检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业学报 2013年第2期29卷 335-340页

作者：倪艳秀何孔旺周俊明汪伟吕立新俞正玉茅爱华温立斌张雪寒李彬胡屹屹郭容利王小敏陆承平江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

根据猪链球菌2型溶血素(SLY)的基因序列设计引物,以江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增除信号肽序列外的溶血素成熟蛋白基因,并克隆到表达载体pET-32α(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经1 mmol/L IPTG诱导,在37℃下4 h时表达产物... 详细信息

根据猪链球菌2型溶血素(SLY)的基因序列设计引物,以江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增除信号肽序列外的溶血素成熟蛋白基因,并克隆到表达载体pET-32α(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经1 mmol/L IPTG诱导,在37℃下4 h时表达产物(分子量约为7.2×104)达到高峰,表达量约占菌体总蛋白质的20%,表达产物在上清和包涵体中各占一半。将上清经镍柱亲和层析纯化,纯化蛋白质经Western blotting鉴定呈阳性,对绵羊红细胞、鸡红细胞的溶血效价分别为1.707×105HU/mg、4.267×104HU/mg,并可引起HEp-2和Vero细胞的颗粒增多、圆缩和脱落。纯化蛋白质对BALB/c小鼠的免疫保护率为83.3%(5/6)。这为进一步研究SLY致病机理和研制猪链球菌新型疫苗奠定了基础。

关键词：猪链球菌2型溶血素成熟蛋白原核表达生物学特性免疫保护性

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嵌合卵清蛋白-兔出血症VP60蛋白病毒样颗粒在杆状病毒表达系统中的表达及其鉴定

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江苏农业学报 2013年第2期29卷 352-358页

作者：谭晖胡波陈萌萌范志宇魏后军宋艳华王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

利用卵清蛋白(OVA)第257～264位氨基酸替换兔出血症病毒的主要结构蛋白质VP60不同位置处相应数量的氨基酸,研究了氨基酸的替换对VP60蛋白表达及病毒样颗粒装配的影响。通过重叠延伸剪接术(SOE)法,OVA T-细胞表位(257～264位氨基酸)分别... 详细信息

利用卵清蛋白(OVA)第257～264位氨基酸替换兔出血症病毒的主要结构蛋白质VP60不同位置处相应数量的氨基酸,研究了氨基酸的替换对VP60蛋白表达及病毒样颗粒装配的影响。通过重叠延伸剪接术(SOE)法,OVA T-细胞表位(257～264位氨基酸)分别取代VP60 3个区域(502～510位氨基酸、411～417位氨基酸、302～309位氨基酸),得到3种重组嵌合VP60基因。利用杆状病毒表达系统,得到3种重组穿梭载体Bacmid,分别命名为Bacmid-V-1、Bacmid-V-2、Bacmid-V-3。将重组阳性质粒转染Sf9昆虫细胞,得到3种重组病毒rBac-v-1、rBac-v-2、rBac-v-3,3组重组病毒感染Sf9细胞后表达的3种蛋白质分别命名为Z1、Z2和Z3。经RT-PCR、IFA、SDS-PAGE、Western blot等方法鉴定后,利用电镜观察此3种重组蛋白质病毒样颗粒的形成情况。3种重组嵌合VP60蛋白在Sf9昆虫细胞中得到表达,3种重组嵌合蛋白质均可以形成与VP60蛋白类似的病毒样颗粒。

关键词：兔出血症病毒(RHDV) VP60蛋白卵清蛋白 sf9细胞病毒样颗粒(VLPs)

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Le和Tr序列对新城疫ClassⅠ毒株复制及转录水平的影响

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中国兽医科学 2013年第7期43卷 678-683页

作者：于洋何孔旺封振仇旭升孙英杰丁铲江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 中国农业科学院上海兽医研究所国家家禽工程技术研究中心上海200241 江苏出入境检验检疫局动植食中心江苏南京210001

为了研究新城疫病毒(NDV)前导序列(Leader,Le)和尾随序列(Trailer,Tr)对病毒转录及复制水平的影响,以9a5b病毒微型基因组为平台,通过对Le和Tr序列的二级结构预测,进行了一系列的缺失、突变、替换,成功构建了6株突变型微型基因组。通过... 详细信息

为了研究新城疫病毒(NDV)前导序列(Leader,Le)和尾随序列(Trailer,Tr)对病毒转录及复制水平的影响,以9a5b病毒微型基因组为平台,通过对Le和Tr序列的二级结构预测,进行了一系列的缺失、突变、替换,成功构建了6株突变型微型基因组。通过共转染、实时荧光定量RT-PCR试验表明,当Le末端9～28nt替换为Tr末端9～28nt时,并不影响病毒基因的转录复制效率,当直接缺失Le的第2个干环结构或缺失Le 25位以后序列时,显著降低了病毒基因的转录复制效率;但当缺失Tr内部42nt或26位以后的全部序列时,病毒基因的转录复制发生了终止。证明Tr序列的保守性相对于Le序列而言,在NDV复制和转录过程中发挥了更为重要的作用。

关键词：微型基因组前导序列尾随序列

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生物安全隔离区建设管理探讨

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中国兽医杂志 2013年第2期49卷 91-93页

作者：谭业平胡肄农黄小国臧一天陆昌华江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 常州市康乐农牧有限公司江苏常州213149

动物疫病区划管理是动物疫病管理的有效手段，适用于一定区域内重大动物疫病控制或净化，确保动物卫生和畜禽产品质量安全，达到进口国或地区可接受的风险水平，促进动物及动物产品国际贸易。欧美等畜牧业发达国家在动物疫病区划管理的... 详细信息

动物疫病区划管理是动物疫病管理的有效手段，适用于一定区域内重大动物疫病控制或净化，确保动物卫生和畜禽产品质量安全，达到进口国或地区可接受的风险水平，促进动物及动物产品国际贸易。欧美等畜牧业发达国家在动物疫病区划管理的探索中认识到在整个国家或区域水平建立和维持无规定动物疫病状态较为困难，而采取严格的监测和生物安全管理措施更利于使区域内特定卫生状况的动物亚群体与外界进行流行病学隔离。

关键词：生物安全管理建设管理安全隔离区动物疫病控制产品质量安全风险水平动物卫生国际贸易

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中草药饲料添加剂对生长猪免疫功能的影响

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畜牧与兽医 2013年第8期45卷 19-22页

作者：杜改梅晏文梅蒋加进胡志华罗碧平戴鼎震刘茂军金陵科技学院动物科学与技术学院江苏南京210038 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

本试验旨在研究中草药饲料添加剂对生长猪免疫功能的影响。将16头60日龄的健康小梅山猪随机分为对照组和试验组,每组8头。对照组饲喂正常基础日粮,试验组饲喂含有中草药饲料添加剂的基础日粮。分别于试验开始后14、35、56和78天采集血样... 详细信息

本试验旨在研究中草药饲料添加剂对生长猪免疫功能的影响。将16头60日龄的健康小梅山猪随机分为对照组和试验组,每组8头。对照组饲喂正常基础日粮,试验组饲喂含有中草药饲料添加剂的基础日粮。分别于试验开始后14、35、56和78天采集血样,检测血清中白蛋白、总蛋白、免疫球蛋白IgM、IgG、补体C3浓度和猪瘟抗体水平。称量并测定免疫器官指数,并进行组织病理学检查。试验结果显示,饲料中添加中草药饲料添加剂可显著提高第35天血清总蛋白浓度(P<0.05)和第78天血清白蛋白浓度(P<0.05)。在试验后第35和56天时,试验组生长猪血清中免疫球蛋白IgG含量显著升高(P<0.05),但对血清中IgM含量无显著影响。第35天时血清中补体C3的含量显著提高(P<0.05)。在第14、35和56天中草药饲料添加剂明显提高了生长猪瘟抗体水平(P<0.05)。试验组生长猪猪脾脏指数与对照组相比增加了33.3%(P<0.05)。剖解和病理组织学检查无明显不良影响。试验结果表明,该中草药饲料添加剂的应用可以提高生长猪的免疫功能。

关键词：中草药饲料添加剂生长猪免疫功能

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免疫鸭体内副黏病毒的分离及其F基因的分子特征

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中国兽医学报 2013年第4期33卷 493-499页

作者：杨建朋毕振威欧阳伟王永山刁有祥山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为分析当地鸭副黏病毒流行状况及其融合蛋白(F)基因的序列特征,从江苏省某新城疫疫苗免疫过的鸭群中分离到1株病毒,经血清学试验和中和试验鉴定为鸭副黏病毒,命名为JS0920株。生物学特性分析,9日龄SPF鸡胚的半数致死量(ELD50)为10-5.3;... 详细信息

为分析当地鸭副黏病毒流行状况及其融合蛋白(F)基因的序列特征,从江苏省某新城疫疫苗免疫过的鸭群中分离到1株病毒,经血清学试验和中和试验鉴定为鸭副黏病毒,命名为JS0920株。生物学特性分析,9日龄SPF鸡胚的半数致死量(ELD50)为10-5.3;9日龄SPF鸡胚的最小致死量平均死亡时间(MDT)为47.7h,1日龄SPF鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.875,6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)测定为2.7。用该病毒的培养物(鸡胚尿囊液)经肌肉注射攻毒,鸭的发病率为70%,死亡率为40%;鸡的发病率和死亡率均为100%。用RT-PCR方法扩增该分离毒株的F基因,序列分析表明,JS0920株与标准强毒株F48E9的核苷酸序列和氨基酸序列同源性最高,分别为99.2%和99.5%,与免疫预防用的LaSota株的同源性分别为89.0%和92.2%;其多肽裂解位点为112R-R-Q-R-R-F117,具有高致病性鸭副黏病毒毒株的分子特征;系统发育进化树分析,JS0920株与LaSota株的基因型不同,JS0920株为基因IX型,与F48E9株的亲缘关系最近。试验结果对认识当前DPMV的流行和变异现状以及疫苗研制具有重要的参考价值。

关键词：鸭副黏病毒 F基因基因IX型分子特征

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江苏部分地区羊群边界病流行情况调查

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中国兽医学报 2013年第12期33卷 1808-1812页

作者：李文良毛立赵永前孙银华王清益丁永龙杨建泉王秋生缪忠明江杰元江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 海安县畜牧兽医站江苏海安226600 如东县畜牧兽医站江苏如东226400

本实验室从安徽某羊场发生腹泻的山羊病料中检测分离到边界病病毒（borderdiseasevirus，BDV），证明BDV在我国羊群中存在。为了进一步了解BDV在江苏羊群的流行情况，本研究收集江苏部分地区发生腹泻和健康羊群的血清和组织样品，采用RT... 详细信息

本实验室从安徽某羊场发生腹泻的山羊病料中检测分离到边界病病毒（borderdiseasevirus，BDV），证明BDV在我国羊群中存在。为了进一步了解BDV在江苏羊群的流行情况，本研究收集江苏部分地区发生腹泻和健康羊群的血清和组织样品，采用RT—PCR方法进行检测，并对阳性样品进行病毒的分离鉴定，测定分离毒株5’-UTR基因片段，与其他已报道的毒株进行同源性比较并绘制进化树。结果表明有27．4％（29／106）样品呈阳性，不N羊场BDV阳性率为0～67％，共分离到4株不同的BDV毒株，它们之间的同源性为73．9％～95．6％，而与其他BDV毒株的同源性为66．2％～91．6％。进化分析表明AH12-02与其他各毒株均较远，形成单独的分支，另3个毒株与BDV3型毒株关系最近。采用ELISA试剂盒对血清样品BDV抗体进行检测发现不同羊场抗体阳性率存在较大差异（0～100%），还有抗体阴性持续感染个体的存在。以上结果丰富了我国BDV分子流行病学数据，为进一步探索BDV在我国羊群中的流行情况奠定了基础。

关键词：边界病病毒山羊流行病学 RT- PCR 抗体

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白头翁汤对内毒素诱导血管内皮细胞基因表达谱的影响

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畜牧兽医学报 2013年第10期44卷 1675-1684页

作者：胡屹屹穆祥胡元亮江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 北京农学院兽医学中医药北京市重点实验室北京102206 南京农业大学动物医学院南京210095

拟探讨中药白头翁汤方剂(PD)对细菌内毒素(LPS)损伤的治疗作用。将内皮细胞培养至单层融合状态,加入LPS和白头翁汤作用12h后,提取3个处理组的总RNA。采用Affymetrix Rat Genome 230 2.0Array芯片检测,读取各组基因表达的变化情况并进行... 详细信息

拟探讨中药白头翁汤方剂(PD)对细菌内毒素(LPS)损伤的治疗作用。将内皮细胞培养至单层融合状态,加入LPS和白头翁汤作用12h后,提取3个处理组的总RNA。采用Affymetrix Rat Genome 230 2.0Array芯片检测,读取各组基因表达的变化情况并进行生物学分析。选取5个与炎症反应相关的差异表达基因,采用嵌合荧光法进行Real-time RT-PCR反应。结果显示:与空白组相比,LPS组产生69个差异表达基因,其中上调基因36个,下调基因33个;与LPS组相比,LPS-PD组产生578个差异表达基因,其中上调基因566个,下调基因12个;与空白组相比,LPS-PD组产生122个差异表达基因,其中上调基因93个,下调基因29个。5个目标基因Il1α、Il6、Edn1、Tnfsf11和Ptges的Real-time RT-PCR检测结果依次为9.78、1.76、1.43、2.98和2.12,对应的基因芯片检测结果分别是10.57、1.53、1.59、3.16和1.71,两者变化趋势相符。白头翁汤抗内毒素的药理机制可能在于减少炎症因子的蛋白表达,抑制凋亡基因的启动,阻碍内毒素信号传导与受体激活,增加机体能量代谢和蛋白质合成。

关键词：白头翁汤内毒素基因芯片炎症

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2011—2012年我国部分地区猪流行性腹泻病毒ORF3基因的遗传变异分析

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畜牧与兽医 2013年第5期45卷 1-4页

作者：郭容利何孔旺茅爱华刘浩飞俞正玉倪艳秀温立斌李彬王小敏张雪寒吕立新周俊明江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

应用RT-PCR方法对江苏、安徽、山东、江西、河北、上海、北京等省市的146份腹泻仔猪的小肠组织和粪便样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测。结果:146份腹泻病料中共检出82份PEDV阳性样品,阳性率为56.2%;对其中14份阳性病料的ORF3基因进... 详细信息

应用RT-PCR方法对江苏、安徽、山东、江西、河北、上海、北京等省市的146份腹泻仔猪的小肠组织和粪便样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测。结果:146份腹泻病料中共检出82份PEDV阳性样品,阳性率为56.2%;对其中14份阳性病料的ORF3基因进行测序,将所测序列与GenBank中PEDV参考毒株的ORF3序列进行分析比较,并绘制了系统进化树。所测14个PEDV ORF3序列与GenBank中的38个参考毒株ORF3核苷酸序列同源性为93%～100%;ORF3基因系统进化树分析表明PEDV分为3组,13个病毒属于PEDV 3组,另外1个属于PEDV 1组。ORF3遗传变异分析表明:中国最近流行的PEDV野毒株与韩国野毒株关系密切,但与欧洲株以及中国目前使用的疫苗株基因差异较大。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) ORF3基因遗传变异

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类猪圆环病毒因子P1在自然感染仔猪体内的组织分布

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中国兽医学报 2013年第1期33卷 1-3页

作者：温立斌何孔旺俞正玉茅爱华高晓静倪艳秀张雪寒郭容利李彬王小敏周俊明吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

选用3头自然感染仔猪和1头阴性对照猪,剖杀后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、脑、空肠、扁桃体、胸腺、淋巴结、膀胱、性腺等组织,用荧光定量PCR方法检测病毒在组织中的分布及病毒载量。结果显示,类猪圆环病毒因子P1分布在仔... 详细信息

选用3头自然感染仔猪和1头阴性对照猪,剖杀后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、脑、空肠、扁桃体、胸腺、淋巴结、膀胱、性腺等组织,用荧光定量PCR方法检测病毒在组织中的分布及病毒载量。结果显示,类猪圆环病毒因子P1分布在仔猪的心脏、肝脏、肺脏、胰脏、脑和膀胱等组织,病毒载量以胰脏、脑和膀胱为最高,可达105拷贝/g以上;对照猪脏器中没有检测到病毒核酸。该研究为P1的诊断及致病机制奠定了基础。

关键词：类猪圆环病毒因子P1 组织分布病毒载量

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