检索结果-内蒙古大学图书馆

植物保护 2011年第1期37卷 19-23页

作者：肖冬来邓慧颖谢荔岩吴祖建谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002

以灰飞虱（Laodlphax striatellus Fallen）mRNA为起始模板，利用Gateway技术构建了灰飞虱酵母双杂交cDNA文库。经过检测表明：构建的初级cDNA文库的库容量为1．85×10 7cfu；扩增文库滴度为7．7×10 8cfu／mL，重组率约为97％... 详细信息

以灰飞虱（Laodlphax striatellus Fallen）mRNA为起始模板，利用Gateway技术构建了灰飞虱酵母双杂交cDNA文库。经过检测表明：构建的初级cDNA文库的库容量为1．85×10 7cfu；扩增文库滴度为7．7×10 8cfu／mL，重组率约为97％；扩增文库插入片段主要集中在1000-1500bp之间。随机挑取10个克隆，经测序与GenBank数据库比对结果显示7个克隆具有同源序列，其中L2、L9为已公布的灰飞虱序列。灰飞虱酵母双杂交cDNA文库的构建为克隆全长目的基因及研究灰飞虱与其传播的水稻病毒间的互作奠定了基础。

关键词：灰飞虱酵母双杂交 Gateway技术 cDNA文库

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水稻条纹病毒NS3蛋白与水稻3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)间的互作

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中国水稻科学 2010年第5期24卷 493-496页

作者：肖冬来贾东升吴建国杜振国谢荔岩吴祖建谢联辉福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室福建福州350002

水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)NS3蛋白为病毒的沉默抑制子。利用酵母双杂交技术,从水稻cDNA文库中筛选出一个与RSV NS3蛋白互作的基因片段。推测该基因的功能是编码水稻3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydroge... 详细信息

水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)NS3蛋白为病毒的沉默抑制子。利用酵母双杂交技术,从水稻cDNA文库中筛选出一个与RSV NS3蛋白互作的基因片段。推测该基因的功能是编码水稻3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)。双分子荧光互补实验进一步验证了NS3与GAPDH存在互作。瞬时表达实验表明,GAPDH与GFP基因融合蛋白在本氏烟表皮细胞细胞质中大量积累。此外,讨论了GAPDH蛋白在RSV侵染水稻过程中可能的功能。

关键词：水稻条纹病毒蛋白功能互作酵母双杂交双分子荧光互补

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木尔坦棉花曲叶病毒“C4 ORF”编码蛋白对病毒致病性的影响

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中国农业科学 2021年第10期54卷 2095-2104页

作者：郑信诗尚鹏祥李景远丁新伦吴祖建张洁福建农林大学植物保护学院植物病毒研究所/闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室/福建省植物病毒学重点实验室

【目的】通过分析发现木尔坦棉花曲叶病毒(cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)C4开放阅读框(open reading frame,ORF)附近可编码3个不同大小的蛋白,而NCBI数据库登录的CLCuMuV各个分离物编码的C4蛋白大小也不尽相同,本研究试图通... 详细信息

【目的】通过分析发现木尔坦棉花曲叶病毒(cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)C4开放阅读框(open reading frame,ORF)附近可编码3个不同大小的蛋白,而NCBI数据库登录的CLCuMuV各个分离物编码的C4蛋白大小也不尽相同,本研究试图通过分析该3个假定的"C4 ORF"编码蛋白对病毒致病性的影响,以明确CLCuMuV C4蛋白ORF的确切定位。【方法】根据双生病毒编码蛋白的保守性,在CLCuMuV C4 ORF附近查找到3个大小不等的ORF,分别标记为C4-L(567 nt)、C4-M(546 nt)和C4-S(303 nt)。利用同源重组的方法将该3个ORF分别构建到PVX异源表达载体,通过农杆菌介导的植物接种法,分析PVX介导的3个蛋白在本氏烟表达对本氏烟症状的影响。利用同源重组的方法构建CLCuMuV野生型及C4-L或C4-S缺失突变型的侵染性克隆,同样通过农杆菌介导的植物接种法,分别与其伴随DNA-β分子的侵染性克隆接种本氏烟,分析C4-L或C4-S缺失对CLCuMuV致病性的影响,并利用Southern blot和Western blot分别对接种烟草的病毒基因组的积累量和病毒C4蛋白的表达量进行分析。同时利用Gateway系统载体对C4-L和C4-S蛋白在本氏烟叶片表皮细胞中的亚细胞定位进行分析。【结果】PVX异源表达载体接种本氏烟,结果发现PVX-C4-L和PVX-C4-S接种的本氏烟叶片卷曲、叶柄伸长,并且PVX-C4-S症状更重,而PVX-C4-M接种的本氏烟症状较轻或基本无症状,Western blot试验也在PVX-C4-L和PVX-C4-S接种组检测到了C4蛋白的表达,说明C4-S ORF编码的蛋白对PVX异源病毒的致病性影响最大。侵染性克隆接种本氏烟,结果发现野生型(CLCuMuV)和C4-L突变型(CLCuMuV-ΔL)接种的本氏烟叶片皱缩增生、叶柄和茎秆扭曲,而C4-S突变型(CLCuMuV-ΔS)和对照组(Mock)接种的本氏烟未显示任何症状,并且前两者的植株高度明显矮于后两者,同时Southern blot试验在CLCuMuV和CLCuMuV-ΔL接种的本氏烟中均检测到大量病毒基因组的积累,而Western blot试验也在其中检测到C4蛋白的表达,说明C4-S ORF编码的蛋白在CLCuMuV诱导寄主产生症状过程中起关键作用。亚细胞定位发现YFP-C4-L主要定位在本氏烟叶片表皮细胞的叶绿体,YFP-C4-S则定位在细胞膜或细胞质周边,并有点状聚集体结构。【结论】C4-S ORF编码的蛋白对CLCuMuV的侵染必不可少,而C4-L和C4-M ORF编码的蛋白对CLCuMuV的侵染不是必需。

关键词：木尔坦棉花曲叶病毒 C4开放阅读框致病性

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应用Real-Time RT-PCR鉴定2个水稻品种(品系)对水稻条纹病毒的抗性差异

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华南农业大学学报 2008年第3期29卷 25-28页

作者：杨金广方振兴张孟倩徐飞王文婷谢荔岩林奇英吴祖建谢联辉福建省植物病毒学重点实验室福建农林大学植物病毒研究所福建福州350002

应用Real-time RT-PCR检测了水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)在2种水稻品种(品系)武育粳3号和KT95-418的悬浮细胞内复制变化和相对含量的差异,结合传统生物学接种试验,确定了这2个品种(品系)对RSV抗性的差异.结果表明,RSV在武育粳... 详细信息

应用Real-time RT-PCR检测了水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)在2种水稻品种(品系)武育粳3号和KT95-418的悬浮细胞内复制变化和相对含量的差异,结合传统生物学接种试验,确定了这2个品种(品系)对RSV抗性的差异.结果表明,RSV在武育粳3号的悬浮细胞内24 h达到复制高峰,病毒含量为侵染初期的7.46倍.而在KT95-418的悬浮细胞内,RSV达到复制高峰需要36 h,病毒含量为侵染初期的4.51倍.利用病毒生物学接种的方法,武育粳3号发病率达91.7%,而KT95-418仅为36.0%.由此可见,KT95-418较武育粳3号对RSV具有较高的抗病性.因此,Real-time RT-PCR方法与传统生物学接种试验方法相比,具有更高的准确性和灵敏性,可以作为传统品种抗病性鉴定的验证手段.

关键词： Real-Time RT-PCR 水稻水稻条纹病毒品种抗性悬浮细胞

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水稻矮缩病毒非结构蛋白Pns6和外壳蛋白P8多克隆抗体的制备及其应用

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福建农林大学学报（自然科学版） 2016年第1期45卷 42-47页

作者：宛柏杰林文武吴锦鸿陈晓敏吴祖建张洁福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福建福州350002

利用RT-PCR的方法从感染水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)的水稻中克隆该病毒的运动蛋白基因S6和外壳蛋白基因S8,通过Gateway系统进行原核表达,获得表达载体p DEST17-Pns6和p DEST17-P8,将表达载体转化*** Rosetta,经IPTG诱导表达后... 详细信息

利用RT-PCR的方法从感染水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)的水稻中克隆该病毒的运动蛋白基因S6和外壳蛋白基因S8,通过Gateway系统进行原核表达,获得表达载体p DEST17-Pns6和p DEST17-P8,将表达载体转化*** Rosetta,经IPTG诱导表达后获得分子质量约为59和46 ku含HIS标签的融合蛋白.以诱导表达的目的蛋白为抗原,免疫注射新西兰大白兔制备多克隆抗体.结果表明,Western blot检测制备的Pns6和P8抗体可特异性检测RDV,间接ELISA测定Pns6和P8抗体的效价均约为6 400倍,并建立了可靠、灵敏、特异的Dot-blot ELISA方法检测RDV.以上研究表明,RDV运动蛋白和外壳蛋白抗体均可应用于该病毒在田间的大规模调查和检测.

关键词：水稻矮缩病毒非结构蛋白Pns6 外壳蛋白P8 多克隆抗体 Dot-blot ELISA

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水稻条纹病毒与水稻互作中的生长素调控

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农业生物技术学报 2008年第4期16卷 628-634页

作者：杨金广王文婷丁新伦郭利娟方振兴谢荔岩林奇英吴祖建谢联辉福建省植物病毒学重点实验室福建农林大学植物病毒研究所

利用real-time RT-PCR和高效液相色谱技术对水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)侵染水稻(Oryza sativa ***)植株和水稻悬浮细胞内的生长素合成酶基因YUCAA1表达量和内源生长素含量的变化分别进行了测定。结果表明,在细胞水平,RSV侵染... 详细信息

利用real-time RT-PCR和高效液相色谱技术对水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)侵染水稻(Oryza sativa ***)植株和水稻悬浮细胞内的生长素合成酶基因YUCAA1表达量和内源生长素含量的变化分别进行了测定。结果表明,在细胞水平,RSV侵染后的16～64 h内能显著引起YUCAA1 mRNA表达量的上调和内源生长素含量的升高。与同一生长阶段的健康水稻相比,水稻植株接种后4～8 d内也可导致YUCAA1 mRNA表达量的上调和内源生长素含量的上升,而在接种后12和16 d时,病株内的YUCAA1 mRNA的表达量和内源生长素的含量均下降。这表明在RSV侵染水稻后的发病过程中,RSV能够调控寄主植物内源生长素的合成。同时,利用KPSC缓冲液处理病株来消除其内源生长素,能够引起RSV CP基因表达上调近2.9倍,另外用30μmol/L IAA溶液处理病株可使其体内的RSV CP基因表达下调45%,表明水稻体内生长素含量的变化能够影响RSV在寄主体内的复制。

关键词：生长素水稻水稻条纹病毒实时定量RT-PCR

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植物病原物的群体遗传学

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遗传 2012年第2期34卷 157-166页

作者：祝雯詹家绥福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福州350002 福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室福州350002

品种单一化、生产密集型和一年多茬的现代农业特点导致病原物呈现出进化速度加快、致病力增强及流行风险增大趋势。深入研究病原物群体遗传学对认识病害的流行、有效选育和使用抗性品种乃至控制病害具有重要意义。文章阐述了植物病原物... 详细信息

品种单一化、生产密集型和一年多茬的现代农业特点导致病原物呈现出进化速度加快、致病力增强及流行风险增大趋势。深入研究病原物群体遗传学对认识病害的流行、有效选育和使用抗性品种乃至控制病害具有重要意义。文章阐述了植物病原物群体遗传学的研究目标和内容、突变、基因迁移、基因重组、随机遗传漂变和自然选择5大遗传机制在植物病原物进化过程中的作用,以及目前植物病原物群体遗传学研究的现状。

关键词：植物病原物群体遗传进化机制

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我国水稻条纹病毒致病性的分化与差异分析

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福建农林大学学报（自然科学版） 2009年第6期38卷 561-566页

作者：程文金邓慧颖谢荔岩林奇英吴祖建谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室福建福州350002

以云南灰飞虱(Laodelphaxstriatellus)为介体昆虫,以4个水稻品种为寄主,通过人工接种对采自云南、江苏、河南、山东、安徽等省的水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)23个分离物进行传毒试验.致病性评价结果表明,23个分离物可划分为5个... 详细信息

以云南灰飞虱(Laodelphaxstriatellus)为介体昆虫,以4个水稻品种为寄主,通过人工接种对采自云南、江苏、河南、山东、安徽等省的水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)23个分离物进行传毒试验.致病性评价结果表明,23个分离物可划分为5个等级,即强致病型、次强致病型、中致病型、弱致病型、极弱致病型.致病性分化表现在地理差异、毒株差异及水稻品种差异三方面.不同分离物在寄主发病率、发病时间、症状表现以及对灰飞虱传毒效率等方面都存在差异.

关键词：水稻条纹病毒致病性灰飞虱

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利用免疫共沉淀技术研究RSV CP、SP和NSvc4蛋白的互作

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农业生物技术学报 2008年第5期16卷 891-897页

作者：鹿连明秦梅玲王萍兰汉红牛晓庆谢荔岩吴祖建谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

为了检测水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)外壳蛋白(coatprotein,CP)、病害特异蛋白(disease-special protein,SP)和可能的运动蛋白NSvc4自身和两两之间的互作关系,首先通过PCR扩增获得了分别融合有HA或c-Myc标签的RSVCP、SP和NSvc4基因,并将其插入到植物表达载体pEGAD或pKYLX71:35S2中。重组质粒转化根癌农杆菌(Agrobacterium tume-faciens)EHA105后,将含有不同重组质粒的根癌农杆菌菌液混合后注射烟草(Nicotiana benthamiana)叶片。提取烟草中瞬时表达的蛋白,以HA或c-Myc抗体进行免疫共沉淀试验,最后免疫混合物通过c-Myc抗体或HA抗体进行Westernblot检测,确定蛋白的互作情况。结果表明,RSVCP蛋白自身能够发生互作,而CP与SP,CP与NSvc4,SP与SP,SP与NSvc4,及NSvc4与NSvc4蛋白之间均未有检测到互作现象。

关键词：水稻条纹病毒免疫共沉淀蛋白互作

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水稻蛋白激酶OsCIPK5的亚细胞定位分析及RNAi转基因水稻的获得

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福建农业学报 2017年第4期32卷 353-358页

作者：熊桂红刘小娟杨靓吴祖建福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒学重点实验室福建福州350002

在植物生长发育中,CIPKs(CBL-interacting protein kinases)在胁迫信号转导和增强抗逆途径中发挥着重要作用,而OsCIPK5的具体功能还未知。为了研究OsCIPK5的功能,本研究从日本晴水稻中成功克隆了OsCIPK5基因。用生物信息学方法对其编码... 详细信息

在植物生长发育中,CIPKs(CBL-interacting protein kinases)在胁迫信号转导和增强抗逆途径中发挥着重要作用,而OsCIPK5的具体功能还未知。为了研究OsCIPK5的功能,本研究从日本晴水稻中成功克隆了OsCIPK5基因。用生物信息学方法对其编码的蛋白进行分析,结果表明OsCIPK5含有2个功能区即激酶活性区和NAF区,OsCIPK5与5种植物的CIPK5同源性较高,而与短花药野生稻CIPK5的同源性最高(94%),亲缘关系最近。利用植物生理学方法对水稻进行低钾处理,结果表明水稻根中OsCIPK5受低钾诱导表达,而叶片中OsCIPK5表达量没有变化;同时构建了OsCIPK5与黄色荧光蛋白基因融合的植物瞬时表达载体,共聚焦显微镜观察显示,OsCIPK5编码的蛋白主要定位在细胞核、细胞膜,还以颗粒状结构不规则分布在细胞质中。进一步构建了OsCIPK5的RNAi载体,通过水稻遗传转化体系获得26株阳性转基因水稻。荧光定量PCR(Real-time qPCR)分析表明,T1代转基因水稻中OsCIPK5的表达量与野生型相比显著降低。OsCIPK5的生物信息学分析、植物生理学分析、亚细胞定位以及RNAi转基因水稻的获得为研究OsCIPK5的功能奠定了基础。

关键词：蛋白激酶OsCIPK5 生物信息学分析表达模式亚细胞定位 RNAi

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