检索结果-内蒙古大学图书馆

2009～2010年华东地区猪圆环病毒2型的基因型分析

江苏农业学报 2011年第5期27卷 1037-1042页

作者：王小敏张文文何孔旺茅爱华俞正玉温立斌倪艳秀张雪寒郭容利吕立新李彬周俊明江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为分析2009～2010年中国华东地区猪圆环病毒2型(PCV2)的基因型分布情况,应用可以区分PCV2a和PCV2b的鉴别PCR,对浙江、江苏、安徽、山东、上海、江西等6省市的210份血液和组织样品进行PCV2检测,并选取10份阳性病料进行全长基因组扩增,应... 详细信息

为分析2009～2010年中国华东地区猪圆环病毒2型(PCV2)的基因型分布情况,应用可以区分PCV2a和PCV2b的鉴别PCR,对浙江、江苏、安徽、山东、上海、江西等6省市的210份血液和组织样品进行PCV2检测,并选取10份阳性病料进行全长基因组扩增,应用DNAStar软件对获得的10株PCV全长基因和GenBank中的参考毒株进行序列分析和系统进化树分析。结果表明210份病料中107份为PCV2阳性,36份为PCV2a基因型,97份为PCV2b基因型,检出率分别为17.1%和46.2%,两个基因型的共感染率为12.4%。10株分离株的序列分析结果表明,华东地区PCV2流行毒株之间的核苷酸同源性为96.3%～99.9%,与GenBank其他PCV2参考毒株的同源性为95.0%～99.9%。系统进化树分析表明中国华东地区PCV2存在3种基因型:PCV2a、PCV2b和PCV2c。

关键词：猪圆环病毒2型(PCV2) 序列分析基因型华东地区

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猪肺炎支原体P36基因在毕赤酵母中的表达

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江苏农业学报 2011年第2期27卷 307-312页

作者：祝永琴刘茂军冯志新魏建超曹瑞兵周斌陈溥言邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

根据GenBank中猪肺炎支原体P36基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白基因P36,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P36。PICZα-A-P36经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌... 详细信息

根据GenBank中猪肺炎支原体P36基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白基因P36,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P36。PICZα-A-P36经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌P36蛋白于发酵上清液中,通过SDS-PAGE电泳以及Western-blotting进行鉴定,结果表明,P36蛋白基因获得了分泌性表达,而且具有良好的反应原性,这为猪肺炎支原体免疫检测试剂盒和基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪肺炎支原体 P36基因毕赤酵母分泌表达

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类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响

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华北农学报 2011年第3期26卷 32-36页

作者：温立斌何孔旺杨汉春刘梦雅江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学动物医学院北京100094 香港中文大学中国香港

采用实时定量PCR技术对类猪圆环病毒因子P1感染猪不同时相猪肺泡巨噬细胞中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DR、SLA-DM和CD74及共刺激分子CD40、CD80和CD86 mRNA的表达进行了检测。结果表明,病毒感染后3 d,上述分子的mRNA表达皆低于对... 详细信息

采用实时定量PCR技术对类猪圆环病毒因子P1感染猪不同时相猪肺泡巨噬细胞中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DR、SLA-DM和CD74及共刺激分子CD40、CD80和CD86 mRNA的表达进行了检测。结果表明,病毒感染后3 d,上述分子的mRNA表达皆低于对照组相应分子的mRNA表达。其中,CD80 mRNA的表达呈下调趋势(P<0.1),CD40、CD74和SLA-DR的mRNA的表达显著下调(P<0.05);感染后8 d的SLA-DR和SLA-DM以及感染后17 d SLA-DM的mRNA的表达有下调趋势(P<0.1);感染后24 d的CD86 mRNA的表达呈上调趋势(P<0.1);感染后40 d的CD74 mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结果揭示,类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能有显著影响,导致其外源性抗原递呈功能下降及紊乱,进而使机体的体液免疫应答功能受到影响。

关键词：类猪圆环病毒因子肺泡巨噬细胞抗原加工和递呈相关分子共刺激分子实时定量PCR

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兔支气管败血波氏杆菌OMP-ELISA抗体检测方法的建立

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江苏农业学报 2011年第3期27卷 566-570页

作者：范志宇王欣王芳熊富强胡波徐鹏魏后军徐为中江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 苏州药明康德新药开发有限公司江苏苏州215000

为简便快速检测支气管败血波氏杆菌(Bb),建立了一种特异、敏感的间接ELISA方法。通过应用超声波裂解和超速离心法提取了支气管败血波氏杆菌Ⅰ相菌外膜蛋白(OMPs),并用该蛋白包被酶标板,经特异性、敏感性和重复性试验优化后建立间接ELIS... 详细信息

为简便快速检测支气管败血波氏杆菌(Bb),建立了一种特异、敏感的间接ELISA方法。通过应用超声波裂解和超速离心法提取了支气管败血波氏杆菌Ⅰ相菌外膜蛋白(OMPs),并用该蛋白包被酶标板,经特异性、敏感性和重复性试验优化后建立间接ELISA方法。结果表明,试验确定抗原的包被浓度为14.44μg/ml,可检测血清最高稀释度达1∶400;该方法有很高的特异性和敏感性,与微量凝集试验相比,敏感性提高约33倍;该方法重复性良好。

关键词：支气管败血波氏杆菌外膜蛋白(OMPs) 抗体间接ELISA

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猪肺炎支原体DnaK基因的表达及ELISA方法建立

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金陵科技学院学报 2011年第4期27卷 79-84页

作者：刘茂军丁志勇刘冬霞杜海霞缪芬芳甘源孔猛冯志新熊祺琰白方方杜改梅邵国青江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 金陵科技学院动物科学与技术学院江苏南京210038

猪肺炎支原体(Mhp)是猪气喘病的主要病原体。利用Mhp NJ株的DnaK基因通过SOE-PC(splicing withoverlap extension PCR)R扩增和突变,获得了目的片段并插入表达载体pET-28a(+)中,然后转入宿主菌BL21(DE3)。重组质粒经1 mmol/L IPTG在37... 详细信息

猪肺炎支原体(Mhp)是猪气喘病的主要病原体。利用Mhp NJ株的DnaK基因通过SOE-PC(splicing withoverlap extension PCR)R扩增和突变,获得了目的片段并插入表达载体pET-28a(+)中,然后转入宿主菌BL21(DE3)。重组质粒经1 mmol/L IPTG在37°C温度下诱导5 h,目的蛋白可达到总蛋白的14.1%。Western Blotting证明表达的重组蛋白具有猪肺炎支原体反应原性,用该重组蛋白建立的ELISA方法可检测到猪肺炎支原体抗体。此为该病基因工程疫苗抗原的筛选和ELISA诊断试剂盒的研制奠定基础。

关键词：猪肺炎支原体 DnaK 重组蛋白活性鉴定

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性

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江苏农业学报 2011年第6期27卷 1300-1304页

作者：赵攀登张雪寒何孔旺姜平卢维彩栾晓婷叶青温立斌倪艳秀李彬王小敏郭容利周俊明吕立新俞正玉茅爱华江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157∶H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液。... 详细信息

为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157∶H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液。共免疫2次,间隔14 d,末次免疫后14 d攻毒1只小鼠EHEC O157∶H7 1010CFU。每次免疫后的14 d通过断尾采血,用间接ELISA法检测血清抗体。攻毒后,观察小鼠精神状态,记录死亡数并检测排菌量。ELISA检测结果表明,Tir-Tccp蛋白质诱导小鼠产生IgG抗体水平明显升高,而Intimin诱导产生的IgG抗体升高不明显。攻毒后,各免疫组小鼠均死亡1只,存活14只,存活率为93.3%;对照组小鼠死亡4只,存活6只,存活率为60.0%。免疫组在攻毒后6 d,粪便中检测不到EHEC O157∶H7,对照组在攻毒后13 d仍有较高的排菌量。表明Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠起到了有效的免疫保护作用,能够减少EHEC O157∶H7在小鼠体内的定殖。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Intimin蛋白质 Tir-Tccp蛋白质免疫原性小鼠

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1株鸭病毒性肝炎病毒的分离与鉴定

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江苏农业科学 2011年第6期39卷 374-376页

作者：钮慧敏李银黄欣梅刘宇卓张敬峰李彤彤刘飞李祥瑞江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

从南京江浦某鸭场发病死亡的8日龄雏鸭肝脏中分离到1株病毒,该病毒耐氯仿,无血凝性,RT-PCR鉴定及序列分析结果表明,该分离病毒为Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒。该毒株的病毒含量为107ELD50/0.1 mL,病毒回归鸭出现与临床发病鸭相同的症状,从攻... 详细信息

从南京江浦某鸭场发病死亡的8日龄雏鸭肝脏中分离到1株病毒,该病毒耐氯仿,无血凝性,RT-PCR鉴定及序列分析结果表明,该分离病毒为Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒。该毒株的病毒含量为107ELD50/0.1 mL,病毒回归鸭出现与临床发病鸭相同的症状,从攻毒死亡鸭体内分离到Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒。

关键词：鸭病毒性肝炎病毒分离鉴定序列分析病毒回归试验

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H9N2亚型禽流感病毒的纯化及间接ELISA方法的建立

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江苏农业科学 2011年第4期39卷 264-266页

作者：牛囡囡李银刘宇卓刘飞叶焕春李祥瑞江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

将H9N2亚型禽流感病毒FT株病毒液经过红细胞吸附释放法纯化后作为ELISA包被抗原,建立H9N2亚型禽流感抗体间接ELISA方法。试验结果表明,该方法具有敏感性高、特异性好的优点,为快速检测禽流感抗体提供了便利途径。

关键词： H9N2亚型禽流感间接ELISA 抗体红细胞吸附释放法

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反向疫苗学在猪病疫苗研究中的应用

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畜牧与兽医 2011年第11期43卷 96-99页

作者：缪芬芳白方方王海燕刘茂军熊祺琰冯志新邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

反向疫苗学是通过对病原基因组测序和计算机预测,筛选出可能编码疫苗抗原的基因,通过高通量克隆、表达纯化技术及免疫原性的检测,制备具有保护力的疫苗,为传统方法无法制备疫苗的病原微生物提供了一种新的研究思路与方法。本文介绍了反... 详细信息

反向疫苗学是通过对病原基因组测序和计算机预测,筛选出可能编码疫苗抗原的基因,通过高通量克隆、表达纯化技术及免疫原性的检测,制备具有保护力的疫苗,为传统方法无法制备疫苗的病原微生物提供了一种新的研究思路与方法。本文介绍了反向疫苗学的基本流程,并对近几年反向疫苗学在猪病病原微生物方面的研究进展进行了综述。

关键词：反向疫苗学基因组病原微生物猪病疫苗

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类圆环病毒因子P1感染对猪外周血单核细胞中细胞因子mRNA转录的影响

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江苏农业学报 2011年第5期27卷 1157-1159页

作者：温立斌何孔旺杨汉春郭容利俞正玉茅爱华倪艳秀张雪寒周俊明吕立新李彬王小敏江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）属于圆环病毒科,无囊膜,基因组为单股环状DNA。PCV是迄今发现的一种最小的动物病毒,也是一种重要的病原微生物。根据致病性、抗原性及核苷酸序列的差异,PCV被划分成了无致病性的PCV1和有致病性的P... 详细信息

猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）属于圆环病毒科,无囊膜,基因组为单股环状DNA。PCV是迄今发现的一种最小的动物病毒,也是一种重要的病原微生物。根据致病性、抗原性及核苷酸序列的差异,PCV被划分成了无致病性的PCV1和有致病性的PCV2两个基因型[1-2]。猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）于1991年首发于加拿大,随后世界其他地方陆续报道。

关键词：类圆环病毒因子外周血单个核细胞细胞因子

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