检索结果-内蒙古大学图书馆

2012第五届中国北京国际食品安全高峰论坛

作者：陆昌华胡肄农谭业平臧一天江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014

本文在阐述国内外动物及食用性动物产品安全监控与预警研究的同时。针对动物及动物产品安全涉及到多方面、多环节和多层次的问题，确定影响动物及动物产品安全的主要因素，指出动物疫病预警研究是公共卫生应急及城市预警应急系统的重要... 详细信息

本文在阐述国内外动物及食用性动物产品安全监控与预警研究的同时。针对动物及动物产品安全涉及到多方面、多环节和多层次的问题，确定影响动物及动物产品安全的主要因素，指出动物疫病预警研究是公共卫生应急及城市预警应急系统的重要组成部分。风险预警是风险分析的重要内容，风险分析是WTO等协定的构成部分，是检验检疲决策的主要技术支持，是技术性贸易措施的重要内容之一。风险分析可保持检验检疫的正当技术壁垒作用。充分发挥检验检疫的保护功能，能强化检验检疫贸易的促进作用。针对重大动物疫病严重影响中国畜禽生产的产业发展。由于动物疫病控制不及时，造成重大经济损失。同时，也影响中国畜禽(生猪、牛、禽)活体和胴体的出口。为此。本文提出如何构建动物及食用性动物产品质量安全风险预JIN警框架，形成风险评估及预警决策的模型的方法;以及采用基于GIS的数字化监控系统，将流行病学数据库、地理图形、非空间应用模型和空间应用模型有机地结合。实现图形和数据资源共享。系统可及时跟踪疾病的蔓延，通过动物疫病流行病学图形分析，可提出适宜的防治措施。达到重大动物疫病的预警预报目的。借鉴国外成功经验，提出适合国情的风险预警框架体系研究内容，并指出在进行动物卫生评估和动物产品安全性评价时，如何提高GIS系统与风险分析在预誓体系中的应用。最终为开展风险评估工作提供更多的素材，不仅能促进中国畜牧业的健康持续发展，也能满足国家制定相关政策的需求。

关键词：动物产品动物疫病疫情监测风险预警

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大肠杆菌O157:H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

大肠杆菌O157:H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：夏兴霞王永山孟祥升朱国强张雪寒何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心扬州大学兽医学院

用*** O157:H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。其中,ID3、2E7和2H7三株为O157:H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别为... 详细信息

用*** O157:H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。其中,ID3、2E7和2H7三株为O157:H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别为103、105和106。用纯化的单克隆抗体2E7标记胶体金,制备金标抗体玻璃纤维素膜;将纯化的2H7和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕捉抗体包被于硝酸纤维素膜(NC)上;组装成双抗夹心法O157:H7胶体金免疫层析检测试纸条。用该试纸条可特异检测O157:H7,敏感度为106CFU/ml,与相同单克隆抗体2H7和2E7建立的O157:H7夹心ELISA检测方法的敏感度相当,试纸条简便快速,在1～5 min内可得出检测结果,便于O157:H7的临床快速诊断与现场检测样品的快速筛查。

关键词：大肠杆菌O157:H7 单克隆抗体(mAb) 胶体金免疫层析试纸条人兽共患病

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Genetic Variation of the ORF5 Gene of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus in East China during 2008-2010

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Agricultural Science & Technology 2012年第6期13卷 1234-1239,1276页

作者：王小敏何孔旺张文文陈蔚茅爱华俞正玉温立斌倪艳秀张雪寒吕立新郭容利周俊明李彬江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

[Objective] A total of 260 swine samples of dead or sick pigs collected from 7 provinces （municipalities） Jiangsu, Anhui, Shanghai, Shandong, Zhejiang, Fujian and Jiangxi of China during 2008-2010 were detected for porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV）. And the ORF5 genes of some isolates were amplified and sequenced for understanding the molecule epidemiology and the genetic evolution of PRRSV in East China. [Method] Using RT-PCR method, PRRSV was detected by RT-PCR from samples. The complete ORF5 genes of 36 PRRSV positive samples was amplified, sequenced and analyzed with other 15 strains available on GenBank. [Result] PRRSV was detected in 118/260 of the clinical samples, with a positive rate was 45.4%. Sequence analysis showed that the 36 isolates of this study belonged to the North American-type PRRSV strains and were closely related to the highly pathogenic PRRSV （HP-PRRSV） with 94.6%-100% amino acid sequence identities. The sequence analysis combined with the phylogenetic analysis indicated that all these North American-type PRRSV strains in East China were further divided into five subgenotypes, subgenotype Ⅲ showed closer identity with HPPRRSV; almost all subgenotypes were found to be variable in the primary neutralizing epitope; subgenotypes Ⅲ and IV had more glycosylation sites than others. Although these 36 isolates were collected from different provinces in East China, there were no obvious relations between the distribution of PRRSV and the region. [Conclusion] The PRRSV infection was widespread and HP-PRRSV was the popular strain in East China during 2008-2010. However some different genetic characteristics appeared in the genomes, the genetic evolution was relatively stable. There exists a cross-cutting phenomenon on the genetic relationship of PRRSV isolates obtained from different provinces. Subgenotypes IV and V only appeared in some provinces, but the distribution of PRRSV did not show apparent geographical characteristics.

关键词： Porcine reproductive and respiratory syndrome （PRRS） East China ORF5 gene Genetic variation

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家兔支气管败血波氏杆菌重组百日咳杆菌粘附素(PRN)蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

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中国比较医学杂志 2012年第2期22卷 28-32页

作者：胡佳佳恽时锋王芳范志宇胡波江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京军区南京总医院比较医学科江苏南京210002

目的表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)PRN蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌prn基因序列(AY376325)设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PC... 详细信息

目的表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)PRN蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌prn基因序列(AY376325)设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pGEX-4T-1中,以*** BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白PRN作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数等,建立检测支气管败血波氏杆菌抗体的间接ELISA方法。结果成功克隆了prn全基因序列,并在***21(DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白PRN具有良好的抗原性。应用重组蛋白PRN为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法。试验确定重组蛋白PRN抗原的包被浓度为500ng/mL,最适血清稀释度为1∶40。结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础。

关键词：兔支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌粘附素(PRN) 原核表达间接ELISA

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传染性法氏囊病病毒VP2与C3d串联基因重组表达质粒的构建及其免疫功能分析

传染性法氏囊病病毒VP2与C3d串联基因重组表达质粒的构建及其免疫...

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：马金荣欧阳伟王永山吴晓悠朱向东张海彬范红结王忠灿唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所南京军区疾病预防控制中心

为了提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因核酸疫苗的免疫效力,本实验在前期工作基础上,设计合成鸡补体C3d基因,利用同尾酶获得C3d的3拷贝串联体3C3d,与IBDV VP2基因串联,构建VP2-3C3d串联基因的重组真核表达质粒,在BHK21细胞中表达。... 详细信息

为了提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因核酸疫苗的免疫效力,本实验在前期工作基础上,设计合成鸡补体C3d基因,利用同尾酶获得C3d的3拷贝串联体3C3d,与IBDV VP2基因串联,构建VP2-3C3d串联基因的重组真核表达质粒,在BHK21细胞中表达。并进一步对动物进行基因免

关键词：传染性法氏囊病病毒 C3d VP2 重组表达质粒串联基因免疫功能

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非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达

非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：毕振威王永山范红结王智群吴晓悠马金荣欧阳伟张海彬江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095

为分析当地非典型犬瘟热病毒(cDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性，根据已发表cDv的N基因序列设计引物，用RT-PcR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因，进行克隆和序列分析，结果表明：该非典型CDV的N基... 详细信息

为分析当地非典型犬瘟热病毒(cDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性，根据已发表cDv的N基因序列设计引物，用RT-PcR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因，进行克隆和序列分析，结果表明：该非典型CDV的N基因与已发表的12个CDV强毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在96．6％～99．2％和97．9％～99．4％之间，与已发表的4个CDV疫苗弱毒株的同源性分别在93．2％～93．6％和96．4％～97．5％之间;在N基因系统发育进化树上，非典型CDV与12个强毒株处在同一亚群，而且与9个中国分离毒株的亲缘关系近于3个国外毒株。N基因在大肠杆菌中表达的重组N蛋白的分子量为62 ku，主要以包涵体的形式存在;用western blot分析，重组N蛋白可与CDV阳性血清发生特异性反应;以纯化的重组N蛋白为抗原建立的CDV抗体间接EUSA检测方法具有良好的特异性。

关键词：非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析原核表达大肠杆菌

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浅谈中小型规模猪场场长的素质

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中国畜牧兽医文摘 2012年第5期28卷 3-页

作者：华利忠刘茂军冯志新邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

随着经济的发展,我国养猪业已逐渐向集约化和规模化发展。然而,中小型规模猪场仍是国内养猪场的主体。中小规模猪场存在猪场选址和布局不合理、猪场性质和规模不合理、投资评估偏差大、技术人才缺乏等问题。如何避免和改善,猪场场长肩... 详细信息

随着经济的发展,我国养猪业已逐渐向集约化和规模化发展。然而,中小型规模猪场仍是国内养猪场的主体。中小规模猪场存在猪场选址和布局不合理、猪场性质和规模不合理、投资评估偏差大、技术人才缺乏等问题。如何避免和改善,猪场场长肩负着使命和责任。

关键词：养猪场育肥猪母猪门卫制度

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鸭副粘病毒与H9亚型禽流感病毒双重PCR检测方法的初步建立

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东北农业大学学报 2011年第12期42卷 55-59页

作者：刘宇卓魏雪涛李银张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所南京210014 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

通过对GenBank发表的鸭副粘病毒(DPV)和鸭H9亚型禽流感病毒(AIV,H9)基因序列分析,针对保守区分别设计并合成2对特异性引物。通过对扩增条件的优化,建立了检测两种病毒的快速双重PCR方法。结果表明,该检测方法可同时扩增出DPV(363 bp)和H... 详细信息

通过对GenBank发表的鸭副粘病毒(DPV)和鸭H9亚型禽流感病毒(AIV,H9)基因序列分析,针对保守区分别设计并合成2对特异性引物。通过对扩增条件的优化,建立了检测两种病毒的快速双重PCR方法。结果表明,该检测方法可同时扩增出DPV(363 bp)和H9亚型AIV(732 bp)的特异性片段,而对照DHV、IBV、IBDV及SPF鸡胚尿囊液均未见条带。该方法具敏感性,对鸡胚感染尿囊液中两种病原核酸的检出率均为2 ng.μL。对保存不同时间的两种病毒及临床可疑病料均可检测到阳性条带。试验证明该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,可以用于临床样品的早期快速检测和鉴别诊断。

关键词：鸭副粘病毒 H9亚型禽流感双重RT—PCR 检测

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猪IL-1β与IL-18 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

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江苏农业学报 2011年第6期27卷 1289-1294页

作者：汪伟倪艳秀温立斌吕立新周俊明俞正玉茅爱华张雪寒李彬郭容利王小敏范红结何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用。为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-ac... 详细信息

IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用。为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-actin核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PCR从3D4猪肺泡巨噬细胞系中克隆和扩增了上述3个因子核苷酸片段,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性模板,建立了检测IL-1β、IL-18及β-actin SYBR GREEⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.990以上;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;敏感性高,初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝;重复性好,组内变异系数均小于4%。

关键词：猪促炎症细胞因子 IL-1β IL-18 荧光定量PCR

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肠出血性大肠杆菌O157:H7△hly△stx△toxB基因缺失株的构建

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华北农学报 2011年第5期26卷 76-82页

作者：张雪寒何孔旺赵攀登栾晓婷叶青温立斌倪艳秀周俊明李彬王小敏郭容利俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB)基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力。经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被壮观霉素(Spc+)、庆大霉素(Gm+)和卡那霉素(Kan+)基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,O157:H7(△hly△stx△toxB)检测不到相应的Stx、Hly和ToxB蛋白。O157:H7(△hly△stx△toxB)生长特性与亲本株无明显差异。对于HEp-2细胞的粘附能力明显降低。Balb/c小鼠排菌时间和排菌量明显减少和降低。本研究成功获得O157:H7(△hly△stx△toxB),并且明确Stx、Hly和ToxB的缺失导致了O157:H7对HEp-2细胞和Balb/c小鼠的粘附和定植能力降低。本研究旨在为研制EHEC O157:H7基因缺失疫苗奠定物质基础。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 hly stx toxB 缺失株小鼠粘附

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