检索结果-内蒙古大学图书馆

中国细胞生物学学会第九次会员代表大会暨青年学术大会

作者：金建远倪崖李忠香陈璋辉陈文颖吕建新张欣宗付萍石其贤浙江省医学科学院生殖生理实验室浙江省医学科学院生殖生理实验室浙江省医学科学院生殖生理实验室浙江省医学科学院生殖生理实验室浙江省医学科学院生殖生理实验室温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室浙江省计划生育研究所杭州市中医院妇科实验室浙江省医学科学院生殖生理实验室

精子顶体反应(acrosome reaction,AR)与体细胞胞吐作用(exocytosis)相似,系精子与卵子受精的前提。它是精子质膜与顶体外膜多点融合并形成囊泡化并伴随各种酶类释放,从而促进精子穿过卵透明带(ZP)并与卵膜融合的过程。在 AR 过程中,精... 详细信息

精子顶体反应(acrosome reaction,AR)与体细胞胞吐作用(exocytosis)相似,系精子与卵子受精的前提。它是精子质膜与顶体外膜多点融合并形成囊泡化并伴随各种酶类释放,从而促进精子穿过卵透明带(ZP)并与卵膜融合的过程。在 AR 过程中,精子膜磷脂可发生一系列变化。我们以往研究证明,在 AR 期间,激

关键词：精子顶体反应磷脂酶 A2 sPLA2 GIID 花生四烯酸

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性

引用

细胞生物学杂志 2006年第5期28卷 711-716页

作者：潘建华彭颖郑昭暻吕建新温州医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室温州325035

融合基因EGF-IL-18与表达载体pET32a(+)连接构建融合型原核表达质粒pET32a(+)-EGF-IL-18。该基因在***(DE3)中获得高效表达,SDS-PAGE分析表明表达产物大部分以包涵体形式存在。以2mol/L尿素和1%TritonX-100对包涵体进行反复洗涤后,利用... 详细信息

融合基因EGF-IL-18与表达载体pET32a(+)连接构建融合型原核表达质粒pET32a(+)-EGF-IL-18。该基因在***(DE3)中获得高效表达,SDS-PAGE分析表明表达产物大部分以包涵体形式存在。以2mol/L尿素和1%TritonX-100对包涵体进行反复洗涤后,利用离子交换柱层析对包涵体进行柱上复性,结果表明离子交换层析柱上复性不仅能够获得可溶性的EGF-IL-18融合蛋白,而且产物同时得到纯化,纯度大于90%。复性的EGF-IL-18经分子筛进一步纯化后,体外实验证明具有促进人外周血单个核细胞(PBMC)IFN-g基因表达的能力。该方法简单、高效,为进一步开展EGF-IL-18的动物实验及其大量纯化制备打下基础。

关键词： EGF-IL-18融合蛋白包涵体离子交换柱层析柱上复性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

SHV-4型ESBL的表达纯化及其特性研究

SHV-4型ESBL的表达纯化及其特性研究

引用

中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会

作者：王震叶明君邹立林季敬璋陈秀枢吕建新温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室温州医学院微生态学研究所温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室

目的:在pET26b／BL21(DE3)表达系统中,表达纯化SHV-4型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum-beta-lactamase,ESBL),纯化后的SHV-4酶进行特性研究, 最终为临床用药提供借鉴及其满足各领域对纯酶的需求。方法:将SHV-4基因克隆到表达载体p... 详细信息

目的:在pET26b／BL21(DE3)表达系统中,表达纯化SHV-4型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum-beta-lactamase,ESBL),纯化后的SHV-4酶进行特性研究, 最终为临床用药提供借鉴及其满足各领域对纯酶的需求。方法:将SHV-4基因克隆到表达载体pET26b中,构建pET26-SHV-4表达质粒,再将重组质粒转入大肠埃希氏菌*** BL21(DE3)中,挑取10个较大克隆,扩增提取质粒,酶切鉴定, 并选取对头孢硝噻吩降解速度最快的一个克隆为原始菌,37℃时,摇瓶发酵获得种子菌,再转入发酵罐发酵,当菌体生长至OD600nm0．8 A时,加入诱导剂异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)至终浓度为1．0mmol／L,6h后离心收获细菌并超声裂解,SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白的表达形式为可溶性表达,离心超声裂解液, 对超声上清进行Ni2+亲和层析,获取的SHV-4酶再进行SDS-PAGE电泳及其活性的鉴定,最后对SHV-4纯酶进行等电点、动力学参数等酶特性测定,并在不同的 pH和温度时测定SHV-4酶的活性。结果:酶切质粒表明10个克隆都成功转入目的基因,活性最高的菌株纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE电泳分析及其活性鉴定表明,该蛋白为SHV-4酶,分子量约为30kD,纯度大于95％,等电点为5．9,最适pH值为6-8,最适温度为37℃,以头孢硝噻吩为底物Km值为2．61×10-6M/L, Kcat为258 S-1,Kcat／Km为9．88×107M-1S-1L。结论:成功的表达有活性SHV-4酶, 该酶有广泛pH、温度适应能力,有望开发成为商品酶。

关键词：目的蛋白 SDS SHV-4 特性研究

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：