检索结果-内蒙古大学图书馆

华西药学杂志 2015年第2期30卷 263-265页

作者：花慧邹浩军宋振国邱丽颖泰州学院医药与化学化工学院江苏泰州225300 江南大学医药学院分子药理研究室江苏无锡214122

目的筛选具有抑制肿瘤新生血管生成作用的药物。方法建立抑制人血管内皮细胞(HMEC1)生长的高通量筛选模型,采用75%乙醇为溶剂浸提药材,研究提取物对HMEC1生长和鸡胚尿囊血管生成的抑制活性,筛选具有抑制HMEC1增殖活性和鸡胚尿囊血管生... 详细信息

目的筛选具有抑制肿瘤新生血管生成作用的药物。方法建立抑制人血管内皮细胞(HMEC1)生长的高通量筛选模型,采用75%乙醇为溶剂浸提药材,研究提取物对HMEC1生长和鸡胚尿囊血管生成的抑制活性,筛选具有抑制HMEC1增殖活性和鸡胚尿囊血管生成的中药。结果 31种中药中对HMEC1增殖具有明显抑制活性的药材有7种,其中对鸡胚尿囊血管生成有明显抑制活性的有4种。结论五倍子、钩藤、黄芩、蒲黄等4种中药具有潜在的研究开发的价值。

关键词：抗肿瘤人血管内皮细胞鸡胚尿囊高通量筛选模型五倍子钩藤黄芩蒲黄

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人乳腺癌细胞及其耐药细胞转录因子表达的差异

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中国药理学通报 2012年第9期28卷 1257-1262页

作者：陈淑娴朱瑞宇付强金坚江南大学医药学院细胞与分子药理研究室江苏无锡214122 江苏省原子医学研究所分子生物中心江苏无锡214063

目的研究阿霉素在不同药敏性肿瘤细胞中转录因子水平的差异,为肿瘤细胞多药耐药机制的研究提供参考。方法通过细胞活力检测野生型乳腺癌细胞(MCF7/W)和对阿霉素耐药的乳腺癌细胞(MCF7/ADM)的药敏性差异;荧光显微镜镜检阿霉素荧光分布;... 详细信息

目的研究阿霉素在不同药敏性肿瘤细胞中转录因子水平的差异,为肿瘤细胞多药耐药机制的研究提供参考。方法通过细胞活力检测野生型乳腺癌细胞(MCF7/W)和对阿霉素耐药的乳腺癌细胞(MCF7/ADM)的药敏性差异;荧光显微镜镜检阿霉素荧光分布;有机溶剂萃取法进行全细胞阿霉素吸收分析;细胞膜和核膜分离检测阿霉素的亚细胞定位;通过转录因子膜分析MCF7/W和MCF7/ADM细胞中转录因子表达差异。结果两株细胞的耐药IC50相差近10 000倍左右;利用镜检和定量分析,发现阿霉素在MCF7/W细胞中主要定位于胞核,而在MCF7/ADM细胞中则蓄积较少且主要定位于胞质;转录因子差异分析发现膜上总345个转录因子中,与野生型细胞相比,耐药细胞的106个转录因子表达上调,32个表达下调。结论阿霉素在耐药细胞与野生型细胞中转录因子表达的差异,可能是干扰阿霉素入核,阻止其功能发挥的基础。

关键词： MCF-7/ADM 阿霉素 IC50 转录因子耐药细胞亚细胞定位

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利用双抗生素标记提高血管钠肽在毕赤酵母中的分泌表达

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中国生物工程杂志 2011年第4期31卷 1-6页

作者：房聪李鹏丁月娣雷楗勇陈蕴金坚江南大学医药学院药物设计与分子药理研究室无锡214122

依照血管钠肽氨基酸序列,根据毕赤酵母密码子偏爱性,人工合成了血管钠肽的编码基因,通过PCR技术,扩增出5'端含有组氨酸标签的血管钠肽基因片段,构建的分泌型表达质粒pPIC9K-VNP,pPICZαB-VNP分别经SalⅠ和SacⅠ线性化后,双质粒转化... 详细信息

依照血管钠肽氨基酸序列,根据毕赤酵母密码子偏爱性,人工合成了血管钠肽的编码基因,通过PCR技术,扩增出5'端含有组氨酸标签的血管钠肽基因片段,构建的分泌型表达质粒pPIC9K-VNP,pPICZαB-VNP分别经SalⅠ和SacⅠ线性化后,双质粒转化毕赤酵母GS115宿主菌后,G418/Zeocin双抗筛选出整合型His+Muts表达菌株,Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析,证明His-VNP在毕赤酵母中可有效分泌表达,摇瓶产量可达70mg/L左右,双质粒整合较单质粒整合重组子目的多肽表达量提高了75%。生物学活性研究表明,表达产物在体外具有对巨噬细胞iNOS和TNFαmRNA的抑制作用。

关键词：血管钠肽毕赤酵母分泌表达双抗标签

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合欢皂苷julibroside J12诱导人微血管内皮细胞凋亡的作用

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中国新药杂志 2011年第14期20卷 1325-1329页

作者：花慧冯磊张小平张莲芬金坚无锡卫生高等职业技术学校江南大学医药学院分子药理研究室江南大学工业生物技术教育部重点实验室

目的:探讨julibroside J12抑制人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells,HMEC-1)凋亡的机制。方法:体外培养HMEC-1,在不同浓度julibroside J12干预不同时间的条件下,采用磺基罗丹明(SRB)染色法测定细胞存活率,同时结合DAPI荧光染色,TUNEL染色法检测细胞凋亡情况;流式细胞仪分析DNA含量、细胞周期以及细胞线粒体跨膜电位(△ψ)的变化。酶标仪检测HMEC-1中凋亡相关蛋白酶Caspase-3,9的含量。结果:合欢皂苷julibroside J12可显著抑制HMEC-1生长(抑制率可达75.6%),并与作用时间和剂量正相关;细胞周期分析表明,julibroside J12作用48 h后,HMEC-1被阻滞在G2/M期,并有较大的凋亡峰(19.49%);julibroside J12作用24 h后,细胞线粒体跨膜电位ΔΨM没有明显改变,Caspase-3,9的含量也未随时间发生相应变化。结论:julibroside J12可以通过诱导HMEC-1凋亡而抑制其增殖,其诱导HMEC-1凋亡的机制可能与线粒体通路无关。

关键词： julibroside J12 人微血管内皮细胞凋亡

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合欢皂甙Julibroside J_8对人微血管内皮细胞凋亡的影响研究

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天然产物研究与开发 2011年第3期23卷 432-435页

作者：花慧冯磊张小平张莲芬金坚江南大学医药学院分子药理研究室无锡卫生高等职业技术学校无锡214028 江南大学工业生物技术教育部重点实验室无锡214122

本文采用体外培养人微血管内皮细胞(HMEC-1),不同浓度和时间的Julibroside J8干预,SRB法测定细胞存活率,同时结合DAPI荧光染色,TUNEL染色法检测细胞凋亡情况;Annexin-V/PI双标记行流式细胞仪测定定量观察细胞凋亡率。发现合欢皂甙Julibr... 详细信息

本文采用体外培养人微血管内皮细胞(HMEC-1),不同浓度和时间的Julibroside J8干预,SRB法测定细胞存活率,同时结合DAPI荧光染色,TUNEL染色法检测细胞凋亡情况;Annexin-V/PI双标记行流式细胞仪测定定量观察细胞凋亡率。发现合欢皂甙Julibroside J8可显著抑制HMEC-1生长,抑制率可达75.6%,并呈时间-剂量效应关系。同时诱导细胞发生凋亡率,最高比例可达32.32%。

关键词： Julibroside J8 HMEC-1 凋亡

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共表达蛋白二硫键异构酶对IFNβ-HSA融合蛋白在毕赤酵母中表达的影响

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中国生物制品学杂志 2010年第4期23卷 346-349,353页

作者：屈琳雷楗勇张琦丁月娣马晓峰陈蕴金坚江南大学医药学院细胞与分子药理研究室江苏无锡214122

目的探讨共表达蛋白二硫键异构酶(PDI)对干扰素β与人血清白蛋白(IFNβ-HSA)融合蛋白在毕赤酵母中表达的影响。方法根据GenBank公布的毕赤酵母PDI序列设计引物,利用PCR方法从毕赤酵母基因组中扩增目的基因片段,插入表达载体pPICZαA,并... 详细信息

目的探讨共表达蛋白二硫键异构酶(PDI)对干扰素β与人血清白蛋白(IFNβ-HSA)融合蛋白在毕赤酵母中表达的影响。方法根据GenBank公布的毕赤酵母PDI序列设计引物,利用PCR方法从毕赤酵母基因组中扩增目的基因片段,插入表达载体pPICZαA,并整合入融合蛋白(IFNβ-HSA)基因工程菌中,筛选共表达PDI的重组酵母菌,甲醇诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,ELISA法检测IFNβ-HSA的表达量。结果经PCR鉴定,重组表达质粒pPICZαA-PDI已转入毕赤酵母KM71/pPIC9K-IFNβ-HSA中。经SDS-PAGE分析,PDI在菌体内大量表达,原始菌株和共表达菌株均明显表达融合蛋白IFNβ-HSA,共表达PDI菌株表达量提高了60%,ELISA法测定达(22.49±3.52)mg/L。结论共表达PDI能促进外源蛋白的分泌表达,为进一步研究在毕赤酵母中过量表达分子伴侣对其分泌外源蛋白的影响奠定了基础。

关键词：蛋白二硫键异构酶毕赤酵母分子伴侣干扰素β 人血清白蛋白融合蛋白

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化疗药体外干预诱导人乳腺癌细胞产生耐药性的研究

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中国药理学通报 2009年第11期25卷 1456-1459页

作者：马晓峰张莲芬屈琳金坚江南大学医药学院细胞与分子药理研究室江苏无锡214122

目的研究化疗药物高浓度冲击法和低浓度干预对乳腺癌细胞MDA-MB-231多药耐药性的影响。方法采用化疗药物紫杉醇、阿霉素高浓度冲击和紫杉醇低浓度短期干预MDA-MB-231细胞,SRB法检测细胞药敏性改变;HE染色检测细胞形态;免疫细胞化学检测P... 详细信息

目的研究化疗药物高浓度冲击法和低浓度干预对乳腺癌细胞MDA-MB-231多药耐药性的影响。方法采用化疗药物紫杉醇、阿霉素高浓度冲击和紫杉醇低浓度短期干预MDA-MB-231细胞,SRB法检测细胞药敏性改变;HE染色检测细胞形态;免疫细胞化学检测P-gp蛋白表达变化;RT-PCR检测MDR1基因表达。结果阿霉素高浓度冲击后细胞未存活,紫杉醇高浓度冲击后细胞能存活并最终稳定生长(MDA-MB-231/a),SRB法检测IC50发现该细胞药敏性与野生型细胞(MDA-MB-231/w)无差异;紫杉醇低浓度短期干预后(MDA-MB-231/b)SRB法检测发现该细胞对多种化疗药的IC50比野生型略有提高;免疫细胞化学显示MDA-MB-231/aP-gp表达与野生型无差异,MDA-MB-231/bP-gp表达略有提高;RT-PCR检测发现MDA-MB-231/b中MDR1基因表达高于MDA-MB-231/w。结论化疗药物高浓度冲击法无法获得MDA-MB-231的耐药细胞,低浓度短期干预可以略微提高细胞的耐药性,提示低浓度持续诱导法可以获得MDA-MB-231的耐药细胞。

关键词：多药耐药人乳腺癌细胞 SRB法免疫细胞化学 RT-PCR紫杉醇阿霉素

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阿霉素和紫杉醇诱发的人乳腺癌耐药细胞株的比较研究

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中国药理学通报 2009年第5期25卷 609-613页

作者：张莲芬马晓峰张小平朱威金坚江南大学医药学院细胞与分子药理研究室江苏无锡214122

目的通过比较研究乳腺癌耐药细胞株的细胞生物学特性,探讨不同化疗药物诱发的多药耐药细胞模型的共性。方法以人乳腺癌细胞株MCF-7为亲本细胞,采用阿霉素(Adriamycin,Adr)及紫杉醇(Taxol,Tax)低浓度持续加量诱导法建立了多药耐药的人乳... 详细信息

目的通过比较研究乳腺癌耐药细胞株的细胞生物学特性,探讨不同化疗药物诱发的多药耐药细胞模型的共性。方法以人乳腺癌细胞株MCF-7为亲本细胞,采用阿霉素(Adriamycin,Adr)及紫杉醇(Taxol,Tax)低浓度持续加量诱导法建立了多药耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7Adr及MCF-7Tax。SRB法测定细胞生长曲线、半数致死浓度(IC50)、耐药指数(RF)和耐药谱;显微镜观察细胞形态,FCM分析细胞动力学周期,免疫组化检测细胞表型变化;Hoechst33342染色分析侧群细胞(side population,sp)比例。结果MCF-7Adr及MCF-7Tax细胞较MCF-7亲本细胞对相应药物的IC50提高500倍,撤药培养100 d后RF仍维持在150倍以上,并对多种化疗药物产生交叉耐药性;耐药细胞分化程度低于同步传代的亲本细胞,细胞倍增时间与亲本细胞接近,但S期细胞明显增加,G1期细胞减少,且随着撤药时间的延长,耐药细胞的增殖速度加快;耐药细胞P-gP、LRP和GSTπ的表达水平较亲本细胞有明显增加,ER阳性表达丢失;耐药细胞中SP细胞比例明显增高。结论MCF-7Adr和MCF-7Tax具有多药耐药细胞的基本生物学共性,两者均可作为研究MDR机制的耐药细胞模型。

关键词：人乳腺癌细胞 MCF-7 多药耐药阿霉素紫杉醇

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人脑钠肽与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及其活性

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中国生物制品学杂志 2009年第3期22卷 226-229页

作者：丁月娣雷楗勇陈蕴张莲芬金坚江南大学医药学院分子药理研究室江苏无锡214122

目的在毕赤酵母中表达重组人脑钠肽(BNP)与人血清白蛋白(HSA)融合蛋白,并检测其活性。方法重叠PCR法拼接BNP二联体与HSA基因,插入表达载体pPIC9K,电穿孔法转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析、Western blot... 详细信息

目的在毕赤酵母中表达重组人脑钠肽(BNP)与人血清白蛋白(HSA)融合蛋白,并检测其活性。方法重叠PCR法拼接BNP二联体与HSA基因,插入表达载体pPIC9K,电穿孔法转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析、Western blot鉴定及活性检测。结果融合基因(BNP)2-HSA经测序正确,重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确。诱导72h,融合蛋白表达量最高,可达200mg/ml,且具有良好的反应原性,其活性为rhBNP标准品的1%。结论已在毕赤酵母中成功表达了具有一定生物活性的(BNP)2-HSA融合蛋白,为开发BNP长效药物奠定了基础。

关键词：人脑钠肽人血清白蛋白融合蛋白毕赤酵母生物活性

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人脑钠肽融合蛋白(HSA-(BNP)_2)在毕赤酵母中的发酵条件及纯化研究

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药物生物技术 2009年第2期16卷 113-117页

作者：丁月娣刘天会陈蕴张莲芬金坚江南大学医药学院分子药理研究室江苏无锡214122

对毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K-HSA-(BNP)2的发酵条件进行了优化,并对表达产物HSA-(BNP)2融合蛋白的纯化工艺进行了摸索。研究表明,菌体生长28h时菌浓较高,可进行诱导;同时,在2%甲醇浓度、培养液浓缩1.5倍、诱导表达72h时融合蛋白产量可... 详细信息

对毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K-HSA-(BNP)2的发酵条件进行了优化,并对表达产物HSA-(BNP)2融合蛋白的纯化工艺进行了摸索。研究表明,菌体生长28h时菌浓较高,可进行诱导;同时,在2%甲醇浓度、培养液浓缩1.5倍、诱导表达72h时融合蛋白产量可达185mg/L。发酵液超滤浓缩后经Q Sepharose强阴离子交换层析和Superdex75凝胶过滤层析,获得的融合蛋白纯度为93%,Western blot分析其既具有BNP免疫原性又具有HSA免疫原性。毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K-HSA-(BNP)2经发酵优化后能高效表达HSA-(BNP)2融合蛋白,经两步层析获得的融合蛋白满足后期药效学与药代动力学实验的要求,为后续研究奠定了基础。

关键词：脑钠肽融合蛋白毕赤酵母发酵优化纯化

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