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TNBS/乙醇溃疡性结肠炎大鼠模型差异表达 miRNA 与 mRNA 共表达分析

中华微生物学和免疫学杂志 2015年第10期35卷 741-748页

作者：钦丹萍周毅骏杨雪静张春丽李艳平代群孙佩娜浙江中医药大学附属第一医院消化内科杭州310006 浙江中医药大学第一临床医学院浙江中医药大学附属第一医院中心实验室杭州310006 浙江中医药大学附属第一医院病理科杭州310006

目的研究2,4,6-三硝基苯磺酸（ TNBS）/乙醇溃疡性结肠炎（ UC）大鼠中,UC相关miRNA的调控作用,即miRNA与mRNA互作关系. 方法用TNBS/乙醇灌肠,诱导UC大鼠模型.经过造模与14 d生理盐水灌胃后,解剖处死. 留取正常组与模型组大鼠相应的... 详细信息

目的研究2,4,6-三硝基苯磺酸（ TNBS）/乙醇溃疡性结肠炎（ UC）大鼠中,UC相关miRNA的调控作用,即miRNA与mRNA互作关系. 方法用TNBS/乙醇灌肠,诱导UC大鼠模型.经过造模与14 d生理盐水灌胃后,解剖处死. 留取正常组与模型组大鼠相应的结肠组织. 通过大体及镜下观察,验证造模效果. 同时对相应结肠组织进行miRNA芯片检测,根据芯片结果及相关文献报道,筛选出与UC发病密切相关的miRNA并对其进行RT-PCR验证. 另外,利用miRWalk数据库对差异miRNA的靶基因进行预测. 为了验证预测结果与实际情况的相符度,又同步进行了mRNA水平的表达谱芯片实验,筛选出与差异miRNA确有互作作用的mRNA. 为了更好地说明miRNA与mRNA的互作关系,又利用David数据库对靶基因进行注释,最终形成miRNA与mRNA共表达网络. 结果模型组大鼠结肠大体及镜下表现均符合UC 的发病特征. 通过 miRNA芯片筛选出了68 个差异miRNA[倍数变化（fold change）〉2, P〈0.05,表达值（expression mean）〉7],结合相关文献报道,筛选出6个与UC发病密切相关的miRNA. 同时对这6个miRNA进行了RT-PCR实验,结果提示,与正常组相比,4个差异miRNA（ miR-146a-5p、miR-146b-5p、miR-126a-3p和miR-21-5p）表达明显上调（ P〈0.01,P〈0.05）,2个差异miRNA（miR-200b-3p、miR-145-5p）表达明显下调（P〈0.01）. 结合miRWalk数据库对这6个差异miRNA的靶基因预测结果和表达谱芯片结果,本研究发现IL-6、Ccl5、Mapk3、Smad7这4个mRNA与上述6个miRNA有互作关系. 最终通过David数据库对这种互作关系进行注释,以阐明其在UC发病中的重要作用. 结论一个miRNA可以调控多条信号通路,而一条信号通路又受到多个miRNA的调控. 如果仅仅单纯抑制某条信号通路,可能并不能从根本上抑制炎症的发生. 而从其上游出发,研究miRNA作用,阐明相互关系,并调控mRNA的作用,可能可以从根本上逆转疾病的进程.

关键词： TNBS/乙醇溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型表达谱共表达分析

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miR-199a在2,4,6-三硝基苯磺酸/乙醇溃疡性结肠炎大鼠中的表达及雷公藤多苷的作用研究

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中国药学杂志 2016年第22期51卷 1934-1940页

作者：钦丹萍杨新艳周毅骏张春丽杨雪静李艳平孙佩娜代群浙江中医药大学附属第一医院消化内科杭州310006 浙江中医药大学第一临床医学院杭州310053 浙江中医药大学附属第一医院病理科杭州310006 浙江中医药大学附属第一医院胃肠研究实验室杭州310006

目的探讨miR-199a在2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠中的表达情况及雷公藤多苷(TWP)对其的作用。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法建立溃疡性结肠炎动物模型。对大鼠结肠组织进行大体形态损伤评... 详细信息

目的探讨miR-199a在2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠中的表达情况及雷公藤多苷(TWP)对其的作用。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法建立溃疡性结肠炎动物模型。对大鼠结肠组织进行大体形态损伤评分和镜下结肠损伤评分;采用芯片分析、Real-time PCR技术评估各组结肠黏膜组织中miR-199a的表达水平;针对milwalk数据库中预测的下游靶基因mRNA用表达谱进一步筛选分析靶基因mRNA,并用Real-time PCR技术验证靶基因mRNA在各组中的表达,最后在DAVID数据库进行pathway分析,以分析miR-199a参与UC炎症活动时所调节的靶基因mRNA。结果 TWP高剂量组结肠黏膜大体形态损伤评分、组织病理损伤评分与模型对照组间差异有统计学意义(P<0.01)。芯片分析显示,模型对照组中miR-199a较正常对照组上调(P<0.01),在AZA组表达较模型对照组下调(P<0.01,P<0.05)。miR-199a-3p在TWP中剂量组,miR-199a-5p在TWP高剂量组中较模型对照组均下调(P<0.05)。miR-199a的Real-time PCR结果显示,模型对照组miR-199a的表达水平较正常对照组明显上调(P<0.01);TWP的中、高剂量组和AZA组中miR-199a-3p的表达水平较模型对照组均下调(P<0.05);TWP中剂量组miR-199a-5p的表达水平较模型对照组下调(P<0.05)。表达谱分析显示,FASL为miR-199a的靶基因。模型对照组中靶基因FASL表达水平较正常对照组上调(P<0.05),TWP组、AZA组中靶基因FASL表达水平较模型对照组下调,其中以AZA组的下调为显著(P<0.01)。靶基因FASL的Real-time PCR结果显示,模型对照组中靶基因FASL表达水平较正常对照组明显上调(P<0.01);TWP中剂量组、高剂量组和AZA组中靶基因FASL表达水平较模型对照组下调(P<0.01)。结论 miR-199a在TNBS/乙醇UC大鼠中有上调表达,FASL是miR-199a的下游靶基因。TWP能改善UC的炎症活动,对UC活动时上调的miR-199a具有下调作用;FASL在UC活动时呈上调表达,TWP对miR-199a下游靶基因FASL具有下调作用。

关键词：溃疡性结肠炎雷公藤多苷 miR-199a 表达谱分析 FASL

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急诊科C、D类慢性阻塞性肺疾病急性发作患者细菌分布及耐药性分析

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中华急诊医学杂志 2013年第6期22卷 626-629页

作者：蒋旭宏王原华军益吕宾浙江中医药大学杭州310006 浙江中医药大学附属第一医院急诊科浙江中医药大学附属第一医院微生物实验室

目的研究分析浙江中医药大学附属第一医院急诊科C、D类慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）急性加重患者细菌感染的分布情况及其耐药性。方法对急诊科C、D类COPD急性加重患者痰液进行培养＋药敏试验，采用... 详细信息

目的研究分析浙江中医药大学附属第一医院急诊科C、D类慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）急性加重患者细菌感染的分布情况及其耐药性。方法对急诊科C、D类COPD急性加重患者痰液进行培养＋药敏试验，采用VITEK-2 compact微生物分析仪鉴定细菌，采用CLSI制定的纸片扩散法进行细菌耐药分析。结果在分离出的222株细菌株中，革兰阳性（G＋）菌60株，占27．O％，革兰阴性（G＋）菌162株，占73．0％。G＋菌主要为金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为50．00％，耐药率显著高于甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA），对万古霉素、利奈唑胺、替加环素均敏感（100％）。G＋菌主要为铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌，非发酵菌铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的耐药率较高，肠杆菌科中大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株检出率高于肺炎克雷伯菌，具有多重耐药性。结论急诊科C、D类COPD急性加重患者的细菌耐药形势严峻，铜绿假单胞菌分离率最高，需加强耐药件检测，及时有效榨制感染减少耐药率。

关键词：细菌耐药抗菌药物慢性阻塞性肺病细菌分布急诊科急性加重耐药性检测减少耐药率

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Fas/FasL、p38 MAPK通路在溃疡性结肠炎大鼠中的表达及雷公藤多苷的作用

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中国药理学通报 2019年第2期35卷 218-223页

作者：杨强钦丹萍杨新艳岑刚代群张春丽汪瑶浙江中医药大学第一临床医学院浙江杭州310053 浙江中医药大学附属第一医院消化内科浙江杭州310006 浙江中医药大学附属第一医院胃肠研究实验室浙江杭州310006 浙江中医药大学附属第一医院病理科浙江杭州310006

目的探讨Fas/FasL及p38 MAPK信号通路在溃疡性结肠炎(UC)大鼠中的表达变化,以及雷公藤多苷(TWP)对其的影响。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法建立UC大鼠模型。对大鼠结肠炎症进行评分;以表达谱技术分析Fas/FasL的差异表达... 详细信息

目的探讨Fas/FasL及p38 MAPK信号通路在溃疡性结肠炎(UC)大鼠中的表达变化,以及雷公藤多苷(TWP)对其的影响。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法建立UC大鼠模型。对大鼠结肠炎症进行评分;以表达谱技术分析Fas/FasL的差异表达,并用real-time PCR技术进行验证;继而DAVID数据库信号通路分析显示,Fas/FasL调节UC的炎症活动涉及p38 MAPK信号通路,同时在表达谱中分析此信号通路中的相关分子,并以real-time PCR法加以验证;最后采用RT-PCR法及Western blot法检测该信号通路末端炎症因子的表达。结果 UC大鼠结肠炎症评分明显升高,TWP能明显降低其炎症评分; Fas/Fas L系统及p38 MAPK通路中的Fas L、MAPK14(p38α)、TNF-α、IL-1β在UC大鼠炎症活动时均呈上调表达,TWP能够明显下调上述指标的表达。结论 TWP能够通过Fas/Fas L系统及p38MAPK信号通路对UC炎症活动进行调控。

关键词：雷公藤多苷溃疡性结肠炎 Fas/FasL p38 MAPK TNF-α IL-1β

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雷公藤多苷片对溃疡性结肠炎大鼠miR-146a、miR-146b及TLR4/MyD88依赖信号通路的调控作用研究

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中草药 2016年第10期47卷 1723-1730页

作者：周毅骏钦丹萍杨新艳杨雪静张春丽曹俊敏李艳平李珊浙江中医药大学第一临床医学院浙江杭州310053 浙江中医药大学附属第一医院消化内科浙江杭州310006 浙江中医药大学附属第一医院中心实验室浙江杭州310006 浙江中医药大学附属第一医院病理科浙江杭州310006

目的研究雷公藤多苷片(TWPT)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溃疡性结肠炎(UC)大鼠微小RNA(mi R-146a、mi R-146b)及TLR4/My D88依赖信号通路的调控作用。方法采用TNBS/乙醇灌肠法制备UC大鼠模型。将90只雄性Wistar大鼠随机分为对照组... 详细信息

目的研究雷公藤多苷片(TWPT)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溃疡性结肠炎(UC)大鼠微小RNA(mi R-146a、mi R-146b)及TLR4/My D88依赖信号通路的调控作用。方法采用TNBS/乙醇灌肠法制备UC大鼠模型。将90只雄性Wistar大鼠随机分为对照组,模型组,TWPT低、中、高剂量(30、60、120 mg/kg)组,硫唑嘌呤(AZA,60 mg/kg)组,每组15只。各组分别ig给予相应药物连续14 d。进行各组大鼠结肠组织大体及镜下病理评分。采用q RT-PCR法检测mi R-146a和mi R-146b的表达情况;Western blotting法和RT-PCR法检测大鼠结肠组织中TLR4/My D88依赖信号通路相关分子(TLR4、My D88、TRAF-6、NF-κB、TNF-α、IL-1β)在m RNA及蛋白水平的表达情况。结果 DAI评分,大体及镜下表现和评分均提示TNBS/乙醇UC大鼠模型造模成功,TWPT对UC大鼠临床症状的改善及黏膜愈合具有一定作用,该作用与AZA相比相当或强于AZA。q RT-PCR结果提示:与对照组相比,模型组中mi R-146a和mi R-146b表达明显增加(P<0.01);与模型组相比,TWPT及AZA均可显著抑制mi R-146a和mi R-146b的表达(P<0.01),其中TWPT中剂量组对2者的抑制作用最强。RT-PCR及Western blotting实验均提示:与对照组相比,模型组中TLR4/My D88依赖信号通路相关的分子无论在m RNA还是蛋白水平表达均显著升高(P<0.01);与模型组相比,TWPT呈剂量依赖性地抑制该信号通路上各节点分子m RNA及蛋白水平的表达,其中TWPT高剂量组中各节点分子m RNA及蛋白表达水平低于模型组(P<0.05)。与AZA组比较,TWPT高剂量组对该信号通路上游因子(TLR4、My D88、TRAF-6、NF-κB)m RNA及蛋白表达水平的抑制作用略好于AZA组,而对末端炎症因子TNF-α及IL-1βm RNA及蛋白水平的抑制作用却略逊于AZA组,但上述2种差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在TNBS/乙醇UC大鼠模型中,TWPT能通过抑制mi R-146a和mi R-146b的表达,并能抑制TLR4/My D88依赖信号通路及炎症因子IL-1β及TNF-α释放,对信号通路及炎症因子的作用强度与剂量呈正相关。

关键词：雷公藤多苷片溃疡性结肠炎 miR-146a miR-146b TLR4/MyD88依赖信号通路

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雷公藤多苷对溃疡性结肠炎大鼠TLR4/MyD88非依赖信号通路的作用研究

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中国中药杂志 2016年第6期41卷 1093-1099页

作者：钦丹萍周毅骏孙佩娜曹俊敏张春丽代群浙江中医药大学附属第一医院消化内科浙江杭州310006 浙江中医药大学第一临床医学院浙江杭州310053 浙江中医药大学附属第一医院胃肠研究实验室浙江杭州310006 浙江中医药大学附属第一医院病理科浙江杭州310006

为了研究雷公藤多苷(TWP)对三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溃疡性结肠炎(UC)大鼠TLR4/My D88非依赖信号通路的调控作用,采用了TNBS/乙醇联合灌肠的方法建立TNBS/乙醇UC大鼠模型。模型建立成功后,将90只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组,模型... 详细信息

为了研究雷公藤多苷(TWP)对三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溃疡性结肠炎(UC)大鼠TLR4/My D88非依赖信号通路的调控作用,采用了TNBS/乙醇联合灌肠的方法建立TNBS/乙醇UC大鼠模型。模型建立成功后,将90只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,TWP低、中、高剂量组(3,6,12 mg·kg^(-1)),硫唑嘌呤(AZA)组(6 g·kg^(-1)),每组15只。各组分别给予相应药物连续灌胃14 d。每隔3 d评估UC大鼠疾病活动指数(DAI)。14 d后解剖所有大鼠,留取相应结肠组织观察各组大鼠结肠组织大体及镜下病理表现,并对其进行评分。采用Western blot法和RT-PCR法检测UC大鼠结肠组织中TLR4/My D88非依赖信号通路相关分子(TLR4,TRAM,TRIF,NF-κB,IFN-γ)在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果提示,DAI评分、大体及镜下表现和评分均提示TNBS/乙醇UC大鼠模型造模成功,TWP对UC大鼠临床症状的改善及黏膜愈合具有一定作用,该作用与AZA相比相当或强于AZA。RT-PCR及Western blot实验均提示,与正常对照组相比,模型对照组中TLR4/My D88非依赖信号通路相关的分子无论在mRNA还是蛋白水平表达均显著升高(P<0.01)。与模型对照组相比,TWP呈剂量依赖性地抑制该信号通路上各节点分子mRNA及蛋白水平的表达,其中TWP高剂量组中各节点分子mRNA及蛋白表达水平显著低于模型对照组(P<0.05)。与AZA组相比,TWP高剂量组对该信号通路上游因子(TLR4,TRAM,TRIF,NF-κB)mRNA及蛋白表达水平的抑制作用略好于AZA组,而对该信号通路的末端炎症因子IFN-γmRNA及蛋白水平的抑制作用却略逊于AZA组,但上述2种差异均无统计学意义。因此,在TNBS/乙醇UC大鼠模型中,My D88非依赖信号通路参与了炎症活动的调控,TWP可以通过抑制TLR4/My D88非依赖信号通路抑制IFN-γ的释放,发挥抗炎作用,其作用强度与剂量呈正相关。

关键词：雷公藤多苷(TWP) 溃疡性结肠炎(UC) TLR4/My D88非依赖信号通路

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变应性支气管肺曲霉病的诊断和治疗新进展

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中国医学科学院学报 2016年第5期38卷 611-616页

作者：夏婷婷徐志波刘贤忠童卫泉张丽婷陈芳王会仍浙江中医药大学第一临床医学院杭州310053 浙江中医药大学附属第二医院呼吸内科杭州310005 浙江中医药大学附属第一医院肺功能室杭州310006

变应性支气管肺曲菌病是肺部真菌疾病中的主要疾病之一,在临床并不罕见,但其诊断较难,容易误诊漏诊,且治疗效果不稳定,本文总结了其诊断和治疗的新进展。

关键词：变应性支气管肺曲菌病诊断治疗进展

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蛇六谷石油醚提取物对K562细胞生物学特性的影响及其机制

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中国实验血液学杂志 2021年第4期29卷 1028-1033页

作者：余潇苓赵燕娜尹利明高瑞兰潘磊杜文喜浙江中医药大学附属第一医院血液病研究所浙江杭州310006 浙江中医药大学附属第一医院肿瘤科浙江杭州310006 浙江中医药大学附属第一医院骨痹重点研究室浙江杭州310006

目的:探讨蛇六谷石油醚提取物(SLG)抑制白血病K562细胞增殖、促进凋亡和诱导分化的作用。方法:SLG处理K562细胞,同时加入ERK信号通路阻滞剂PD98059。采用MTT检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率及分化相关抗原表达阳性的细胞比例... 详细信息

目的:探讨蛇六谷石油醚提取物(SLG)抑制白血病K562细胞增殖、促进凋亡和诱导分化的作用。方法:SLG处理K562细胞,同时加入ERK信号通路阻滞剂PD98059。采用MTT检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率及分化相关抗原表达阳性的细胞比例,采用Western blot检测ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达水平。结果:SLG 50、100、200 mg/L能够降低K562细胞的增殖活力,其抑制作用呈剂量依赖性(r=0.9997)。SLG能够提高细胞凋亡率及分化相关抗原CD11b、CD14和CD42b表达阳性的细胞比例,同时能够上调p-ERK1/2的表达。PD98059可部分逆转SLG促凋亡和分化的作用。结论:SLG通过ERK信号通路抑制K562细胞增殖、促进凋亡和诱导分化。

关键词：蛇六谷白血病 ERK信号通路凋亡细胞分化细胞增殖

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内镜逆行胰胆管造影术的不同体位选择

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中国实用内科杂志 2025年第4期 327-329页

作者：蒋钶陆磊张筱凤浙江中医药大学第四临床医学院西湖大学医学院附属杭州市第一人民医院消化内科浙江省中西医结合胆胰疾病重点实验室杭州市消化疾病研究所

内镜逆行胰胆管造影术（ERCP）于1968年问世[1]。近年来随着内镜操作技术及其附属器械的迅速发展，ERCP开创了我国胆胰疾病内镜微创诊治的新局面[2]。相对于其他内镜操作，ERCP操作技术要求更高，合适的手术体位在术中就显得格外重要。... 详细信息

内镜逆行胰胆管造影术（ERCP）于1968年问世[1]。近年来随着内镜操作技术及其附属器械的迅速发展，ERCP开创了我国胆胰疾病内镜微创诊治的新局面[2]。相对于其他内镜操作，ERCP操作技术要求更高，合适的手术体位在术中就显得格外重要。手术体位选取不当不仅不利于术者操作、麻醉管理以及患者自身的舒适度，还有可能会引起相关并发症，影响预后[3]。同时，随着目前疾病诊治复杂性的加剧、麻醉方式的改变及患者对舒适度需求的增加等因素，对ERCP体位提出了不同要求。本文对目前主流的ERCP体位综述如下。

关键词：内镜逆行胰胆管造影术体位左侧卧位俯卧位仰卧位

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CIMAvax-EGF在非小细胞肺癌中的治疗进展

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中国医学科学院学报 2018年第3期40卷 411-414页

作者：张佳颖朱磊杨宏宽陈芳浙江中医药大学第一临床医学院杭州310053 浙江中医药大学附属第一医院肺功能室杭州310006

目前非小细胞肺癌的免疫治疗正迅速发展,其中CIMAvax-EGF疫苗是一种古巴独立研制开发的治疗性肺癌疫苗,其机制是通过疫苗接种而形成抗表皮生长因子(EGF)抗体,从而阻断EGF与其受体的结合而发挥抗癌作用。目前Ⅱ期和Ⅲ期试验已经证明了该... 详细信息

目前非小细胞肺癌的免疫治疗正迅速发展,其中CIMAvax-EGF疫苗是一种古巴独立研制开发的治疗性肺癌疫苗,其机制是通过疫苗接种而形成抗表皮生长因子(EGF)抗体,从而阻断EGF与其受体的结合而发挥抗癌作用。目前Ⅱ期和Ⅲ期试验已经证明了该疫苗的有效性和长期安全性,新的Ⅲ期和Ⅳ期试验正在进行中。了解CIMAvax-EGF在非小细胞肺癌中的应用,将有助于加速肺癌的免疫治疗进程,本文总结了CIMAvax-EGF在非小细胞肺癌中的治疗进展。

关键词： CIMAvax-EGF 疫苗非小细胞肺癌表皮生长因子免疫治疗

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