检索结果-内蒙古大学图书馆

食品与生物技术学报 2015年第5期34卷 494-500页

作者：冯峰胡蝶余涛曾妍邬敏辰江南大学药学院江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡214122

卤代醇脱卤酶可以催化合成具有光学纯的环氧化物及β-取代醇等高价值手性药物中间体。作者所在实验室利用宏基因组技术从无锡新区工业集中地污染土壤中筛选了一段编码基因Y,经测序知其片段包含有765 bp的核苷酸,编码254个氨基酸。经Blas... 详细信息

卤代醇脱卤酶可以催化合成具有光学纯的环氧化物及β-取代醇等高价值手性药物中间体。作者所在实验室利用宏基因组技术从无锡新区工业集中地污染土壤中筛选了一段编码基因Y,经测序知其片段包含有765 bp的核苷酸,编码254个氨基酸。经Blast软件分析,其氨基酸序列与来自根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的卤代醇脱卤酶Hhe C同源性为81%,且含有卤代醇脱卤酶类的保守催化三联体Ser132-Thr145-Arg149。推测其属于卤代醇脱卤酶Hhe C类,命名为Sy Hhe C。根据大肠杆菌Escherichia coli BL21的密码子偏爱性,对基因Y进行密码子优化和人工合成,命名为Syhhe C,构建重组表达质粒p ET28a-Syhhe C,转化感受态*** BL21,表达产物经镍柱亲和层析后获得电泳纯的重组卤代醇脱卤酶re Sy Hhe C。SDS-PAGE分析,re Sy Hhe C的相对分子质量为34 000。以2-溴-1-(4-硝基苯基)-乙醇为底物,re Sy Hhe C催化底物产生2-(4-硝基苯基)环氧乙烷的比活性为5.2 U/mg。

关键词：卤代醇脱卤酶宏基因组技术序列分析密码子优化表达

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重组葡萄糖脱氢酶的酶学性质及其偶联辅酶再生

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食品与生物技术学报 2014年第9期33卷 910-916页

作者：余涛胡蝶邬敏辰汪俊卿冯峰顾颖江南大学药学院江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡214122

为解决生物催化氧化还原反应中辅酶循环问题,人工合成密码子优化后的嗜酸热源体Thermoplasma acidophilum葡萄糖脱氢酶基因Sygdh,于*** BL21 （DE3）中表达,粗酶液经镍柱亲和层析获得纯化的重组葡萄糖脱氢酶***-PAGE显示相对分子质量为4... 详细信息

为解决生物催化氧化还原反应中辅酶循环问题,人工合成密码子优化后的嗜酸热源体Thermoplasma acidophilum葡萄糖脱氢酶基因Sygdh,于*** BL21 （DE3）中表达,粗酶液经镍柱亲和层析获得纯化的重组葡萄糖脱氢酶***-PAGE显示相对分子质量为41.0 kDa.酶学性质分析表明：该酶的最适pH值为7.5,在pH 6.0～8.0稳定;最适反应温度为40℃,在55℃以下稳定;最适条件下其比活性达4.5 U/mg; Zn2＋对其有明显激活作用;该酶对NADP＋的亲和力大于NAD＋且对大多数有机溶剂有良好的耐受性;对D-葡萄糖的Km和Vmax值分别为28.2 mmol/L和6.5 U/mg.在葡萄糖脱氢酶与羰基还原酶偶联构建的NADPH辅酶循环体系中,以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物,羰基还原酶催化产物4-氯-3-羟基丁酸乙酯的产率为99.0％,是未添加葡萄糖脱氢酶时产物产率的3.11倍,表明重组SyGDH具有为生物催化氧化还原反应提供辅酶NADPH再生的能力.

关键词：葡萄糖脱氢酶酶学性质羰基还原酶辅酶循环生物催化

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二硫键对提高木聚糖酶AoXyn11A热稳定性的作用

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食品与生物技术学报 2014年第10期33卷 1038-1043页

作者：刘晓彤邬敏辰殷欣汪俊卿江南大学药学院江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

为提高米曲霉11家族中温木聚糖酶Ao Xyn11A的热稳定性,将Ao Xyn11A与源于Thermomyces lanuginosus的耐热木聚糖酶Xyn A进行三维结构比对分析,发现Xyn A的α-螺旋与β9-折叠之间存在一个二硫键;基于分子动力学模拟预测结果,利用定点突变... 详细信息

为提高米曲霉11家族中温木聚糖酶Ao Xyn11A的热稳定性,将Ao Xyn11A与源于Thermomyces lanuginosus的耐热木聚糖酶Xyn A进行三维结构比对分析,发现Xyn A的α-螺旋与β9-折叠之间存在一个二硫键;基于分子动力学模拟预测结果,利用定点突变技术在Ao Xyn11A的相应位置引入二硫键(Cys108-Cys152),获得突变酶Ao Xyn11AT;分别将Ao Xyn11A及其突变酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,经纯化,获得重组Ao Xyn11A和Ao Xyn11AT,并分析比较温度对其酶活性的影响。结果显示,重组Ao Xyn11AT的最适温度为60℃,比重组Ao Xyn11A提高了5℃;其在50℃下的半衰期t1/250为71 min,较重组Ao Xyn11A(t1/250=25 min)提高了近2倍。研究表明二硫键对提高Ao Xyn11A的热稳定性有重要作用。

关键词：木聚糖酶二硫键定点突变耐热性

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人白介素-29变异体在毕赤酵母中的表达及抗肿瘤活性

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食品与生物技术学报 2016年第2期35卷 185-191页

作者：陆源陈伟李利云彭荣刚李菲邬敏辰江南大学药学院江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

基于生物信息学分析的结果,采用基因突变和大引物PCR技术完成人白细胞介素-29(h IL-29)成熟肽第33位氨基酸的定点突变,成功实现其在毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中的异源表达。重组人白细胞介素-29变异体蛋白(rh IL-29mut33)在不同质... 详细信息

基于生物信息学分析的结果,采用基因突变和大引物PCR技术完成人白细胞介素-29(h IL-29)成熟肽第33位氨基酸的定点突变,成功实现其在毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中的异源表达。重组人白细胞介素-29变异体蛋白(rh IL-29mut33)在不同质量浓度时,对肝癌细胞BEL7402、结肠癌细胞HCT8和胃癌细胞SGC7901的增殖均有抑制作用,而且抑制增殖效应强于野生型rh IL-29。与低质量浓度相比,高质量浓度下rh IL-29mut33对肿瘤细胞增殖抑制作用更强,对上述3种肿瘤细胞的增殖抑制率分别达到(31.76±2.87)%、(22.47±0.26)%和(34.41±0.40)%。rh IL-29mut33良好的生物学活性表明该变异体具有较大的应用潜力。

关键词：人白细胞介素-29 定点突变基因克隆表达抗肿瘤活性

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菜豆环氧化物水解酶的表达及其催化特性研究

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微生物学通报 2018年第4期45卷 797-804页

作者：石小玲阚婷婷李闯宗迅成邬敏辰江南大学药学院江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡214122

【背景】光学纯环氧化物及邻二醇是一类多功能手性砌块。与化学合成法相比,环氧化物水解酶(EHs)介导的生物转化法因环境友好而成为当前的研究热点。【目的】从菜豆(Phaseolus vulgaris)中克隆一种EH基因并进行原核表达,研究重组酶催化... 详细信息

【背景】光学纯环氧化物及邻二醇是一类多功能手性砌块。与化学合成法相比,环氧化物水解酶(EHs)介导的生物转化法因环境友好而成为当前的研究热点。【目的】从菜豆(Phaseolus vulgaris)中克隆一种EH基因并进行原核表达,研究重组酶催化环氧苯乙烷(Styrene oxide,SO)的水解特性。【方法】通过计算机辅助分析EHs的一级结构,推测一种菜豆来源的未知功能蛋白(PvEH4)可能具有EH活性。利用RT-PCR技术,以菜豆总RNA为模板,扩增编码PvEH4的基因pveh4,并实现其在Escherichia coli BL21(DE3)中的表达。利用重组菌***/pveh4全细胞催化SO水解,分析PvEH4的对映选择性和区域选择性。【结果】一级结构分析表明,PvEH4具有α/β折叠型EH特有的保守区域。SDS-PAGE结果显示PvEH4的表观分子量为39.4 kD。PvEH4针对SO的对映选择率(E值)为10.1,区域选择性系数αS和βR分别为99.5%和82.5%。当外消旋SO转化率达到68.1%时,可同时获得99.9%ees的(R)-SO和92.3%eep的(R)-苯乙二醇(Phenyl-1,2-ethanediol,PED),两者的产率分别为31.9%和65.6%。【结论】PvEH4的挖掘不仅增加了植物类EHs的数量,同时也为EHs的蛋白分子改造提供参考。

关键词：菜豆环氧化物水解酶对映选择性区域选择性不对称水解

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内切葡聚糖酶与木聚糖酶在毕赤酵母中的共分泌表达

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食品与生物技术学报 2015年第3期34卷 253-259页

作者：刘高磊胡蝶邬敏辰殷欣汪俊卿江南大学药学院江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡214122

为实现内切葡聚糖酶和木聚糖酶在毕赤酵母中的共分泌表达,进而降低酶制剂的生产成本,构建含木聚糖酶基因的重组表达载体pPICZαA-Aoxyn11A,经SacI线性化后,电转化至含内切葡聚糖酶基因Aucel12A的重组毕赤酵母GSC7中,获得双重重组毕赤酵... 详细信息

为实现内切葡聚糖酶和木聚糖酶在毕赤酵母中的共分泌表达,进而降低酶制剂的生产成本,构建含木聚糖酶基因的重组表达载体pPICZαA-Aoxyn11A,经SacI线性化后,电转化至含内切葡聚糖酶基因Aucel12A的重组毕赤酵母GSC7中,获得双重重组毕赤酵母GSCX8。经甲醇诱导表达后,GSCX8发酵上清液中内切葡聚糖酶和木聚糖酶的活性分别为47.77IU/mL和192.71IU/mL,为单独表达菌株GSC7和GSX5的85%和80%。酶学性质分析显示,内切葡聚糖酶的最适pH为4.0,在pH3.0-8.5稳定;最适温度为50℃,在60℃以下稳定。木聚糖酶的最适pH为5.5,在pH3.0-10.0稳定;最适温度为55℃,在50℃以下稳定。GSCX8遗传稳定性测试结果表明,内切葡聚糖酶和木聚糖酶在毕赤酵母中实现了稳定的共表达。

关键词：内切葡聚糖酶木聚糖酶毕赤酵母共分泌表达

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阿魏酸酯酶与纤维素酶协同水解麦麸释放阿魏酸的研究

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食品与生物技术学报 2015年第4期34卷 379-384页

作者：曾妍于皓杰杨标殷欣邬敏辰江南大学药学院江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡2141222 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

研究了重组阿魏酸酯酶和纤维素酶协同作用水解去淀粉麸皮对阿魏酸释放量的影响。以高效液相色谱法检测阿魏酸的提取量,结果显示,底物的超声预处理最佳条件为350 W,20 min,是未经超声处理的底物阿魏酸释放率的1.45倍,单独使用阿魏酸酯酶(... 详细信息

研究了重组阿魏酸酯酶和纤维素酶协同作用水解去淀粉麸皮对阿魏酸释放量的影响。以高效液相色谱法检测阿魏酸的提取量,结果显示,底物的超声预处理最佳条件为350 W,20 min,是未经超声处理的底物阿魏酸释放率的1.45倍,单独使用阿魏酸酯酶(re Ao Fae A)30 U时阿魏酸的释放率仅为4.1%,单独使用纤维素酶(r Au Cel12A)并不释放阿魏酸,当两种酶协同作用时,阿魏酸的释放率明显提高,经单因素试验确定双酶协同作用的最佳条件为:re Ao Fae A的最适添加量为30 U,r Au Cel12A的最适添加量为70 U,水解时间为10 h,水解温度为40℃,水解p H为5.0,料液质量体积比为1 g:30 m L,此时阿魏酸的释放率为23.6%。该结果表明,去淀粉麸皮中纤维素的降解,对提高阿魏酸酯酶水解释放阿魏酸效率具有重要作用。

关键词：阿魏酸酯酶纤维素酶淀粉麸皮协同作用阿魏酸

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王不留行黄酮苷软膏剂体外透皮吸收研究

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天然产物研究与开发 2016年第12期28卷 1978-1982页

作者：侯豹陈婷张治宣宫海凤杨薇蔡维维邱丽颖江南大学药学院天然药物研究室无锡214122 江南大学无锡医学院无锡214122

为了研究渗透吸收促进剂氮酮用量对王不留行黄酮苷软膏剂体外经皮渗透性能的影响及为该化合物经皮给药系统的开发提供参考。本实验采用HPLC测定王不留行黄酮苷的含量,流动相为甲醇和水,检测波长280 nm。选取大鼠背部皮肤,通过Franz垂直... 详细信息

为了研究渗透吸收促进剂氮酮用量对王不留行黄酮苷软膏剂体外经皮渗透性能的影响及为该化合物经皮给药系统的开发提供参考。本实验采用HPLC测定王不留行黄酮苷的含量,流动相为甲醇和水,检测波长280 nm。选取大鼠背部皮肤,通过Franz垂直扩散池考察王不留行黄酮苷软膏剂透皮性能,结果表明24 h内,不同浓度的氮酮对王不留行黄酮苷软膏剂透皮吸收均有一定的促进作用,其促渗作用为1%氮酮>0.5%氮酮>5%氮酮>3%氮酮>0%氮酮。本实验说明氮酮能促进王不留行黄酮苷软膏剂中的王不留行黄酮苷透皮吸收,以1%的氮酮促透效果最佳。

关键词：透皮吸收黄酮苷软膏剂氮酮

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新型菜豆环氧化物水解酶的异源表达及对映归一性催化特性

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中国生物工程杂志 2016年第10期36卷 21-27页

作者：叶慧华胡蝶李闯程建青邓超邬敏辰江南大学药学院无锡214122 生物工程学院无锡214122 无锡医学院无锡214122

为挖掘新型环氧化物水解酶(EH),探讨其对映归一性催化特性,以菜豆(Phaseolus vulgaris)总RNA为模板,采用RT-PCR扩增了一种菜豆EH(Pv EH1)的编码基因pveh1,并将其在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达。一级和三维结构分析表明,Pv EH1与绿豆... 详细信息

为挖掘新型环氧化物水解酶(EH),探讨其对映归一性催化特性,以菜豆(Phaseolus vulgaris)总RNA为模板,采用RT-PCR扩增了一种菜豆EH(Pv EH1)的编码基因pveh1,并将其在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达。一级和三维结构分析表明,Pv EH1与绿豆和苜蓿EHs的同源性分别为85.7和81.1%,其催化三联体为Asp^(101)-His^(299)-Asp^(264),属于α/β水解酶超家族。当Pv EH1催化外消旋环氧苯乙烷水解的转化率达99.1%时,产物(R)-苯乙二醇的对映体纯度为33.6%e.e.p。Pv EH1对(S)-和(R)-SO的区域选择性系数α_S和β_R分别为91.1和53.3%。Pv EH1的挖掘及其对映归一性催化特性的分析不仅增加了此类植物EHs的数目,而且为其归一性催化机制的研究和区域选择性的改造奠定了基础。

关键词：菜豆环氧化物水解酶表达对映归一性

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基于L-NAME诱导的高血压小鼠血清代谢组学研究

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中国药理学通报 2019年第12期35卷 1775-1776页

作者：杜梦繁张光远王志玮周婷婷马鑫江南大学药学院江苏无锡214122 江南大学国家功能食品工程技术研究中心江苏无锡214122 江南大学无锡医学院江苏无锡214122

高血压是心脑血管的主要危险因素,是导致我国居民死亡的主要原因之一[1-2]。高血压的发生和发展受遗传因素和环境因素的共同影响[3],而在近年来的研究中,造成高血压的主要因素60%与代谢异常有关,约80%的高血压患者存在各种形式的代谢紊... 详细信息

高血压是心脑血管的主要危险因素,是导致我国居民死亡的主要原因之一[1-2]。高血压的发生和发展受遗传因素和环境因素的共同影响[3],而在近年来的研究中,造成高血压的主要因素60%与代谢异常有关,约80%的高血压患者存在各种形式的代谢紊乱[4]。

关键词：高血压代谢组学 UPLC-QTOF/MS L-NAME 血清差异分子

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