检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2022年第3期17卷 308-313页

作者：陈素素吴家红程金芝赵久刚商正玲聂映牟荣贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学基础医学院免疫学教研室

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安... 详细信息

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安顺株雌蚊体内扩增获得34ku-1基因。利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASy)等对该蛋白进行生物信息学分析。将该基因构建到原核表达质粒pET-32a(+)中,转染大肠埃希菌BL21(DE3)后经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析表达结果。镍柱纯化34ku-1重组蛋白,采用Western blot验证纯化蛋白的免疫反应性。用纯化的34ku-1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫血清,采用间接ELISA法检测血清抗体效价,采用Western blot方法对抗体的特异性进行鉴定。收集雌蚊唾液,采用Western blot方法用制备的多克隆抗体检测蚊唾液34ku-1蛋白。结果成功克隆获得34ku-1基因,生物信息学分析该基因全长888 bp,编码295个氨基酸。编码蛋白的理论分子质量单位为33.6 ku,等电点为5.54。重组质粒pET-32a(+)-34ku-1经PCR、双酶切及测序验证构建正确。经IPTG诱导的BL21重组菌表达产物主要以包涵体形式存在。经亲和层析法获得高纯度的34ku-1重组蛋白,浓度为0.71 mg/mL。Western blot显示重组蛋白可被抗6-His tag抗体识别,制备的鼠抗34ku-1血清抗体效价为1∶625000,且特异性良好,用34ku-1多克隆抗体Western blot可检测到蚊虫唾液中的34ku-1蛋白。结论成功克隆并表达了白纹伊蚊34ku-1原核蛋白,制备了高效价、高特异性的鼠抗34ku-1多克隆抗体,应用该抗体可检测到雌蚊唾液中的34ku-1蛋白。

关键词：白纹伊蚊唾液腺 34ku-1重组蛋白原核表达多克隆抗体

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沙眼衣原体多表位疫苗的构建及其抗感染保护作用

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中南医学科学杂志 2023年第2期51卷 183-187页

作者：刘辉萍李舒怡陈合意陈超群南华大学衡阳医学院病原生物学研究所、医学免疫学教研室湖南衡阳421001

目的构建沙眼衣原体(Ct)多形态膜蛋白D(PmpD)与衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)多表位疫苗,并通过动物实验评价其抗感染保护作用。方法利用生物信息学分析PmpD和CPAF的二级结构、抗原性、T细胞表位和B细胞表位;构建基于PmpD和CPAF多表... 详细信息

目的构建沙眼衣原体(Ct)多形态膜蛋白D(PmpD)与衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)多表位疫苗,并通过动物实验评价其抗感染保护作用。方法利用生物信息学分析PmpD和CPAF的二级结构、抗原性、T细胞表位和B细胞表位;构建基于PmpD和CPAF多表位的重组蛋白RPC、原核表达、纯化RPC蛋白。免疫雌性BABL/c小鼠,ELISA检测小鼠血清IgG、IgG2a/IgG1及脾细胞上清细胞因子水平,CCK-8检测脾细胞增殖;Cm攻毒后,检测生殖道Cm载量以评估多表位融合疫苗RPC的抗感染保护作用。结果成功构建多表位融合蛋白RPC。与PBS组相比,RPC组IgG抗体水平、IgG2a/IgG1比值、脾细胞刺激指数、γ干扰素、白细胞介素-2水平均明显升高(P<0.05);攻毒后RPC组可加快清除小鼠生殖道衣原体。结论基于PmpD与CPAF的多表位融合蛋白RPC免疫小鼠,能诱导细胞免疫和体液免疫应答,有效降低衣原体载量,具有一定的抗感染保护作用。

关键词：沙眼衣原体生物信息学多表位疫苗抗感染保护

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长链非编码RNA异常表达对急性髓系白血病预后影响的meta分析

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国际医药卫生导报 2022年第20期28卷 2813-2821页

作者：林红丽卢晓庆李有杰孙允霄滨州医学院烟台附属医院儿科烟台264100 滨州医学院生物化学与分子生物学教研室烟台264003

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)异常表达对急性髓系白血病(AML)预后的影响。方法检索PubMed、Embase、Cochrane数据库截止2021年10月6日前发表的所有相关文献。结果最终纳入13项研究,共1591人。lncRNA异常表达与AML患者,尤其是与非-急... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)异常表达对急性髓系白血病(AML)预后的影响。方法检索PubMed、Embase、Cochrane数据库截止2021年10月6日前发表的所有相关文献。结果最终纳入13项研究,共1591人。lncRNA异常表达与AML患者,尤其是与非-急性早幼粒细胞白血病[AML(non-M3)]患者的总体生存率(OS)降低有关,并与无复发生存率(RFS)降低有关。亚组分析显示HOX转录反义基因间RNA(HOTAIR)和牛磺酸上调基因1(TUG1)的高表达与较差的OS相关。结论lncRNA的异常表达与AML患者不良预后显著相关,其异常表达是AML患者预后不良的危险因素,可以作为预测AML患者预后的生物标志物。

关键词：长链非编码RNA 急性髓系白血病预后 meta分析

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APOBEC3G对HBV复制的影响及转录组学分析

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蚌埠医学院学报 2024年第11期49卷 1411-1416页

作者：周未平刘光焱沈阳医学院病原生物学教研室辽宁沈阳110034 辽宁省环境污染与微生态重点实验室辽宁沈阳110034

目的:基于转录组测序和生物信息学分析对(APOBEC)亚家族(APOBEC3G A3G)参与抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的潜在分子机制及下游信号通路预测。方法:将A3G与HBV的表达质粒(A3G组)、GFP与HBV的表达质粒(HBV组)以及空载质粒(Vector组)分别转染... 详细信息

目的:基于转录组测序和生物信息学分析对(APOBEC)亚家族(APOBEC3G A3G)参与抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的潜在分子机制及下游信号通路预测。方法:将A3G与HBV的表达质粒(A3G组)、GFP与HBV的表达质粒(HBV组)以及空载质粒(Vector组)分别转染于Huh7细胞中,3 d后收集细胞并提取RNA进行转录组测序,检测样本中mRNA的表达情况。采用DESeq软件对基因的表达水平进行差异分析筛选出差异表达基因,通过对差异基因进行GO富集分析和KEGG通路富集分析,确定差异基因行使的主要功能和参与的通路,同时依据STRING数据库进行蛋白质-蛋白质互相作用(PPI)分析,构建蛋白互作网络,以寻找目的基因之间的相互关系及关键节点蛋白。结果:A3G组和HBV组相比,筛选出21个显著差异基因;GO富集分析显示的项目包括脂蛋白B mRNA编辑酶复合物的形成、EH结构域的结合、中胚层细胞命运规范的BMP信号传导途径等;KEGG通路富集分析显示可能与内吞作用和坏死相关;PPI网络发现了NOXA1、LSM10、RNF103-CHMP3等5个关键蛋白及其互作蛋白。HBV组和Vector组相比,筛选出42个显著差异基因;GO富集分析显示的项目包括离子通道活性、多种酶活性和膜成分等相关;KEGG通路富集分析显示与多种物质的代谢反应和p53信号传导等相关;PPI网络发现了UBD、CCND3、RHOD等15个关键蛋白及其互作蛋白。结论:通过转录组测序和生物信息学分析,探究A3G抑制HBV复制的潜在下游分子,丰富了A3G抑制HBV复制的机制研究。

关键词：乙型肝炎病毒载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白转录组测序生物信息学分析

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多房棘球绦虫钙网蛋白的原核表达及初步鉴定

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中国病原生物学杂志 2022年第6期17卷 654-659页

作者：陈路娟咸思奇闫艳徐志坚程喆于桂霞王彦海赵利美内蒙古科技大学包头医学院基础医学与法医学院病原生物学教研室内蒙古包头014060 厦门大学生命科学学院寄生动物研究室

目的原核表达多房棘球绦虫钙网蛋白EmCRT,并对其免疫学功能进行初步鉴定。方法以多房棘球绦虫囊cDNA为模板,PCR扩增目的基因,克隆至pGEX-4T-2载体,构建重组质粒pGEX-4T-2-EmCRT;PCR、酶切鉴定及测序正确后,转化至表达菌BL21(DE3),并用... 详细信息

目的原核表达多房棘球绦虫钙网蛋白EmCRT,并对其免疫学功能进行初步鉴定。方法以多房棘球绦虫囊cDNA为模板,PCR扩增目的基因,克隆至pGEX-4T-2载体,构建重组质粒pGEX-4T-2-EmCRT;PCR、酶切鉴定及测序正确后,转化至表达菌BL21(DE3),并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达;运用10%SDS-PAGE电泳以及Western blot分析鉴定表达的重组蛋白rEmCRT。结果成功构建了重组质粒pGEX-4T-2-EmCRT,转化表达菌BL21后,经IPTG诱导表达及纯化,获得了纯度较高的可溶性重组蛋白rEmCRT,相对分子质量约为72 ku(含表达载体序列);通过Stains all染色,表明rEmCRT具有Ca^(2+)结合能力;免疫学特性鉴定表明rEmCRT具有较好的抗原特异性。结论成功表达多房棘球绦虫钙网蛋白EmCRT,具有免疫反应性,可为包虫病诊断及其疫苗研发提供理论基础。

关键词：多房棘球绦虫钙网蛋白表达和鉴定抗原性

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抗生素对小鼠肺等多器官鼠衣原体感染及肠道细菌的影响

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中华结核和呼吸杂志 2025年第5期48卷 448-455页

作者：马璟玥朱翠明田畦张天援刘全忠钟光明刘原君天津医科大学总医院皮肤性病科天津性传播疾病研究所天津300052 南华大学衡阳医学院病原生物学研究所衡阳421001 湖南省妇幼保健院妇产科长沙410028 上海交通大学医学院上海市病毒研究院上海200025 美国德州大学圣安东尼奥健康医学中心微生物免疫教研室德克萨斯州TX78229

目的初步探索抗生素对小鼠肺等多器官鼠衣原体感染的变化、免疫反应及肠道细菌的影响。方法将C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为抗生素组和对照组,对照组给予饮用水,抗生素组给予灌胃2次并饮用含万古霉素和庆大霉素水溶液2周。两组小鼠... 详细信息

目的初步探索抗生素对小鼠肺等多器官鼠衣原体感染的变化、免疫反应及肠道细菌的影响。方法将C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为抗生素组和对照组,对照组给予饮用水,抗生素组给予灌胃2次并饮用含万古霉素和庆大霉素水溶液2周。两组小鼠均鼻内感染鼠衣原体,并持续监测其体重变化。在感染后的第10天,对小鼠实施安乐死,随后检测多个器官中的鼠衣原体载量,并对肺组织进行免疫荧光染色及病理损伤评分。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中鼠衣原体特异性IgG及其分型,流式细胞术分析脾脏细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、IL-5、IL-13水平。留取小鼠粪便样本qPCR检测肠道细菌组成。应用SPSS26.0软件进行数据统计,组间比较采用方差分析。结果鼻内感染鼠衣原体后两组小鼠体重从第2天开始下降,对照组下降迅速并于第6天开始恢复,抗生素组下降稍慢并于第8天开始恢复。抗生素组小鼠肺、心、肝、脾、肾中鼠衣原体载量高于对照组(均P<0.05),而下消化道(空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠)鼠衣原体载量低于对照组(均P<0.01)。肺组织免疫荧光染色抗生素组鼠衣原体数为(8.94±4.13)IFU/低倍镜视野,高于对照组的(3.73±1.49)IFU/低倍镜视野(F=7.06,P<0.05);炎症细胞浸润且病理损伤评分为(3.12±0.59)分,也高于对照组的(1.80±0.69)分(F=10.47,P<0.05)。抗生素组血清鼠衣原体特异性IgG抗体水平低于对照组(F=5.95,P<0.05),脾脏CD4^(+)和CD8^(+)T细胞的细胞因子TNF-α水平高于对照组(均P<0.05),而IL-13水平低于对照组(均P<0.05)。抗生素处理后小鼠肠道细菌中拟杆菌比例显著降低(F=97.57,P<0.01),而厚壁菌比例升高(F=154.51,P<0.01)。鼠衣原体感染后对照组拟杆菌、α-变形菌和产气荚膜梭菌比例降低(均P<0.05),阿克曼菌比例升高(F=9.58,P<0.01);抗生素组拟杆菌和厚壁菌比例降低(F=4.85,P<0.05;F=25.35,P<0.01),疣微菌和阿克曼菌比例升高(F=11.44、F=15.46,P<0.01)。结论抗生素导致小鼠肺等实质脏器鼠衣原体感染和肺组织病理损伤加重,血清IgG减少、脾脏TNF-α增加和IL-13减少,并引发肠道细菌组成变化。

关键词：抗生素肺炎鼠衣原体免疫反应肠道细菌

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结核分枝杆菌EsxV脂质体纳米颗粒亚单位疫苗的制备及免疫学特性

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生物工程学报 2023年第10期39卷 4085-4097页

作者：白鹭路延之宁唤唤康亚莉谢燕玲康健李雪崔若囡韦垠刘月芹柏银兰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032 延安大学生命科学学院陕西延安716000 西北大学生命科学学院陕西西安710069 宁夏医科大学基础医学院生理学和神经生物学系宁夏银川750001

本研究旨在制备脂质体纳米颗粒(lipid nanoparticles,LNP)为载体的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原EsxV亚单位疫苗,明确该疫苗经黏膜免疫诱导的免疫应答水平。采用薄膜分散法制备包裹蛋白EsxV和c-di-AMP的LNP(EsxV:C:... 详细信息

本研究旨在制备脂质体纳米颗粒(lipid nanoparticles,LNP)为载体的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原EsxV亚单位疫苗,明确该疫苗经黏膜免疫诱导的免疫应答水平。采用薄膜分散法制备包裹蛋白EsxV和c-di-AMP的LNP(EsxV:C:L),并对其包封率、LNP形态、粒径、表位电荷及多相分散指数进行了检测。EsxV:C:L滴鼻免疫BALB/c小鼠,检测免疫后血清和黏膜抗体、肺或脾细胞因子转录及分泌水平、肺T细胞亚群细胞比例。结果成功获得大小均一、呈球状、带负电的EsxV:C:L LNP亚单位疫苗。与EsxV:C相比,EsxV:C:L鼻黏膜接种可诱导小鼠呼吸道黏膜sIgA水平增加,脾细胞因子IL-2分泌水平升高,提高中央记忆T细和组织驻留T细胞的比例。综上,EsxV:C:L经黏膜免疫,可诱导更强的黏膜免疫和记忆性T细胞免疫应答,可能提供更好的抗Mtb感染的保护作用。

关键词：结核分枝杆菌 EsxV 环二腺苷酸脂质体纳米颗粒亚单位疫苗

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利用PiggyBac转座子技术构建NLRC5基因过表达BEAS-2B细胞系及其功能研究

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空军军医大学学报 2025年第4期46卷 526-532页

作者：孙丹妮刘欣悦饶子凡杜岚张湘琳刘梓谕侯诗源沈星刘蓉蓉吴兴安空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院学员五大队陕西西安710032

目的利用PiggyBac转座系统构建稳定表达NLRC5的BEAS-2B细胞系,为后续针对病毒抗原提呈功能的研究提供有力的工具。方法根据NLRC5基因信息扩增目的基因蛋白编码序列,构建目的基因NLRC5的转座子质粒,将辅助质粒和转座子质粒共转染至BEAS-2... 详细信息

目的利用PiggyBac转座系统构建稳定表达NLRC5的BEAS-2B细胞系,为后续针对病毒抗原提呈功能的研究提供有力的工具。方法根据NLRC5基因信息扩增目的基因蛋白编码序列,构建目的基因NLRC5的转座子质粒,将辅助质粒和转座子质粒共转染至BEAS-2B细胞。嘌呤霉素筛选稳定转导的细胞后进行单克隆化,最后对获取的单克隆细胞在分子水平上进行过表达验证。结果成功构建一株NLRC5过表达的BEAS-2B细胞,且该细胞系可维持正常细胞活性与增殖能力。结论通过PiggyBac转座子技术实现了NLRC5的过表达,进而提高了MHC-Ⅰ分子基因的表达。通过对该基因的过表达从而研究NLRC5对MHC-Ⅰ抗原肽提呈途径的调控机制,为理解抗病毒免疫的复杂机制以及开发新的治疗策略提供有力支持。

关键词： NLRC5 PiggyBac转座子基因过表达稳定转染细胞株

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不同因素对黄芩苷镁治疗非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型影响研究

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现代医药卫生 2023年第3期39卷 361-367页

作者：管秀璐沈诗嫄张琳宋靖宇刘金霞常金花毛晓霞刘翠哲承德医学院河北省中药研究与开发重点实验室河北承德067000 承德医学院病原生物学教研室河北承德067000

目的探讨在不同造模时间、给药时间和剂量下黄芩苷镁对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠模型的治疗效果。方法采用高脂饮食诱导法建立NASH大鼠模型,将Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为6组,分别为空白组(16只)、模型组(16只)、黄芩苷镁1~4组... 详细信息

目的探讨在不同造模时间、给药时间和剂量下黄芩苷镁对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠模型的治疗效果。方法采用高脂饮食诱导法建立NASH大鼠模型,将Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为6组,分别为空白组(16只)、模型组(16只)、黄芩苷镁1~4组(剂量分别为25、50、100、150 mg/kg,各8只)。尾静脉注射给药,观察造模时间、给药时间和剂量对大鼠的体重相关指标(体重、肝湿重、肝指数)、血清生化指标及病理结果的影响。结果造模6周时,模型组大鼠体重相关指标均较空白组增加,差异均有统计学意义(P<0.05),2组大鼠血清生化各指标均无显著变化,差异均无统计学意义(P>0.05);造模8周时,与空白组比较,模型组大鼠体重、肝湿重、肝指数、血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LCL-C)水平及非酒精性脂肪性肝病活动度积分(NAS)显著增加,高密度脂蛋白(HDL-C)水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。给药1周时,黄芩苷镁1~4组体重相关指标均无显著变化,差异均无统计学意义(P>0.05),与模型组比较,黄芩苷镁3组大鼠血清ALT、LDL-C水平下降,差异有统计学意义(P<0.05),AST、TC、TG水平下降,HDL-C水平升高,但差异均无统计学意义(P>0.05);黄芩苷镁4组大鼠血清TG和LDL-C水平降低,HDL-C水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。给药2周时,与模型组比较,黄芩苷镁2组大鼠肝湿重及ALT、AST、TC、TG水平及NAS均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05),黄芩苷镁3组、黄芩苷镁4组大鼠体重、肝湿重、肝指数,以及ALT、AST、TC、TG、LDL-C水平及NAS明显降低,HDL-C水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论造模8周比6周更接近于NASH模型,150 mg/kg的黄芩苷镁给药2周对NASH大鼠的治疗效果较好,且其作用具有剂量依赖性。

关键词：黄芩苷镁非酒精性脂肪性肝炎高脂饮食剂量造模时间

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幽门螺杆菌6S RNA敲除菌株构建及对细胞毒性的影响

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中国人兽共患病学报 2023年第1期39卷 44-50页

作者：崔古贞管玉祝刘芳王鑫鑫吴道艳洪伟向松张峥嵘张玉典陈峥宏贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵阳550025 贵州省病原生物学特色重点实验室贵阳550025 地方病与少数民族病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,研究6S RNA敲除后对细菌生长及细胞毒力的影响。方法以幽门螺杆菌6S RNA基因为靶基因,构建6S RNA敲除质粒;利用电转法转化幽门螺杆菌,利用同源重组机制构建6S RNA敲除菌株;分析6S RNA敲除对细菌... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,研究6S RNA敲除后对细菌生长及细胞毒力的影响。方法以幽门螺杆菌6S RNA基因为靶基因,构建6S RNA敲除质粒;利用电转法转化幽门螺杆菌,利用同源重组机制构建6S RNA敲除菌株;分析6S RNA敲除对细菌生长及细胞毒性的影响。结果成功构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,与野生型菌株相比,敲除菌株的生长方式显著改变,对GES-1胃粘膜上皮细胞的毒性显著降低。结论6S RNA具有调控幽门螺杆菌生长及毒力相关因子的功能,为幽门螺杆菌生物学功能及转录调控机制研究奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌 6S RNA 转录调控基因敲除

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