检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2018年第10期38卷 1864-1871页

作者：王晓丽王永山欧阳伟夏兴霞潘群兴毕振威诸玉梅江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

为建立敏感、特异、稳定的传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法,本试验以杆状病毒表达系统表达的重组IBDV-VP2结构蛋白为抗原,通过包被VP2单克隆抗体捕捉VP2结构蛋白的形式,建立鸡血清VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法... 详细信息

为建立敏感、特异、稳定的传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法,本试验以杆状病毒表达系统表达的重组IBDV-VP2结构蛋白为抗原,通过包被VP2单克隆抗体捕捉VP2结构蛋白的形式,建立鸡血清VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法（VP2-ELISA）。条件优化结果显示：单克隆抗体最适包被质量浓度为3mg/L,VP2最佳稀释度为1∶20,夹心ELISA效价1∶12.8,被捡血清的稀释度为1∶400。该方法与禽流感、鸡新城疫、鸡马立克氏病、鸡传染性喉气管炎病毒及杆状病毒阳性血清无交叉反应,对琼扩效价为1∶32的IBDV阳性血清的最低检出量为1∶12 800,ROC曲线确定的D450nm临界值为0.236,组内、组间重复性试验变异系数均小于10%。用本试验建立的VP2-ELISA方法与进口IBDV-ELISA抗体试剂盒平行检测100份背景已知的临床鸡血清样品,总符合率VP2-ELISA（97%）高于进口ELISA试剂盒（96%）。本试验为进一步研制鸡传染性法氏囊病病毒VP2结构蛋白抗体ELISA检测试剂盒奠定基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2 单克隆抗体 ELISA

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兔补体C3d基因cDNA的克隆、鉴定及原核表达

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中国兽医学报 2013年第2期33卷 201-205页

作者：魏后军王芳胡波范志宇薛家宾徐为中江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

以兔肝脏组织中提取的总RNA为模板,通过巢式RT-PCR扩增出C3dcDNA,克隆测序后将其连接至表达载体pET-32a,转化入*** BL21,用IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。SDS-PAGE分析表明,目的蛋白以包涵体形式存在并得... 详细信息

以兔肝脏组织中提取的总RNA为模板,通过巢式RT-PCR扩增出C3dcDNA,克隆测序后将其连接至表达载体pET-32a,转化入*** BL21,用IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。SDS-PAGE分析表明,目的蛋白以包涵体形式存在并得到高效表达;Western blot进一步证实,表达的蛋白为C3d。本研究为开发利用兔C3d奠定了基础。

关键词：兔C3d 巢式RTPCR 原核表达

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快速检测大肠杆菌O157的LAMP方法的建立与评价

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中国兽医学报 2013年第7期33卷 1027-1031页

作者：张雪寒何孔旺叶青倪艳秀温立斌李彬王小敏周俊明郭容利江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

利用DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以rfbE基因为靶序列,设计LAMP引物,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性试验。结果显示,整个检测过程仅需1h即可通过肉眼直接目测试验结果。在灵敏度... 详细信息

利用DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以rfbE基因为靶序列,设计LAMP引物,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性试验。结果显示,整个检测过程仅需1h即可通过肉眼直接目测试验结果。在灵敏度试验中,rfbE-LAMP对O157菌液和模拟阳性样品的最低检测限分别为1CFU/mL和1CFU/g。在特异性试验中,以其他血清型大肠杆菌以及沙门杆菌基因组DNA为模板对rfbE基因进行检测,均没有发生非特异性扩增反应。试验建立的LAMP检测方法具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求。

关键词：环介导恒温扩增技术 rfbE基因快速检测

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猪肺炎支原体量子点荧光原位杂交研究方法的建立与应用

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中国兽医学报 2012年第12期32卷 1832-1836页

作者：王占伟熊祺琰冯志新刘茂军路璐范志鹏邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

利用生物素化的猪肺炎支原体核酸探针和量子点荧光显色系统,对人工感染组、自然感染组和健康对照组的试验猪肺样品,以及临床样品进行量子点荧光原位杂交检测。结果表明:按照探针质量浓度为1 mg/L、80～90℃变性10 min、37℃杂交10 h和QD... 详细信息

利用生物素化的猪肺炎支原体核酸探针和量子点荧光显色系统,对人工感染组、自然感染组和健康对照组的试验猪肺样品,以及临床样品进行量子点荧光原位杂交检测。结果表明:按照探针质量浓度为1 mg/L、80～90℃变性10 min、37℃杂交10 h和QDs-SA复合物浓度为10 nmol/L的条件进行猪肺炎支原体的量子点荧光原位杂交检测结果比较理想;而人工感染组、自然感染组和健康对照组样品的QD-FISH检测结果与分离培养结果和PCR检测结果相比,符合率均达到100%;临床样品的QD-FISH检测结果与PCR检测结果相比,符合率为83.3%。从而证明猪肺炎支原体量子点荧光原位杂交法是一种直观和敏感的检测方法,可以用于猪肺炎支原体的检测、定位和致病机理研究,也为其他病原的研究提供了参考方法。

关键词：猪肺炎支原体量子点量子点荧光原位杂交斑点杂交检测定位

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大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染牛和小鼠排菌检测中的应用

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中国兽医科学 2012年第3期42卷 285-289页

作者：夏兴霞孟祥升王永山董晨红赵攀登张雪寒何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了检验大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果,将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式试验感染大肠杆菌O157∶H7,用大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条、细菌鉴别培养基培养计数以及PCR 3种方法检测感染... 详细信息

为了检验大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果,将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式试验感染大肠杆菌O157∶H7,用大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条、细菌鉴别培养基培养计数以及PCR 3种方法检测感染动物粪便中O157∶H7的排菌量和持续时间。牛在感染大肠杆菌O157∶H7后的第2天开始从粪便排菌,第4天达到峰值,排菌时间可持续28d;小鼠在感染O157∶H7后的第4小时开始从粪便排菌,第6小时达到峰值,排菌时间可持续15d。大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条、细菌鉴别培养基培养计数以及PCR 3种方法的检测结果一致,但试纸条更简便、快捷、直观,1～5min可得出检测结果,便于现场检测样品中O157∶H7的快速筛查。

关键词：胶体金免疫层析检测试纸条肠出血性大肠杆菌O157∶H7 牛鼠粪便

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重组猪鼻支原体P37蛋白的原核表达及免疫原性分析

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中国预防兽医学报 2013年第10期35卷 840-844页

作者：熊祺琰刘占军马庆红冯志新刘茂军白方方邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

P37是猪鼻支原体(Mhr)的主要免疫原之一,也是Mhr中目前唯一已知的与肿瘤直接相关的抗原。为原核表达Mhr P37蛋白并分析其免疫原性,本研究通过人工合成能够在***中优势表达P37蛋白的编码序列,以pET-28a(+)为载体对P37重组蛋白进行原核表... 详细信息

P37是猪鼻支原体(Mhr)的主要免疫原之一,也是Mhr中目前唯一已知的与肿瘤直接相关的抗原。为原核表达Mhr P37蛋白并分析其免疫原性,本研究通过人工合成能够在***中优势表达P37蛋白的编码序列,以pET-28a(+)为载体对P37重组蛋白进行原核表达。SDS-PAGE及western blot鉴定结果表明,表达的P37重组蛋白约为45.97 ku并能够被Mhr高免血清识别。利用纯化的重组蛋白为包被抗原初步建立间接ELISA检测方法,检测结果显示与Mhr高免血清呈强阳性反应。此外,将P37重组蛋白免疫小鼠,能够诱导高滴度特异性抗体,表明该蛋白具有良好的免疫原性。本研究结果为Mhr检测方法的建立、P37蛋白功能研究以及P37相关重组肿瘤疫苗和Mhr疫苗的研制奠定基础。

关键词：猪鼻支原体 P37蛋白原核表达免疫

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鹅黄病毒囊膜蛋白的原核表达及抗原性分析

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华北农学报 2012年第5期27卷 33-37页

作者：黄欣梅李银赵冬敏刘宇卓张敬峰韩凯凯钮慧敏江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

选取鹅黄病毒囊膜蛋白(E蛋白)基因进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于血清学诊断和可作为亚单位疫苗的重组蛋白。根据鹅黄病毒JS804株全基因序列设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出了鹅黄病毒的E基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中... 详细信息

选取鹅黄病毒囊膜蛋白(E蛋白)基因进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于血清学诊断和可作为亚单位疫苗的重组蛋白。根据鹅黄病毒JS804株全基因序列设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出了鹅黄病毒的E基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组表达质粒pET32a-E,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达。结果表明,鹅黄病毒E基因在大肠杆菌中获得高效表达,融合蛋白分子量约为70 kDa,主要以包涵体形式存在于菌体中。Western Blot和间接免疫荧光试验发现,重组E蛋白具有较好的反应原性和良好的免疫原性。鹅黄病毒E蛋白的原核表达为进一步研究该蛋白功能、建立血清学检测方法及研制亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：禽黄病毒 E蛋白原核表达抗原性

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猪CD81的克隆、序列分析及其LEL区原核表达

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中国预防兽医学报 2012年第12期34卷 993-995页

作者：李文良毛立江杰元江苏省农业科学院兽医研究所、农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为研究猪CD81基因特征及对其进行原核表达,本研究从猪PBMC的总RNA中扩增获得CD81全基因,测序后经比对分析表明,与已报道的序列同源性为99.7%～100%,与牛羊的同源性约为92%,其次为灵长类(约90%),大鼠和小鼠最低(约87%)。氨基酸序列分析其... 详细信息

为研究猪CD81基因特征及对其进行原核表达,本研究从猪PBMC的总RNA中扩增获得CD81全基因,测序后经比对分析表明,与已报道的序列同源性为99.7%～100%,与牛羊的同源性约为92%,其次为灵长类(约90%),大鼠和小鼠最低(约87%)。氨基酸序列分析其SEL和LEL区为主要变异区,尤其LEL区在不同物种间变异较大。进一步扩增其LEL区基因并以pGEX-4T-1为载体构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达重组蛋白,其主要以包涵体形式存在。Western blot结果显示,重组蛋白以GST融合蛋白形式表达。

关键词： CD81 克隆胞外大环区原核表达

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类猪圆环病毒 P1转录的 Northern Blot 分析

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华北农学报 2014年第4期29卷 160-163页

作者：温立斌王凤芝何孔旺倪艳秀张雪寒李彬王小敏郭容利周俊明俞正玉茅爱华吕立新解建平江苏省农业科学院兽医研究所、农业部兽用生物制品工程技术重点实验室、国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为鉴定类猪圆环病毒P1的转录本,采用地高辛标记的RNA探针,通过Northern Blot方法,对转染PK15细胞的类猪圆环病毒P1进行了RNA转录分析。结果表明,Northern杂交可检测到2个RNA转录本,包括正链上ORF3的RNA和负链上ORF1的RNA。同时,ORF3 RN... 详细信息

为鉴定类猪圆环病毒P1的转录本,采用地高辛标记的RNA探针,通过Northern Blot方法,对转染PK15细胞的类猪圆环病毒P1进行了RNA转录分析。结果表明,Northern杂交可检测到2个RNA转录本,包括正链上ORF3的RNA和负链上ORF1的RNA。同时,ORF3 RNA表达时间比ORF1的短,且丰度也大大低于ORF1。类猪圆环病毒P1至少存在ORF1和ORF3 2个转录本。

关键词：类猪圆环病毒P1 转录分析 Northern Blot

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类猪圆环病毒因子P1核酸链型和极性的研究

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华北农学报 2012年第3期27卷 120-122页

作者：温立斌何孔旺倪艳秀张雪寒李彬王小敏郭容利周俊明俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

研究报道类猪圆环病毒因子P1的核酸链型和极性的研究结果。采用氯化铯平衡密度梯度离心获得较为纯净的病毒粒子后,提取病毒DNA,经S1核酸酶消化、特异性单引物第一轮PCR扩增结合常规第二轮PCR扩增等研究,结果表明,类猪圆环病毒因子P1为... 详细信息

研究报道类猪圆环病毒因子P1的核酸链型和极性的研究结果。采用氯化铯平衡密度梯度离心获得较为纯净的病毒粒子后,提取病毒DNA,经S1核酸酶消化、特异性单引物第一轮PCR扩增结合常规第二轮PCR扩增等研究,结果表明,类猪圆环病毒因子P1为单股、负链基因组。

关键词：类猪圆环病毒因子P1 核酸链型极性

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