检索结果-内蒙古大学图书馆

四川大学学报（医学版） 2008年第3期39卷 481-484,510页

作者：韩平罗静聪智伟谭波李秀群杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室

目的探讨工程化尿路上皮结构的构建方法。方法机械分离获取膀胱黏膜层,胰蛋白酶消化法获取膀胱移行上皮细胞,用DKSFM培养基体外培养扩增。以自制的猪小肠黏膜下层(SIS)为支架材料,将培养的膀胱移行上皮细胞接种到支架材料表面,观察细胞... 详细信息

目的探讨工程化尿路上皮结构的构建方法。方法机械分离获取膀胱黏膜层,胰蛋白酶消化法获取膀胱移行上皮细胞,用DKSFM培养基体外培养扩增。以自制的猪小肠黏膜下层(SIS)为支架材料,将培养的膀胱移行上皮细胞接种到支架材料表面,观察细胞在支架材料表面的生长增殖情况;并将体外构建的细胞-支架材料复合物植入裸鼠背部皮下,不同时间点取材进行组织学和免疫组织化学检测。结果膀胱移行上皮细胞在SIS表面能够黏附、生长和增殖。体外复合培养9d后,膀胱移行上皮细胞铺满SIS表面,呈单层细胞结构。裸鼠体内植入4周和8周后,SIS上种植的膀胱移行上皮细胞形成多层结构,抗细胞角蛋白免疫组化染色,细胞胞浆成棕黄色阳性反应。结论采用组织工程技术能够在体内外初步构建尿路上皮结构,为进一步组织工程泌尿道修复重建实验奠定了基础。

关键词：组织工程尿路上皮移行上皮细胞小肠黏膜下层

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表面改性及微沟槽技术对肌腱细胞生长与取向的影响

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生物医学工程学杂志 2008年第2期25卷 382-387页

作者：陈曦秦廷武王治杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室成都610041

利用光刻技术制作微格式模板,微接触转印法制作微沟槽PDMS表面,微流道技术裱衬不同浓度的Ⅰ型胶原于微沟槽表面上,比较其对细胞生长形态及生长取向的影响。对照组为未裱衬胶原的微沟槽、平板PDMS及裱衬胶原的平板PDMS。种植SD大鼠肌腱... 详细信息

利用光刻技术制作微格式模板,微接触转印法制作微沟槽PDMS表面,微流道技术裱衬不同浓度的Ⅰ型胶原于微沟槽表面上,比较其对细胞生长形态及生长取向的影响。对照组为未裱衬胶原的微沟槽、平板PDMS及裱衬胶原的平板PDMS。种植SD大鼠肌腱细胞在材料上,于37℃孵箱中培养48 h。采用MTT比色法测定不同浓度的胶原对肌腱细胞的生长增殖的影响。通过倒置相差显微镜、扫描电镜、荧光显微镜观察细胞生长的形态,取向情况。结果显示:Ⅰ型胶原修饰的PDMS微沟槽材料比未裱衬胶原的对照组具有明显的促细胞生长的作用(P<0.05),并且随着胶原浓度的增加作用越明显。有微沟槽表面的材料对细胞的生长形态和生长取向有明显影响。提示,Ⅰ型胶原修饰的微沟槽材料不仅能规范肌腱细胞的生长取向,而且能促进肌腱细胞的生长,从而得到理想的细胞生长形态,该结果对工程化肌腱的构建有重要的指导意义。

关键词：表面改性微沟槽肌腱细胞形态取向

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脊索细胞促进髓核软骨样细胞增殖及表型维持

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中国修复重建外科杂志 2008年第8期22卷 939-943页

作者：赵献峰刘浩丰干均邓力李秀群梁涛四川大学华西医院骨科生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室

目的分离纯化兔髓核中的细胞成分,观察脊索细胞形态及对软骨样细胞增殖及细胞表型的影响。方法6只4周龄新西兰兔胸腰段脊柱,获取髓核,0.2%Ⅱ型胶原酶消化法及不连续密度梯度法分离纯化脊索细胞及软骨样细胞。实验分为单纯软骨样细胞培养... 详细信息

目的分离纯化兔髓核中的细胞成分,观察脊索细胞形态及对软骨样细胞增殖及细胞表型的影响。方法6只4周龄新西兰兔胸腰段脊柱,获取髓核,0.2%Ⅱ型胶原酶消化法及不连续密度梯度法分离纯化脊索细胞及软骨样细胞。实验分为单纯软骨样细胞培养组(A组)及脊索细胞、软骨样细胞(1∶1)共培养组(B组)。倒置相差显微镜观察两组细胞生长情况,测定两组原代及传代细胞成活率,MTT法测定两组第2代细胞增殖曲线,并以甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学染色鉴定两组原代及传代细胞蛋白多糖及Ⅱ型胶原的表达。结果成功分离、纯化脊索细胞和软骨样细胞。细胞培养观察,原代脊索细胞直径10～15μm,胞浆内富含大小不等的囊泡;原代软骨样细胞直径4～6μm,胞浆内无囊泡。各代细胞成活率A组为89.0%～95.3%,B组为91.3%～96.3%,各代细胞成活率两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组细胞培养3～4d进入对数生长期,B组细胞培养2d后进入对数生长期;培养4d后,B组细胞增殖能力高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。A组3代以内细胞表达蛋白多糖及Ⅱ型胶原,B组细胞表型维持至5代。结论脊索细胞能促进髓核软骨样细胞的增殖及表型维持;脊索细胞可能在防止椎间盘退变中具有重要意义。

关键词：椎间盘髓核脊索细胞软骨样细胞细胞培养

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hBMSCs诱导分化类髓核细胞

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中国修复重建外科杂志 2008年第12期22卷 1470-1475页

作者：丰干钧刘浩陈晓禾李秀群赵献峰梁涛四川大学华西医院骨科成都610041 生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室

目的探讨人椎间盘细胞和关节软骨细胞的分子表型差异,分析hBMSCs经TGF-β3和BMP-7联合诱导后能否分化为软骨细胞和髓核细胞。方法取9例自愿捐赠者髂嵴骨髓20～40mL分离培养hBMSCs。取第4代hBMSCs行三维微球培养。根据基础培养基中加入... 详细信息

目的探讨人椎间盘细胞和关节软骨细胞的分子表型差异,分析hBMSCs经TGF-β3和BMP-7联合诱导后能否分化为软骨细胞和髓核细胞。方法取9例自愿捐赠者髂嵴骨髓20～40mL分离培养hBMSCs。取第4代hBMSCs行三维微球培养。根据基础培养基中加入的生长因子不同,实验分成4组,分别为加入10ng/mLTGF-β3组(A组)、200ng/mLBMP-7组(B组)、同时加入两种生长因子组(C组)以及空白对照组(D组)。于培养后21d,行组织学及免疫组织化学观察;于培养后4、21d进行PCR检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅹ型胶原、蛋白多糖和SOX9基因的表达。结果培养后21d,HE染色示A组和C组细胞呈软骨细胞样形态特征,甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色Ⅱ型胶原表达呈阳性。B组和D组细胞形态无明显改变,PCR检测示培养后21d,A、C组SOX9、蛋白多糖、Ⅰ型胶原及Ⅱ型胶原表达较4d时明显增加(P<0.05)。B、D组Ⅰ型胶原表达较4d时明显增加(P<0.05),SOX9、蛋白多糖及Ⅱ型胶原较4d时无明显变化(P>0.05)。其中仅A组Ⅹ型胶原表达呈阳性。结论TGF-β3和BMP-7联合应用能促进hBMSCs分化更接近于椎间盘细胞,可能为椎间盘组织工程提供种子细胞。

关键词：椎间盘组织工程hBMSCs 诱导分化 BMP-7 TGF-β3 软骨形成

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食管黏膜上皮细胞与SIS复合培养及生物学特性研究

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中国修复重建外科杂志 2008年第6期22卷 742-746页

作者：谭波魏人前杨志明李秀群韩平智伟解慧琪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的探讨体外快速培养犬食管黏膜上皮细胞(esophageal mucosa epithelial cells,EMECs)及其与SIS体外复合培养的方法,为组织工程食管研究提供实验依据。方法取2～5周龄幼犬5只,无菌获取其食管组织,采用混合酶消化法,分离培养EMECs,于倒... 详细信息

目的探讨体外快速培养犬食管黏膜上皮细胞(esophageal mucosa epithelial cells,EMECs)及其与SIS体外复合培养的方法,为组织工程食管研究提供实验依据。方法取2～5周龄幼犬5只,无菌获取其食管组织,采用混合酶消化法,分离培养EMECs,于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,取第2代细胞培养1～5 d绘制生长曲线并进行细胞表面标志物细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK-19)检测。取第2代EMECs与SIS复合培养4、8 d,行形态学、组织学及扫描电镜观察。结果倒置相差显微镜下EMSCs呈典型铺路石样。CK-19免疫组织化学染色可见细胞胞浆呈阳性染色。MTT法测定第2代细胞在传代培养2 d生长达高峰。EMECs与SIS复合培养4 d,细胞呈多角形,细胞间连接紧密,呈铺路石样排列;SIS表面形成1～2层细胞组成的复层上皮样结构。8 d时,细胞密度增大,SIS表面形成2～3层细胞组成的复层上皮样结构;扫描电镜见细胞在材料上已大量增长,呈层状排列。结论采用混合酶消化法,用含6%FBS的DKSFM培养犬EMECs,方法简便,适合推广应用。SIS与EMECs有良好的相容性,可作为构建组织工程食管的理想支架材料。

关键词：食管黏膜上皮细胞 SIS 复合培养生物学特性犬

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低氧对胎盘基蜕膜间充质干细胞增殖、凋亡和血管内皮细胞生长因子表达的影响

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生理学报 2008年第6期60卷 783-789页

作者：黄永灿陈晓禾王佳李秀群解慧琪唐莉邓力四川大学华西药学院四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室

本文旨在探讨生理低氧和无血清培养条件下人胎盘基蜕膜间充质干细胞(placental decidua basalis-mesenchymal stem cells,PDB-MSCs)的生物学特征和细胞因子的表达情况。采用密度梯度离心法培养获得PDB-MSCs,利用MTT法、流式细胞术检测PD... 详细信息

本文旨在探讨生理低氧和无血清培养条件下人胎盘基蜕膜间充质干细胞(placental decidua basalis-mesenchymal stem cells,PDB-MSCs)的生物学特征和细胞因子的表达情况。采用密度梯度离心法培养获得PDB-MSCs,利用MTT法、流式细胞术检测PDB-MSCs在不同氧浓度(20%O2和1%O2)、有无血清(10%FBS和0%FBS)条件下各个时间点(6h、12h、24h、48h、72h、96h)的增殖和凋亡情况,并采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测无血清条件下各个时间点细胞上清液中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量。结果显示,在特定的时间内低氧可以促进PDB-MSCs增殖(P<0.01,n=3),而血清对PDB-MSCs增殖的影响与氧浓度关系密切;同时,在本实验条件下,低氧、无血清分别或联合培养不会导致PDB-MSCs凋亡(P>0.05,n=3);在无血清条件下,24h时低氧组PDB-MSCs表达较高水平的VEGF。以上结果提示,PDB-MSCs可能成为缺血相关组织工程产品种子细胞的一个新来源。

关键词：基蜕膜间充质干细胞低氧增殖凋亡血管内皮细胞生长因子

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组织工程的发展与未来

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中国修复重建外科杂志 2008年第2期22卷 228-229页

作者：杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

“组织工程”概念提出至今已有20年了。回顾20年发展进程，在种子细胞、三维支架材料、生物活性因子、组织构建、体内植入等方面已取得很大进展，并有一些临床应用的实例证明组织工程的研究路线是正确的，展现了良好的产业化前景。

关键词：组织工程种子细胞支架材料生物活性因子细胞治疗

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角蛋白在血管生成中的作用实验研究

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中国修复重建外科杂志 2008年第10期22卷 1246-1250页

作者：徐永张素珍钟振华解慧琪苏自奋魏于全四川大学生命科学学院成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.肿瘤生物治疗研究室四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室

目的研究角蛋白17(keratin17,K-17)对血管内皮细胞迁移、增殖和管样结构形成的影响,了解K-17在血管生成过程中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)于含10%FBS的DMEM培养液培养过夜,采用脂质... 详细信息

目的研究角蛋白17(keratin17,K-17)对血管内皮细胞迁移、增殖和管样结构形成的影响,了解K-17在血管生成过程中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)于含10%FBS的DMEM培养液培养过夜,采用脂质体转染法向HUVEC中分别加入K-17-小分子干扰RNA(small interfer-ingRNA,siRNA)-转染试剂(Lipofectamine2000)混合液(实验组)、siRNA-转染试剂混合液(阴性对照组),使siRNA终浓度为50nmol/L;对照组加相同体积仅含载体(脂质体Lipofectamine2000)的培养基,采用RT-PCR和Westernblot法检测K-17-siRNA沉默效果。于培养后36h采用细胞计数法检测细胞增殖能力;培养后30h,分别采用24孔板Millicell小室检测细胞迁移能力以及胶原纤维凝胶实验法检测细胞分化成管能力。另取未经siRNA处理的HUVEC分别在含10%FBS的培养基(A组)、含2%FBS的培养基(B组)和含2%FBS及10ng/mLbFGF的培养基(C组)中培养24h,检测HUVECK-17的表达。结果实验组K-17-siRNA作用于HUVEC30h后,RT-PCR检测示细胞内K-17mRNA的表达为0.09±0.01,较阴性对照组0.35±0.07和对照组0.34±0.06均降低了约74%(P<0.01);Westernblot检测示实验组K-17-siRNA作用于HUVEC30h后,细胞内K-17蛋白表达为0.19±0.01,较阴性对照组0.52±0.01和对照组0.55±0.02分别降低了63%和65%(P<0.01);阴性对照组和对照组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。K-17-siRNA作用HUVEC36h后,实验组细胞增殖能力与阴性对照组和对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。HUVEC转染K-17-siRNA30h后,实验组HUVEC24h穿过Millicell小室上室膜进入下室的细胞数为(3719.0±319.0)个,明显低于阴性对照组(7356.3±795.7)个和对照组(7437.5±212.0)个,差异有统计学意义(P<0.01),阴性对照组和对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。实验组、阴性对照组和对照组HUVEC24h分化形成的管数分别为(1.1±0.5)、(3.6±0.5)和(3.2±0.6)管/视野,实验组与阴性对照组、对照组间比较差异均有统计学意义(P<0.01),阴性对照组和对照组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。A、B、C组HUVECK-17的表达分别为0.25±0.02、0.08±0.01和0.72±0.03,3组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论K-17对HUVEC增殖无影响,但增强其迁移能力,有利于血管生成。

关键词：角蛋白17 血管生成人脐静脉内皮细胞迁移增殖

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人成纤维细胞稳定转染的方法比较

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四川大学学报（医学版） 2008年第4期39卷 654-657页

作者：芦小燕解慧琪李莉智伟陈晓禾邓力四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室成都610041 四川大学华西药学院药理系

目的采用3种不同的方法将质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞,从中寻找最佳的稳定转染的方法。方法分别采用阳离子聚合物转染、阳离子脂质体转染和电转染方法,将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞... 详细信息

目的采用3种不同的方法将质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞,从中寻找最佳的稳定转染的方法。方法分别采用阳离子聚合物转染、阳离子脂质体转染和电转染方法,将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞。24h后,荧光显微镜下观察EGFP表达,流式细胞术测定瞬时转染率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞。结果电转染有最高的瞬时转染效率(56.8%),稳定转染得到的阳性克隆最多,且从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间也最少(约20d);用阳离子聚合物瞬时转染率低(1.7%),稳定筛选同样可以得到阳性大克隆,但是数量很少且从细胞筛选到扩增至阳性大克隆所用的时间也最多(约30d);阳离子脂质体转染效果居中,瞬时转染率为39.9%,从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间约25d。结论用电转染法将质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞是最佳的转染方法。

关键词：人成纤维细胞稳定转染电转染阳离子聚合物转染阳离子脂质体转染

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胎盘和骨髓来源的间充质干细胞生物学特性比较

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第29期12卷 5731-5734页

作者：卢遥解慧琪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室四川省成都市610041

学术背景:间充质干细胞主要来源于骨髓,但人骨髓中的间充质干细胞含量极低。近年来,已有具备干/祖细胞特征的间充质细胞自外周血、密质骨、软骨、肌肉等组织中分离出来,这些组织的一个共同特征就是来源于胚胎发育期的中胚层,提示胎盘中... 详细信息

学术背景:间充质干细胞主要来源于骨髓,但人骨髓中的间充质干细胞含量极低。近年来,已有具备干/祖细胞特征的间充质细胞自外周血、密质骨、软骨、肌肉等组织中分离出来,这些组织的一个共同特征就是来源于胚胎发育期的中胚层,提示胎盘中存在间充质干细胞成分。目的:介绍胎盘和骨髓来源的间充质干细胞的分离方法及应用前景,对其生物学特性进行比较。检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库1996-01/2008-2的相关文献,检索词"placenta-derived mes-enchymal stem cells,bonemarrow-derived mesenchymal stemcell,Biological characteristics,Tissue engineering",并限定文章语言种类为English。同时计算机检索万方数据库1999-01/2008-2的相关文献,检索词"胎盘来源的间充质干细胞,骨髓来源的间充质干细胞,生物学特性,组织工程",并限定文章语言种类为中文。共检索到137篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①文章所述内容应与胎盘来源的间充质干细胞或骨髓来源的间充质干细胞研究以及两者生物学特性比较密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:①重复性研究。②Meta分析。文献评价:文献来源主要是对胎盘和骨髓来源的间充质干细胞研究进展做汇总分析。所选用的31篇文献中,8篇为综述,其余均为临床或基础实验研究。资料综合:①目前对于胎盘间充质干细胞的体外分离以Percoll连续密度梯度分离纯化法最为经典,采用此法从组织浸出液中分离获得的间充质干细胞大小均匀,纯度较高。骨髓间充质干细胞的分离方法主要包括贴壁法、密度梯度离心法、细胞表面分子标记分选法。②胎盘间充质干细胞在形态上与骨髓间充质干细胞类似,均为典型的成纤维细胞样,并呈漩涡状生长。胎盘间充质干细胞表达类似于骨髓间充质干细胞的表面标志,如间质细胞标志SH2/CD105、SH3;主要组织相容性复合物HLA-ABC;整合蛋白家族CD49e、CD29;透明质酸盐受体CD44等,不表达造血细胞表面标志CD34、CD45和内皮细胞表面标志vWF、Flk21等,表明胎盘来源的间充质干细胞免疫原性很低,这在移植中具有重要意义。结论:胎盘来源的间充质干细胞具有与骨髓来源的间充质干细胞相似的形态与表面标志,也具有多向分化潜能,并且胎盘取材方便安全,不涉及伦理问题,将成为组织工程干细胞的新来源。

关键词：骨髓间充质干细胞胎盘间充质干细胞生物学特性组织工程综述文献

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