检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第1期31卷 51-55页

作者：张改平刘庆堂邓瑞广杨苏珍李学伍赵东邢广旭河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002

应用磺胺二甲基嘧啶(SM2)单克隆抗体(mAb)成功研制出SM2残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SM2-Kit)。研究结果表明,SM2-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9911,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.625μg/L～80μg/L,灵敏度为0.9... 详细信息

应用磺胺二甲基嘧啶(SM2)单克隆抗体(mAb)成功研制出SM2残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SM2-Kit)。研究结果表明,SM2-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9911,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.625μg/L～80μg/L,灵敏度为0.9μg/L,半数抑制浓度(IC50)为5.82μg/L,检测限为1μg/L;饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为83.4%、89.5%,平均批内和批间变异系数均低于15%;SM2-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率(CR%)为2.08%,与其它磺胺类药几乎没有反应性;基质对SM2-Kit的检测结果影响不大;试剂盒在4℃可保存6个月。

关键词：磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体阻断ELISA 快速检测试剂盒

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马立克病病毒与禽网状内皮增生病病毒的混合感染及在传代过程中的重组

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畜牧兽医学报 2016年第1期47卷 128-134页

作者：宿靖伟滕蔓罗俊迟佳琦余祖华禹乐乐胡博张改平河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室郑州450002 河南农业大学牧医工程学院郑州450002 河南科技大学动物科技学院动物疫病与公共安全重点实验室洛阳471003

旨在了解国内鸡群马立克病病毒(MDV)和禽网状内皮增生病病毒(REV)的混合感染及自然重组状况,探讨两种病原的基因重组对MDV病原学特性的潜在影响及危害。利用PCR扩增、序列测定及间接免疫荧光试验(IFA),对来自河南商品蛋鸡群的17个MDV分... 详细信息

旨在了解国内鸡群马立克病病毒(MDV)和禽网状内皮增生病病毒(REV)的混合感染及自然重组状况,探讨两种病原的基因重组对MDV病原学特性的潜在影响及危害。利用PCR扩增、序列测定及间接免疫荧光试验(IFA),对来自河南商品蛋鸡群的17个MDV分离株进行研究。结果表明,其中两个毒株HNGS206和HNXZ103的病毒基因组中存在REV—LTR的重组插入。进一步的IFA结果显示,HNGS206和HNXZ103并非MDV与REV的自然重组流行毒株,这两个毒株基因组中LTR的插入发生于临床病例鸡混合感染后的病毒分离及传代培养过程中。结果提示,虽然目前国内鸡群中MDV和REV的混合感染较为普遍,但MDV与REV自然重组毒株的流行状况仍需要进一步的流行病学监测。

关键词：马立克病病毒禽网状内皮增生病病毒流行病学混合感染病毒传代基因重组

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河南鸡群马立克氏病病毒流行毒株的分子进化分析

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华北农学报 2015年第1期30卷 130-136页

作者：宿靖伟罗俊王新卫迟佳琦禹乐乐党露赵朴滕蔓张改平河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室、河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002

为了解鸡马立克氏病病毒流行毒株的分子特征，对2012－2014年河南省发病鸡群的临床病料进行了采集，并对MDV 132 bp重复序列进行了PCR扩增，同时对meq、gE、gI基因进行了克隆和序列测定。结果表明，9份病料中均可扩增出与132 bp双拷贝... 详细信息

为了解鸡马立克氏病病毒流行毒株的分子特征，对2012－2014年河南省发病鸡群的临床病料进行了采集，并对MDV 132 bp重复序列进行了PCR扩增，同时对meq、gE、gI基因进行了克隆和序列测定。结果表明，9份病料中均可扩增出与132 bp双拷贝大小相符的PCR主产物；meq、gE、gI基因的核苷酸序列同源性与国内外参考毒株相比，分别为98．5％～100％，98．8％～100％和98．0％～100％；基于这些基因构建的系统发生树的分析结果表明，与美国、澳大利亚、日本以及印度的MDV分离株相比，目前，河南省鸡群中流行的MDV与此前分离的河南流行株进化关系较近，并且与其他国内分离株共同形成一个较大的独立进化分支。

关键词：鸡马立克氏病病毒基因克隆 meq gE gI 进化分析

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鸡源细胞基因沉默及快速筛选的实用型双标记RNAi载体

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中国生物工程杂志 2011年第11期31卷 81-89页

作者：李培培游雷鸣罗俊鄂魏蒋志政郅玉宝张改平王爱萍农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室河南省农业科学院郑州450002 郑州大学生物工程系郑州450001

利用人H1 RNA启动子、EGFP基因及Neomycin抗性基因,构建用于禽类细胞基因持续沉默和快速筛选的实用型RNAi载体。在将pCDNA3.1(+)载体上的SV40启动子替换为鸡源的β-actin启动子后,装入EGFP基因表达框以及用于驱动外源shRNA转录的人H1 RN... 详细信息

利用人H1 RNA启动子、EGFP基因及Neomycin抗性基因,构建用于禽类细胞基因持续沉默和快速筛选的实用型RNAi载体。在将pCDNA3.1(+)载体上的SV40启动子替换为鸡源的β-actin启动子后,装入EGFP基因表达框以及用于驱动外源shRNA转录的人H1 RNA启动子,构建成同时具有EGFP和Neomycin抗性双标记的RNAi载体,并为载体引入独特设计的含媒介序列的多克隆位点以方便外源shRNA编码小片断插入后的快速筛选,载体设计非常实用。插入靶向EGFP和sIgMλ基因的shRNA编码序列后分别瞬时转染DF-1和DT40细胞,结果显示靶基因表达得到了明显抑制。联用EGFP和Neomycin双标记快速筛选sIgMλ轻链基因稳定沉默的DT40细胞克隆的结果也证实,H1启动子转录shRNA的干扰效果是高效的,双标记筛选策略不仅有效而且方便、快捷。

关键词： EGFP H1启动子 RNAi载体双标记筛选

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传染性法氏囊病病毒VP2蛋白B细胞抗原表位免疫小鼠试验

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华北农学报 2010年第2期25卷 233-235页

作者：肖治军张改平杨汉春杨艳艳赵东李学伍邓瑞广柴书军邢广旭杨继飞河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 中国农业大学动物医学院北京100094

为检测Ⅰ型IBDVVP2蛋白线性B细胞抗原表位肽PJ14和PJ5的免疫原性,将人工合成并纯化的PJ14和PJ5分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联;将与BSA偶联的PJ14和PJ5分别免疫BALB/c小鼠,然后以与OVA偶联的PJ14和PJ5作为间接酶联免疫... 详细信息

为检测Ⅰ型IBDVVP2蛋白线性B细胞抗原表位肽PJ14和PJ5的免疫原性,将人工合成并纯化的PJ14和PJ5分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联;将与BSA偶联的PJ14和PJ5分别免疫BALB/c小鼠,然后以与OVA偶联的PJ14和PJ5作为间接酶联免疫吸附试验抗原,分别测定免疫鼠血清中抗相应多肽的抗体。结果显示,免疫小鼠产生了抗PJ14和PJ5的抗体,抗体持续期达21周。表明PJ14和PJ5具有免疫原性。

关键词： IBDV VP2蛋白合成肽抗原表位免疫

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猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株HN07-1反向遗传操作平台的构建

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农业生物技术学报 2021年第10期29卷 2043-2050页

作者：陈鑫鑫王林建乔松林李睿邓瑞广张改平河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南农业大学

猪繁殖与呼吸综合征是世界规模化猪场的主要疫病之一,主要由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起。本研究旨在构建PRRSV高致病性毒株HN07-1反向操作系统。通过将基因组进行分段克... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征是世界规模化猪场的主要疫病之一,主要由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起。本研究旨在构建PRRSV高致病性毒株HN07-1反向操作系统。通过将基因组进行分段克隆和测序的方法获得HN07-1毒株全长基因组序列。运用反向遗传学技术将全基因组分段克隆至载体上,构建含有全长HN07-1毒株cDNA的感染性克隆pcDNA3.2-rHN07-1,并以此为骨架,构建在PRRSV基因组ORF1b和ORF2a间插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)的重组克隆pcDNA3.2-rHN07-1-EGFP;将构建的质粒转染Marc-145细胞拯救病毒。采用免疫荧光实验(immune fluorescence assay, IFA)和Western blot进行表达鉴定并对重组病毒进行滴度测定与分析。结果表明,PRRSV毒株HN07-1基因组全长15 345 nt,转染Marc-145细胞盲传一代后培养48 h出现典型的细胞病变效应,IFA和Western blot检测结果表明,拯救病毒与亲本毒株HN07-1一致,都能检测到PRRSV N蛋白表达。并且拯救病毒与亲本毒株具有相似的生长动力特性。综上所述,本研究成功构建了HN07-1感染性克隆,可用于反向遗传操作,为PRRSV致病机制研究及疫苗研发提供了参考。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) HN07-1 感染性克隆反向遗传技术病毒拯救

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马立克病病毒超强毒株GX0101感染宿主部分病毒基因表达水平及致病阶段分析

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畜牧兽医学报 2016年第8期47卷 1635-1644页

作者：马圣明滕蔓余祖华党露李会珍丁轲邓瑞广罗俊河南科技大学动物科技学院动物疫病与公共安全重点实验室洛阳471003 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室郑州450002 河南农业大学牧医工程学院郑州450002

旨在探讨马立克病病毒（MDV）超强毒株GX0101对宿主的感染过程及致病阶段,即＂Cornell模型＂,为进一步使用该毒株研究MDV的致病或致瘤机制奠定基础。用GX0101接种1日龄SPF鸡,建立了感染宿主的动物模型;然后用RT-qPCR分析10个具有代表性... 详细信息

旨在探讨马立克病病毒（MDV）超强毒株GX0101对宿主的感染过程及致病阶段,即＂Cornell模型＂,为进一步使用该毒株研究MDV的致病或致瘤机制奠定基础。用GX0101接种1日龄SPF鸡,建立了感染宿主的动物模型;然后用RT-qPCR分析10个具有代表性的MDV蛋白编码基因在感染不同时间点的动态基因转录水平。结果显示,GX0101感染发病鸡的临床症状及剖检病变与典型的马立克病一致;MDV编码的结构蛋白基因gB、gE和UL6、非结构蛋白基因UL42和UL52、立早期基因ICP4、水平传播相关基因UL13以及磷酸化蛋白基因pp38具有相似的转录水平和趋势,均在GX0101感染后7d上升至第一个峰值,10d降至低谷,14d又逐渐升高并在21d达到第二个峰值,30~60d逐渐下降并处于较低的转录水平;MDV编码的原癌基因meq和毒力相关基因RLORF6在GX0101感染7d即持续升高,并在14~60d的试验周期内较长时间处于高转录水平。结合作者此前研究及本文结果分析,GX0101感染宿主的＂Cornell模型＂：早期增殖性-限制性感染期为1~7d,潜伏感染期约为10d前后,晚期溶细胞性感染及免疫抑制期发生于14~21d,而T细胞转化及淋巴瘤形成阶段可能在14d前后就已经开始。

关键词：马立克病病毒超强毒株 GX0101 实时荧光定量PCR 基因表达致病阶段

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猪FcγRⅠ真核表达载体的构建及稳定表达细胞系的建立

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畜牧兽医学报 2010年第7期41卷 909-914页

作者：史平玲邬成业乔松林张改平王爱萍肖治军祁艳华卜丹河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室郑州450002 郑州大学生物工程系郑州450001

本研究旨在建立稳定表达猪FcγRⅠ的Marc-145细胞系。从猪肺泡巨噬细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅠ和γ链cDNA,并分别构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅠ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300μ***-1)... 详细信息

本研究旨在建立稳定表达猪FcγRⅠ的Marc-145细胞系。从猪肺泡巨噬细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅠ和γ链cDNA,并分别构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅠ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300μ***-1)和G418(400μ***-1)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环和流式细胞术对细胞系进行鉴定。结果表明成功构建了猪FcγRⅠ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系,且表达于转染细胞表面的poFcγRⅠ受体分子能与猪IgG特异结合。本研究为进一步研究奠定了基础。

关键词：猪FcγRⅠ受体共转染 Marc-145细胞

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小鼠IgGFc受体(moFcγRⅡ)稳定表达细胞系的建立及鉴定

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华北农学报 2010年第2期25卷 133-135页

作者：苗现伟席俊刘玺张改平邓瑞广李清州张利娜游雷鸣刘运超河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点开放实验室河南郑州450002 河南科技学院河南新乡453003

为建立小鼠IgGFc受体(moFcγRⅡ)稳定表达的哺乳动物细胞系,PCR克隆小鼠moFcγRⅡ片段,构建真核表达载体pcDNAmoFcγRⅡ。转染COS-7细胞后通过G418抗性筛选和连续克隆,获得了在COS-7细胞表面稳定表达FcγRⅡ的真核细胞系。玫瑰花环试验... 详细信息

为建立小鼠IgGFc受体(moFcγRⅡ)稳定表达的哺乳动物细胞系,PCR克隆小鼠moFcγRⅡ片段,构建真核表达载体pcDNAmoFcγRⅡ。转染COS-7细胞后通过G418抗性筛选和连续克隆,获得了在COS-7细胞表面稳定表达FcγRⅡ的真核细胞系。玫瑰花环试验结果显示其阳性率在90%以上。

关键词：小鼠IgG受体(FcγRⅡ) 细胞系玫瑰花环稳定转染

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旋毛虫南阳猪体分离株的生物学特性研究

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华北农学报 2008年第2期23卷 114-117页

作者：肖治军张改平邓瑞广李学伍杨艳艳柴书军赵东邢广旭杨继飞河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002

观测了旋毛虫南阳猪体分离株的形态大小,测定了其在小鼠和猪体中的繁殖力指数、雌虫体外产新生幼虫的能力和对低温的耐受性。测得该虫株雄成虫、雌成虫和发育充分的肌幼虫的长宽度分别为(1.415±0.164)mm×(0.048±0.014)mm... 详细信息

观测了旋毛虫南阳猪体分离株的形态大小,测定了其在小鼠和猪体中的繁殖力指数、雌虫体外产新生幼虫的能力和对低温的耐受性。测得该虫株雄成虫、雌成虫和发育充分的肌幼虫的长宽度分别为(1.415±0.164)mm×(0.048±0.014)mm,(2.627±0.246)mm×(0.056±0.018)mm和(1.112±0.185)mm×(0.038±0.013)mm;其在昆明小白鼠和三元杂交猪体中的繁殖力指数分别为(112.0±59.65)和142.5;平均每条雌虫体外产新生幼虫(56.76±5.13)条;在猪肉中的感染性肌幼虫置-32℃36 h或-22℃60 h即全部死亡。结果表明,该旋毛虫南阳猪体分离株的上述生物学特性与猪旋毛虫(***)的特性相似。

关键词：猪旋毛虫特性测定

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