检索结果-内蒙古大学图书馆

现代生物医学进展 2011年第19期11卷 3713-3715页

作者：张雪峰王斌钱冬萌吴宝叶石海英刘淑清闫安高红梅闫丽娟康燕李宝华青岛大学医学院微生物学教研室山东青岛266071 滨州医学院附属医院无棣医院山东滨州251900

目的:探讨血浆DNA和HBV-DNA载量在病毒性肝炎肝硬化后原发性肝癌(PHC)的诊断价值。方法:用RT-PCR方法随访检测HBsAg阳性且经彩色B超诊断为肝硬化的患者,每6个月检测一次患者的血液循环DNA和HBV-DNA载量,直到经临床症状、彩色B超、CT诊... 详细信息

目的:探讨血浆DNA和HBV-DNA载量在病毒性肝炎肝硬化后原发性肝癌(PHC)的诊断价值。方法:用RT-PCR方法随访检测HBsAg阳性且经彩色B超诊断为肝硬化的患者,每6个月检测一次患者的血液循环DNA和HBV-DNA载量,直到经临床症状、彩色B超、CT诊断为原发性肝癌为止。结果:在PHC中,循环DNA 61.3±31.9ng/ml,健康对照组20.3±9.9ng/ml,两组差异显著(P<0.01);而HBV-DNA载量,在PHC确诊时多数处于较低水平,78%≤105copies/ml,与PHC确诊前有明显差异(P<0.01)。PHC未发生淋巴结转移者循环DNA 51.2±17.9ng/ml,淋巴结转移者循环DNA 73.9±23.7ng/ml,两者存在差异(P<0.05);而HBV-DNA载量有无淋巴结转移无明显差异。结论:联合检测血液循环DNA和HBV-DNA载量对PHC的预测、预后价值明显,且方法简单,易于开展。

关键词：原发性肝癌血循环DNA HBV-DNA

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油菜RNA干扰(RNAi)文库的构建

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江苏农业学报 2010年第5期26卷 920-924页

作者：谭秀华武玉永单长民马立新滨州医学院遗传学教研室山东烟台264003 湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程实验室湖北武汉430062

为了通过构建高通量RNAi(RNA干扰)双元载体来得到油菜RNAi文库,对PCR引物设计时,在目的片段5′端和3′端分别引入合适的酶切位点序列,在3种中间载体的基础上构建高通量RNAi双元载体pHBMT4。该载体Bsu36Ⅰ酶切位点间的片段可被油菜的任... 详细信息

为了通过构建高通量RNAi(RNA干扰)双元载体来得到油菜RNAi文库,对PCR引物设计时,在目的片段5′端和3′端分别引入合适的酶切位点序列,在3种中间载体的基础上构建高通量RNAi双元载体pHBMT4。该载体Bsu36Ⅰ酶切位点间的片段可被油菜的任意一种功能片段取代。载体pHBMT4含有用以检测载体功效的gus报告基因,原多克隆位点处被一个插入目标序列表达框取代,该框含有的反向重复nos终止序列可自然形成发夹环结构引发转录后水平的基因沉默(PTGS)。通过抽提的油菜总DNA与载体pHBMT4相连转化获得了油菜RNAi文库,为以后研究油菜的基因组功能打下良好的基础。

关键词： RNAi文库构建油菜双元载体

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一种植物RNAi双元载体的构建

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安徽农业科学 2009年第8期37卷 3474-3476,3519页

作者：谭秀华宋晓冬杨玥于敏马立新滨州医学院遗传学教研室山东烟台264003 湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程实验室湖北武汉430062

[目的]为利用RNAi技术研究植物基因组功能奠定基础。[方法]通过PCR技术克隆一系列RNAi双元载体所需要的元件:绿色荧光蛋白基因(gfp)、花椰菜花叶病毒启动子(CamV35S)、氨基糖苷3′-腺苷酰基转移酶基因(aada)、胭脂碱合成酶基因终止信号(... 详细信息

[目的]为利用RNAi技术研究植物基因组功能奠定基础。[方法]通过PCR技术克隆一系列RNAi双元载体所需要的元件:绿色荧光蛋白基因(gfp)、花椰菜花叶病毒启动子(CamV35S)、氨基糖苷3′-腺苷酰基转移酶基因(aada)、胭脂碱合成酶基因终止信号(nos),并进行组装,在双元载体质粒pCAMBIA1301的基础上构建目的载体。[结果]通过7种中间载体的构建,最后成功得到双元载体质粒pHBMT14。[结论]该载体的成功构建为以后的植物基因组功能研究提供了技术平台。

关键词： RNAi 构建基因克隆双元载体

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IRS-PCR对临床分离株MRSA的分型研究

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中国病原生物学杂志 2009年第6期4卷 426-428页

作者：张玉梅乔媛媛李波清宓伟刘帅周媛媛韩黎滨州医学院烟台校区病原生物学教研室山东烟台264003 潍坊医学院医学微生物学教研室山东潍坊261042 解放军疾病预防控制所医院感染监督中心北京100071

目的探讨稀有限制区多聚酶链式反应(infrequent-restriction-site PCR,IRS-PCR)在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA)基因分型中的应用价值,为临床治疗和预防提供科学依据。方法用头孢西丁纸片扩散法检测分离自神经内科病房患者的MRSA,PCR扩增MRSA菌株mecA基因,并利用IRS-PCR对MRSA菌株进行基因分型。结果临床分离株MRSA经PCR扩增出533bp的mecA基因片段,ISR-PCR产物电泳结果显示,10株MRSA临床分离株分为A(6株)、B(2株)和C(2株)共3个亚型。结论IRS-PCR能对MR-SA菌株快速分型,是一种有价值的分子流行病学研究工具。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRsA) 稀有限制区多聚酶链式反应(IRS-PCR) 基因分型

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甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表达载体构建

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安徽农业科学 2008年第11期36卷 4431-4434页

作者：武玉永姚庆收马立新滨州医学院遗传学教研室山东烟台264003 湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程实验室湖北武汉430062

[目的]为研究质体定位的乙酰辅酶A羧化酶转化叶绿体奠定基础。[方法]根据GeneBank上的甘蓝型油菜的叶绿体DNA序列设计1对引物,通过PCR扩增获得与甘蓝型油菜叶绿体基因组可发生同源重组的DNA片段,构建甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表... 详细信息

[目的]为研究质体定位的乙酰辅酶A羧化酶转化叶绿体奠定基础。[方法]根据GeneBank上的甘蓝型油菜的叶绿体DNA序列设计1对引物,通过PCR扩增获得与甘蓝型油菜叶绿体基因组可发生同源重组的DNA片段,构建甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表达载体,并在大肠杆菌中通过平板定性分析和Western印迹对所构建载体上的表达盒进行功能鉴定。[结果]以甘蓝型油菜的叶片叶绿体基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得4 357 bp的DNA片段,包含2个开放阅读框RbcL和β-CT。成功构建了甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表达载体pHBM720,而且同一多顺反子的3个基因均在大肠杆菌中得到表达。[结论]该叶绿体多顺反子单交换表达载体具有较强的通用性与安全性,比双交换表达载体更具优越性。

关键词：甘蓝型油菜叶绿体DNA 多顺反子单交换表达载体

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甘蓝型油菜乙酰辅酶A羧化酶3个亚基基因的克隆及其表达

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安徽农业科学 2008年第10期36卷 4002-4006页

作者：武玉永谭秀华马立新滨州医学院遗传学教研室山东烟台264003 湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程实验室湖北武汉430062

[目的]为构建乙酰辅酶A羧化酶的叶绿体表达载体奠定基础：[方法]以从甘蓝型油菜叶片中提取的叶绿体基因组DNA为模板进行PCR扩增，克隆羧基转移酶β亚基基因.以从开花20～29d后油菜幼胚中提取的总RNA为模板进行RT-PCR扩增，克隆生物素羧... 详细信息

[目的]为构建乙酰辅酶A羧化酶的叶绿体表达载体奠定基础：[方法]以从甘蓝型油菜叶片中提取的叶绿体基因组DNA为模板进行PCR扩增，克隆羧基转移酶β亚基基因.以从开花20～29d后油菜幼胚中提取的总RNA为模板进行RT-PCR扩增，克隆生物素羧化酶和生物素羧基载体蛋白的。cDNA序列。最后，乙酰辅酶A羧化酶的3个亚基基因被克隆到大肠杆菌表达载体中：[结果]SDS-PAGE分析结果表明乙酰辅酶A羧化酶的3个亚基基因分别被克隆到大肠杆菌表达载体中。乙酰辅酶A羧化酶的3个亚基基因在大肠杆菌中的表达产物分别为76．6、44．0和81．5kD，其融合蛋白分别占总菌体蛋白的12％、10％和6％。

关键词：甘蓝型油莱乙酰辅酶A羧化酶基因克隆基因表达

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阿司匹林抗癌作用研究进展

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泰山医学院学报 2007年第1期28卷 73-75页

作者：翟静曹奇志候盼飞泰山医学院生物化学教研室山东泰安271000 滨州医学院免疫学与微生物学教研室山东滨州256603 泰山医学院

阿司匹林,又名乙酰水杨酸,为较温和的解热镇痛药,有较强的抗炎抗风湿作用,并有促进尿酸排泄和抗血小板凝集作用,近几年有很多研究发现小剂量长期服用阿司匹林可以明显降低多种癌症的发病率.体外试验也证明:阿司匹林可以抑制多种肿瘤细... 详细信息

阿司匹林,又名乙酰水杨酸,为较温和的解热镇痛药,有较强的抗炎抗风湿作用,并有促进尿酸排泄和抗血小板凝集作用,近几年有很多研究发现小剂量长期服用阿司匹林可以明显降低多种癌症的发病率.体外试验也证明:阿司匹林可以抑制多种肿瘤细胞的生长,促进其凋亡.

关键词：阿司匹林抗癌作用

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人白细胞介素21的原核表达及初步纯化

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滨州医学院学报 2006年第3期29卷 165-167页

作者：付强王斌滨州医学院免疫学教研室滨州市256603 青岛大学医学院微生物学教研室

目的利用PCR技术从人扁桃体细胞cDNA中克隆出IL-21编码基因,并将其在原核细胞大肠杆菌中进行表达,并进行了初步纯化。方法以人扁桃体细胞经PHA刺激的cDNA文库为模板,经PCR获得IL-21全基因片段。测序确认后,分别设计含BamHⅠ和SalⅠ酶切... 详细信息

目的利用PCR技术从人扁桃体细胞cDNA中克隆出IL-21编码基因,并将其在原核细胞大肠杆菌中进行表达,并进行了初步纯化。方法以人扁桃体细胞经PHA刺激的cDNA文库为模板,经PCR获得IL-21全基因片段。测序确认后,分别设计含BamHⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,经PCR获得IL-21成熟肽的编码基因。将此IL-21基因插入表达载体pGEX-4T-2,重组克隆经酶切与测序确认后转化大肠杆菌DH5α进行IPTG诱导表达。用琼脂糖珠结合的方法纯化。结果琼脂糖凝胶电泳显示重组质粒的PCR和双酶切产物与理论大小相等。SDS-PAGE显示经IPTG诱导后的大肠杆菌DH5α亦表达一与理论相符的条带。目的蛋白约占总菌体蛋白的10%。并获得了与理论值相符的纯化条带。结论成功地构建了IL-21编码基因克隆载体并获得在原核细胞大肠杆菌中的成功表达,同时建立了该蛋白的琼脂糖珠纯化的方法。

关键词：白细胞介素21 基因表达蛋白表达纯化

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建立以EGFP为报告基因检测HSV感染的细胞株

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微生物学通报 2005年第5期32卷 118-121页

作者：赵磊于红张文卿青岛大学医学院微生物学教研室滨州医学院附属医院滨州256603

通过PCR扩增HSV-1ICP6启动子目的基因片段,克隆至真核表达载体pEGFP-1构建重组质粒pICP6-EGFP,转染Vero细胞,经G418筛选获得稳定转染细胞株Vero-ICP6-EGFP细胞。以不同量的HSV-1感染Vero-ICP6-EGFP细胞,分别以倒置荧光显微镜和流式细胞... 详细信息

通过PCR扩增HSV-1ICP6启动子目的基因片段,克隆至真核表达载体pEGFP-1构建重组质粒pICP6-EGFP,转染Vero细胞,经G418筛选获得稳定转染细胞株Vero-ICP6-EGFP细胞。以不同量的HSV-1感染Vero-ICP6-EGFP细胞,分别以倒置荧光显微镜和流式细胞术检测EGFP荧光的量和强度。结果表明,转染细胞株Vero-ICP6-EGFP感染HSV-16h后,倒置荧光显微镜下即可检测绿色荧光;流式细胞术检测结果表明,EGFP荧光的量及强度随HSV-1病毒的滴度增加而增加。已建立的以EGFP为报告基因的Vero-ICP6-EGFP细胞株具有早期、快速、灵敏等优点,特异性较高,可望用于HSV感染的快速诊断及抗病毒药物的检测。

关键词：人单纯疱疹病毒1型绿色荧光蛋白启动子ICP6

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耐碱性甘露聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

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微生物学报 2005年第4期45卷 543-546页

作者：谭秀华武玉永马立新蒋思婧湖北大学生命科学学院分子微生物与基因工程实验室武汉430062 滨州医学院细胞生物学教研室滨州256603

通过功能平板从土壤中筛选得到含甘露聚糖酶基因的耐碱菌株。构建其基因组文库,从中筛选到甘露聚糖酶基因TM1并测序分析,用BLAST分析表明,TM1的氨基酸序列与其他在GenBank发表的甘露聚糖酶的氨基酸序列的同源性均低于60%,故确定其为一... 详细信息

通过功能平板从土壤中筛选得到含甘露聚糖酶基因的耐碱菌株。构建其基因组文库,从中筛选到甘露聚糖酶基因TM1并测序分析,用BLAST分析表明,TM1的氨基酸序列与其他在GenBank发表的甘露聚糖酶的氨基酸序列的同源性均低于60%,故确定其为一个新的甘露聚糖酶基因(GenBank登录号为AY623903)。将此基因去除信号肽后的编码序列克隆到表达载体pHBM905C上,得到重组质粒pHBM1201。经SalⅠ酶切后分别转化毕赤酵母(Pichiapastoris)KM71、GS115、SMD1168,得到分泌表达的重组毕赤酵母。挑选相对表达量最高的重组毕赤酵母SMD1168-3在摇瓶中诱导产酶,对该酶的粗酶进行酶学性质分析表明,其最适反应温度为55℃,最适PH值为7.5,以魔芋粉为底物所测得的最高酶活为41.8U,半衰期为1h,在80℃保温5min其酶活由最初酶活的77%下降到11%,温度下降到55℃后活性可恢复到最初酶活的60%以上。

关键词：甘露聚糖酶,克隆,毕赤酵母,表达,酶活

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