的蕨麻提取物对小鼠肾组织结构的影响。方法:昆明小鼠40只,随机分为五组,每组8只。正常对照组用生理盐水灌胃,实验组小鼠用不同浓度的蕨麻提取物每日灌胃,一周后断颈处死。取肝组织用于常规病理检查。结果:实验各组小... 详细信息

目的:探讨不同浓度的蕨麻提取物对小鼠肾组织结构的影响。方法:昆明小鼠40只,随机分为五组,每组8只。正常对照组用生理盐水灌胃,实验组小鼠用不同浓度的蕨麻提取物每日灌胃,一周后断颈处死。取肝组织用于常规病理检查。结果:实验各组小鼠肾小球毛细血管及肾间质小血管均不同程度的扩张充血。结论:实验结果表明可能与蕨麻提取物的不同浓度作用有关

关键词：蕨麻肾小球充血

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三种方式染毒丙烯酰胺对雄性小鼠睾丸细胞DNA损伤的影响

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环境与健康杂志 2009年第10期26卷 880-882页

作者：张晓玲王文娟李媛黄幸崔慧慧边思成杜少华杨建一山西医科大学基础医学院细胞生物与遗传教研室山西太原030001

目的研究腹腔注射、灌胃、皮肤染毒丙烯酰胺(AA)对小鼠睾丸细胞DNA损伤的影响。方法将24只清洁级健康雄性昆明小鼠随机分为4组,分别为空白对照组、腹腔染毒组、灌胃染毒组和皮肤染毒组,每组6只。染毒剂量为25mg/kg,每天1次,连续染毒5d... 详细信息

目的研究腹腔注射、灌胃、皮肤染毒丙烯酰胺(AA)对小鼠睾丸细胞DNA损伤的影响。方法将24只清洁级健康雄性昆明小鼠随机分为4组,分别为空白对照组、腹腔染毒组、灌胃染毒组和皮肤染毒组,每组6只。染毒剂量为25mg/kg,每天1次,连续染毒5d。首次染毒后第6天称体重和睾丸重,计算睾丸系数。采用单细胞凝胶电泳实验对彗星细胞的尾长、尾部DNA%、尾矩(tail moment,TM)、Olive尾矩(olive tail moment,OTM)进行检测。结果染毒后腹腔染毒组和灌胃染毒组小鼠体重均低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。与空白对照组比较,腹腔染毒组、灌胃染毒组和皮肤染毒组小鼠的睾丸重量及其脏器系数均较低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,腹腔染毒组、灌胃染毒组和皮肤染毒组小鼠睾丸细胞DNA的尾长、尾部DNA%、尾矩、Olive尾矩均较高,差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。各染毒组两两比较发现,睾丸细胞DNA的尾长、尾部DNA%、尾矩、Olive尾矩间差异均有统计学意义(P<0.05),均以灌胃染毒组最高,腹腔染毒组次之,皮肤染毒组最低。结论丙烯酰胺可致雄性小鼠睾丸细胞产生DNA损伤,且以灌胃染毒方式产生的毒性作用最为敏感。

关键词： DNA损伤丙烯酰胺睾丸单细胞凝胶电泳

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三氯化铝暴露致雄性小鼠生殖细胞的遗传毒性

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环境与健康杂志 2009年第1期26卷 68-70页

作者：崔慧慧白晓琴李莉王文娟杨建一武云香山西医科大学基础医学院细胞生物与遗传教研室山西太原030001

目的研究三氯化铝(AlCl3)对雄性小鼠生殖细胞的遗传毒性。方法将20只清洁级健康昆明种雄性小鼠按体重随机分为4组,分别为低、中、高剂量AlCl3染毒组(染毒剂量分别为50、75、100mg/kg)和阴性对照组(0.9%生理盐水),每组5只。采用腹腔注射... 详细信息

目的研究三氯化铝(AlCl3)对雄性小鼠生殖细胞的遗传毒性。方法将20只清洁级健康昆明种雄性小鼠按体重随机分为4组,分别为低、中、高剂量AlCl3染毒组(染毒剂量分别为50、75、100mg/kg)和阴性对照组(0.9%生理盐水),每组5只。采用腹腔注射方式进行染毒,连续染毒2d,间隔1天,持续2周。观察染毒前后体重变化,并计算睾丸系数。采用彗星试验测定Olive尾矩,采用精子核荧光染色试验测定未成熟精子率。结果染毒前后高、中、低剂量AlCl3染毒组体重与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。高、中、低剂量AlCl3染毒组睾丸系数均小于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且体重增长值和睾丸系数随着AlCl3染毒剂量的升高而减少。彗星试验中,高、中、低剂量AlCl3染毒组Olive尾矩均长于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);且Olive尾矩随着AlCl3染毒剂量的升高而增加。精子核荧光染色试验中,高、中、低剂量AlCl3染毒组未成熟精子率均高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);且未成熟精子率随着AlCl3染毒剂量的升高而增加。结论AlCl3暴露可对雄性小鼠生殖细胞产生损伤。

关键词：铝睾丸精子遗传毒性

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钠泵抑制剂哇巴因对ECV304细胞连接相关分子表达的影响

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解剖学杂志 2009年第1期32卷 27-31页

作者：买霞徐瑞成陈莉陈小义徐忠伟武警医学院细胞生物学教研室天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室天津300162

目的:探讨钠泵抑制剂哇巴因对细胞连接相关分子表达的影响。方法:以不同浓度哇巴因作用ECV304细胞,用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞形态变化;通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长抑制作用;用Hoechst33342/PI双荧光染色、荧光显... 详细信息

目的:探讨钠泵抑制剂哇巴因对细胞连接相关分子表达的影响。方法:以不同浓度哇巴因作用ECV304细胞,用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞形态变化;通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长抑制作用;用Hoechst33342/PI双荧光染色、荧光显微镜分析细胞死亡特征;应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞连接相关分子钠泵β1亚单位、内皮钙黏蛋白、P120连环蛋白1A和P120连环蛋白3AmRNA的表达。结果:哇巴因以浓度和作用时间依赖的方式抑制ECV304细胞生长;10μmol/L哇巴因作用24h,引起细胞坏死;0.1μmol/L哇巴因作用24～48h,细胞明显脱落,细胞间连接丧失,细胞出现染色质凝集、边移、凋亡小体形成等凋亡特征。RT-PCR结果显示钠泵β1亚单位、内皮钙黏蛋白和P120连环蛋白1A表达下降,P120连环蛋白3A表达上调。结论:哇巴因调节ECV304细胞连接相关分子表达从而影响其黏附和存活。

关键词：哇巴因 ECV304细胞钠泵β1亚单位内皮钙黏蛋白 P120连环蛋白

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三羟异黄酮抑制结肠癌LOVO细胞增殖作用的机制研究

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武警医学院学报 2009年第5期18卷 426-429,433,F0004页

作者：李轩谢立群陈小义陈莉海鸥郑艳敏武警医学院附属医院消化科天津300162 武警医学院细胞生物学与遗传学教研室天津300162

【目的】探讨三羟异黄酮对以雌激素受体β表达为主的结肠癌LOVO细胞的增殖抑制作用及其机制。【方法】以不同浓度三羟异黄酮加入体外培养的LOVO细胞中,用倒置光显微镜观察细胞形态变化;通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖抑制率;用H... 详细信息

【目的】探讨三羟异黄酮对以雌激素受体β表达为主的结肠癌LOVO细胞的增殖抑制作用及其机制。【方法】以不同浓度三羟异黄酮加入体外培养的LOVO细胞中,用倒置光显微镜观察细胞形态变化;通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖抑制率;用Hoechst33342/PI双荧光染色,荧光显微镜分析细胞死亡特征;以流式细胞术检测细胞周期变化;应用半定量逆转录PCR检测caspase-3和bcl-2 mRNA的表达。【结果】10、30、60、90、120μmol/L的三羟异黄酮均可不同程度地抑制LOVO细胞生长;荧光显微镜下可见30μmol/L的三羟异黄酮既可诱导LOVO细胞凋亡,而且凋亡比例随药物浓度增高而增加,120μmol/L的三羟异黄酮可引起细胞部分坏死;30μmol/L的三羟异黄酮可明显影响LOVO的细胞周期经三羟异黄酮处理后,其中G0/G1期细胞比例逐渐减少,G2/M期细胞比例明显增高,阻断细胞生长于G2/M期。RT-RCR果结显示caspase-3 mRNA表达较对照组明显增强(P<0.01),bcl-2 mRNA表达较对照组明显减弱(P<0.01)。【结论】三羟异黄酮能够抑制LOVO细胞生长,其机制可能与影响凋亡相关基因表达有关。

关键词：三羟异黄酮结肠癌 LOVO细胞细胞增殖

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鲨鱼软骨制剂通过下调Bcl-2诱导K562细胞凋亡

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解剖科学进展 2009年第2期15卷 195-198页

作者：王成艳买霞陈莉武警医学院训练部教保处天津300162 武警医学院细胞生物学教研室天津300162

目的探讨鲨鱼软骨制剂(SCP)诱导人红白血病细胞系(K562)凋亡的作用机制。方法以不同浓度SCP加入体外培养的K562细胞中,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst33342/PI荧光染色,荧光显微镜分析凋亡细胞百分率;流式细胞术进行细胞凋亡定量;... 详细信息

目的探讨鲨鱼软骨制剂(SCP)诱导人红白血病细胞系(K562)凋亡的作用机制。方法以不同浓度SCP加入体外培养的K562细胞中,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst33342/PI荧光染色,荧光显微镜分析凋亡细胞百分率;流式细胞术进行细胞凋亡定量;免疫细胞化学染色法检测Bcl-2蛋白的表达。结果SCP明显抑制K562细胞生长,IC50值为1mg/ml以下;荧光显微镜下可见50%以上细胞为凋亡细胞的形态学改变;免疫细胞化学检测显示SCP诱导细胞凋亡过程中Bcl-2表达明显降低。结论SCP诱导K562细胞凋亡,可能与下调Bcl-2表达有关。

关键词：鲨鱼软骨制剂 K562细胞细胞凋亡 Bcl-2

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