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中华神经医学杂志 2024年第11期23卷 1179-1187页

作者：赵慧婷赵俊龙李三中秦鸿雁慕明涛延安大学基础医学院延安716000 空军军医大学基础医学院医学遗传与生物发育教研室西安710000 空军军医大学第一附属医院神经外科西安710000

创伤性颅脑损伤(TBI)可引起一系列继发性改变,如神经元功能障碍、血脑屏障破坏、神经血管的继发性损伤、神经炎症等,甚至会有神经退行性疾病的发生。近几年研究发现小胶质细胞可通过其M1表型、M2表型的改变来调控TBI后长期的炎症和组织... 详细信息

创伤性颅脑损伤(TBI)可引起一系列继发性改变,如神经元功能障碍、血脑屏障破坏、神经血管的继发性损伤、神经炎症等,甚至会有神经退行性疾病的发生。近几年研究发现小胶质细胞可通过其M1表型、M2表型的改变来调控TBI后长期的炎症和组织修复过程,影响TBI的进展。本文围绕TBI后小胶质细胞的作用、调控机制及相关治疗方面的研究进展进行综述,以期为TBI的治疗提供理论依据。

关键词：创伤性颅脑损伤小胶质细胞治疗炎症

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基于单细胞转录组测序探讨小鼠脉络膜新生血管内皮细胞的病理特征

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中华实验眼科杂志 2023年第3期41卷 241-252页

作者：温立势张泉严宏祥李曼红苏静波常天芳王雨生孙嘉星空军军医大学西京医院眼科、全军眼科研究所西安710032 空军军医大学基础医学院学员六大队西安710032 空军军医大学基础医学院神经生物学教研室西安710032

目的基于单细胞转录组测序(scRNA-seq)探讨小鼠脉络膜新生血管(CNV)中内皮细胞(EC)的分子表达与病理特征。方法取6只6~8周龄C57BL/6小鼠按照随机数字表法随机分为2个组,每组3只,处死后摘取双眼眼球,分别采用剪碎脉络膜巩膜复合体法和刮... 详细信息

目的基于单细胞转录组测序(scRNA-seq)探讨小鼠脉络膜新生血管(CNV)中内皮细胞(EC)的分子表达与病理特征。方法取6只6~8周龄C57BL/6小鼠按照随机数字表法随机分为2个组,每组3只,处死后摘取双眼眼球,分别采用剪碎脉络膜巩膜复合体法和刮取脉络膜法分离脉络膜组织,采用胰蛋白酶/Ⅰ型胶原酶37℃连续消化制得单细胞悬液,流式细胞术检测细胞活率及EC比例,确定单细胞悬液制备方法。选取6只小鼠随机分为正常对照组和CNV组,每组3只,其中CNV组小鼠建立激光诱导的CNV模型;于造模后7 d制备单细胞悬液,采用10xGenomics进行单细胞分离并构建测序文库,Illumina Novaseq6000进行高通量测序,获得基因表达矩阵;根据文献报道并参考Cellmarker数据库定义细胞亚群;选取EC亚群进行拟时序分析,生成各个细胞分化状态(State)的基因表达矩阵,筛选CNV-EC并初步分析表达特征。另选取6只小鼠建立CNV模型,于造模后7 d取小鼠眼球制备冰冻切片,免疫荧光染色检测EC标志物Pecam1与线粒体外膜蛋白Tomm20、mt-Co1和毛细血管标志物Kdr、Plvap的共定位及面积占比情况,并统计血管直径。结果剪碎复合体和刮取脉络膜所制备单细胞悬液的细胞活率分别为99.4%和99.1%,符合测序要求;流式细胞术检测EC占比约为1.58%。scRNA-seq结果显示,正常对照组和CNV组小鼠脉络膜均包含13个细胞亚群,与正常对照组比较,CNV组视锥/视杆细胞、EC和造血系细胞比例增加,视网膜色素上皮(RPE)细胞和施万细胞比例相应减少。在所有细胞亚群中,EC比例为18.40%。EC拟时序分析显示,脉络膜EC可分为4个State,CNV组中位于State 2状态的EC比例为29.1%,较正常对照组的9.5%明显升高;差异基因分析显示,State 2 EC中线粒体相关基因mt-Nd4和mt-Atp6等表达上调而毛细血管基因Kdr和Esm1等表达显著下调。免疫荧光染色结果显示,CNV区域内Tomm20和mt-Co1在Pecam1阳性EC内表达分布面积比例分别为(19.50±4.68)%和(4.64±2.82)%,明显高于正常区域的(3.00±2.09)%和(0.18±0.34)%,差异均有统计学意义(t=7.88、3.84,均P<0.01)。CNV区域内Kdr和Plvap在Pecam1阳性EC内表达面积比例分别为(1.50±0.29)%和(0.79±0.97)%,明显低于正常区域的(31.30±5.44)%和(10.43±2.28)%,差异均有统计学意义(t=13.40、9.48,均P<0.01)。CNV区域血管直径为(5.52±1.85)μm,明显大于正常区域的(4.21±1.84)μm,差异有统计学意义(t=9.57,P<0.001)。结论CNV发生时,脉络膜组织中EC比例增加,CNV-EC呈现线粒体代谢活化和毛细血管特性丢失的病理特征,提示EC线粒体活化可能在CNV生成中具有一定的作用。

关键词：脉络膜新生血管内皮细胞线粒体毛细血管单细胞测序

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甲基转移酶样蛋白3(METTL3)通过NF-κB信号通路促进小鼠巨噬细胞活化和炎症反应

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细胞与分子免疫学杂志 2019年第8期35卷 727-732页

作者：张天择陈旭王微席文锦霍毅杨安钢王涛空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032 解放军第四医院青海西宁810014 空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室陕西西安710032

目的研究参与腺嘌呤第6位氮原子上的甲基化修饰(m^6A)的甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在巨噬细胞活化中的作用。方法体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,并以1μg/mL脂多糖(LPS)刺激0、2、4、6 h,检测METTL3的表达情况。设计合成的针对小鼠METTL... 详细信息

目的研究参与腺嘌呤第6位氮原子上的甲基化修饰(m^6A)的甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在巨噬细胞活化中的作用。方法体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,并以1μg/mL脂多糖(LPS)刺激0、2、4、6 h,检测METTL3的表达情况。设计合成的针对小鼠METTL3的小干扰RNA(siRNA)敲低METTL3的表达,通过实时定量PCR和Western blot法检测干扰效率;利用siRNA下调METTL3表达48 h后,以1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞,采用实时定量PCR检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12、IL-1β的mRNA水平,Western blot法检测核因子κB(NF-κB)信号通路中p65和磷酸化p65蛋白水平。结果LPS刺激后RAW264.7细胞METTL3的表达上调,设计合成的METTL3 siRNA能有效敲低METTL3的水平。敲低METTL3后,巨噬细胞LPS刺激诱导表达的IL-6、IL-12、TNF-α和IL-1β显著降低,同时伴有NF-κВ信号通路p65蛋白的磷酸化水平降低。结论METTL3通过激活NF-κВ信号通路促进LPS刺激的巨噬细胞活化和炎症反应。

关键词： m^6A甲基转移酶甲基转移酶样蛋白3(METTL3) 巨噬细胞 NF-κВ信号通路

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利用CRISPR/Cas13d抑制肠道病毒71型感染

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生命科学研究 2025年第1期29卷 56-61页

作者：张晓晓古天乐吴朔徐溪王高文遆新宇张艳西京医院呼吸与危重症医学科中国陕西西安710000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室中国陕西西安710032

肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染会导致手足口病和危及生命的神经系统疾病,目前尚无针对EV71的抗病毒药物可用。为了利用成簇规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/C... 详细信息

肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染会导致手足口病和危及生命的神经系统疾病,目前尚无针对EV71的抗病毒药物可用。为了利用成簇规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein,CRISPR/Cas)系统抑制EV71感染,本研究选择CRISPR/Cas13d系统,构建U6启动子驱动的向导RNA(guide RNA,g RNA)、EF-1α启动子驱动的Cas13d和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达载体;将不同g RNA质粒分别转染人胚肾细胞293T(HEK293T)后感染EV71,通过实时荧光定量PCR检测EV71 VP1 m RNA的含量,采用Western-blot检测EV71 VP1蛋白的表达量,利用流式细胞术检测GFP蛋白的含量,运用CCK-8法检测细胞活力。结果显示,在5个靶向EV71基因组不同位置的g RNA质粒中,有4个可以显著抑制EV71 VP1 m RNA和蛋白质表达,其中1个质粒具有较强的旁切活性,但是所有的质粒均没有表现出显著的细胞毒性。实验结果初步表明,可以利用CRISPR/Cas13d系统抑制EV71感染,但是需要选择合适的g RNA,以保障抗病毒作用和避免细胞毒性。

关键词：肠道病毒71型(EV71) 成簇规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白13d(CRISPR/Cas13d) 抗病毒活性细胞毒性

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成红细胞岛在红系发育及相关疾病中的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第10期40卷 936-941页

作者：邹琳茹白健魏调霞冯蕾秦鸿雁空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院学员三大队陕西西安710032

成红细胞岛(EBI)是成红细胞发育成熟过程中形成的特殊结构,由成红细胞围绕一个中央巨噬细胞组成。其中巨噬细胞在介导EBI形成以及成红细胞增殖分化、脱核成熟过程中发挥重要的调控作用。在应激状态下,二者之间黏附分子表达异常将导致多... 详细信息

成红细胞岛(EBI)是成红细胞发育成熟过程中形成的特殊结构,由成红细胞围绕一个中央巨噬细胞组成。其中巨噬细胞在介导EBI形成以及成红细胞增殖分化、脱核成熟过程中发挥重要的调控作用。在应激状态下,二者之间黏附分子表达异常将导致多种红系疾病的发生。提示靶向EBI中的中央巨噬细胞有望成为治疗红系疾病的新策略。文章归纳总结了EBI的结构功能、巨噬细胞和成红细胞相互作用以及EBI内中央巨噬细胞在红系疾病中的作用和治疗潜力,为临床治疗红系疾病提供新思路。

关键词：成红细胞岛红系发生中央巨噬细胞黏附分子红系疾病综述

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"赋能增效"的分子生物学实验教学改革探索

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第6期37卷 569-574页

作者：张晓晏贤春张瑞贾林涛赵晶空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

作为生命科学的前沿学科,分子生物学理论、技术发展迅速,而分子生物学实验课程作为理论与实践的关键衔接,在学生思考和创新能力的培养中发挥着重要作用.通过对教学过程的反馈和思考,分析出当前实验教学中存在的痛点问题.我们围绕"... 详细信息

作为生命科学的前沿学科,分子生物学理论、技术发展迅速,而分子生物学实验课程作为理论与实践的关键衔接,在学生思考和创新能力的培养中发挥着重要作用.通过对教学过程的反馈和思考,分析出当前实验教学中存在的痛点问题.我们围绕"赋能增效"的改革方向,瞄准提高学生动手、思考能力,提升育人实效的优化目标,进行了教学内容的设置优化、课堂时序的组织重构等一系列改革尝试.教学方案的改革显著增加了学生对知识的理解与掌握,赋予学生更强的思考、学习能力的同时,增强了实验课程的教学效果,提升了学生的科学素养.

关键词：分子生物学实验教学教学改革科学素养

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汉滩病毒糖蛋白Gn的T细胞表位预测及其跨种属验证

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解放军医学杂志 2023年第9期48卷 1000-1010页

作者：孙报增秦聪聪张俊琦王永凯张文标刘瑞波白天原张志辉张宇丝杨琨姜东伯空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院生物武器损伤防治药物重点实验室陕西西安710032 空军医科大学唐都医院风湿科陕西西安710032 空军军医大学基础医学院微生物学教研室陕西西安710032

目的筛选、鉴定并验证汉滩病毒(HTNV)包膜糖蛋白-N末端(Gn)上的免疫反应性表位。方法通过UniProt数据库获取HTNV 76-118株Gn蛋白序列。采用IEDB、SMMPMBEC、NetMHCpan 4.1、SYFPEITHI、Rankpep算法预测表位亲和力,VaxiJen v2.0分析免疫... 详细信息

目的筛选、鉴定并验证汉滩病毒(HTNV)包膜糖蛋白-N末端(Gn)上的免疫反应性表位。方法通过UniProt数据库获取HTNV 76-118株Gn蛋白序列。采用IEDB、SMMPMBEC、NetMHCpan 4.1、SYFPEITHI、Rankpep算法预测表位亲和力,VaxiJen v2.0分析免疫原性,Blastp工具计算保守性,HPEPDOCK和EpiDOCK模拟pMHC对接,TBtools进行双向聚类分析,酶联免疫斑点(ELISpot)实验评价表位细胞免疫反应性。结果通过UniProt数据库获得了HTNV 76-118株Gn蛋白序列(PRO_0000036816)。整合5种亲和力算法,在小鼠H-2亚型中获得了61个优势表位,在人主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅰ亚型中得到234个优势表位,MHC-Ⅱ亚型中得到212个优势表位;VaxiJen筛选分别获得H-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ亚型强免疫原性优势表位23、110、42个;进一步采用Blastp筛选获得高亲和力、强免疫原性、种间种内保守的MHC-Ⅰ类限制性表位3个,MHC-Ⅱ类限制性表位81个。双向分层聚类分析揭示了小鼠H2-d、H2-b和部分人类白细胞分化抗原(HLA)在提呈HTNV Gn表位上的相似性。ELISpot验证了5个表位具有较强的诱导脾细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)的能力。结论预测并验证了HTNV Gn上的细胞免疫反应性表位,证实在MHC提呈中病毒抗原存在跨基因、种属、物种的交叉免疫反应性,为预防肾综合征出血热(HFRS)提供了新思路。

关键词：汉滩病毒糖蛋白表位计算机预测免疫反应性

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IL-6/IL-6受体轴及其靶向抑制剂研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2019年第6期35卷 569-574页

作者：姜少杰梁仕睿张雪芹杨向民国家分子医学转化科学中心空军军医大学基础医学院细胞生物学教研室空军军医大学基础医学院学员队陕西西安710032

白细胞介素6(IL-6)是一种多效性细胞因子,参与免疫调节、炎症和肿瘤发生等多种生物功能,当与跨膜型IL-6受体(mIL-6R)结合时,通过经典信号通路发挥抗炎作用,而与可溶型IL-6R(sIL-6R)结合时,通过反式信号通路发挥促炎作用。因此,IL-6/IL-6... 详细信息

白细胞介素6(IL-6)是一种多效性细胞因子,参与免疫调节、炎症和肿瘤发生等多种生物功能,当与跨膜型IL-6受体(mIL-6R)结合时,通过经典信号通路发挥抗炎作用,而与可溶型IL-6R(sIL-6R)结合时,通过反式信号通路发挥促炎作用。因此,IL-6/IL-6R轴的失调可导致多种炎性疾病的发生和发展。近年来以IL-6/IL-6R轴为靶点的治疗方式已被证明能成功改善包括类风湿性关节炎、巨细胞动脉炎等部分自身免疫性疾病。IL-6还可通过调节肿瘤微环境、肿瘤干细胞等方式,参与肿瘤的发生、发展和转移,因此靶向阻断IL-6信号转导的策略可能为多种恶性肿瘤提供一种潜在的治疗策略。我们主要总结了IL-6/IL-6R轴及其靶向制剂的相关研究进展。

关键词：白细胞介素6(IL-6) 白细胞介素6受体(IL-6R) 细胞因子生物靶向抑制剂综述

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以多发性硬化症为示例谈“免疫学+X”教学

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第8期37卷 763-766页

作者：张坤王亚周庄然高方武胜昔空军军医大学基础医学院神经生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

随着现代医学技术的发展和医学模式的转变,医学学科间交叉融合成为现代医学发展的迫切需求。免疫学作为现代医学的重要支撑学科和桥梁学科,以临床实际问题为导向,促进免疫学与其他医学学科交叉融合发展,培养新时代创新型医科人才,对实... 详细信息

随着现代医学技术的发展和医学模式的转变,医学学科间交叉融合成为现代医学发展的迫切需求。免疫学作为现代医学的重要支撑学科和桥梁学科,以临床实际问题为导向,促进免疫学与其他医学学科交叉融合发展,培养新时代创新型医科人才,对实现医学领域前沿的重大突破具有重要意义。在医学本科生基础课程教学实践中,免疫学知识与多个课程内容都有交叉,我们结合神经生物学课程中的神经免疫疾病机制教学内容,以多发性硬化症为示例,探索免疫学与神经科学交叉思维培养的教学方式,希望为"免疫学+X"教学及促进医学交叉复合型人才的培养提供新的思路。

关键词：多发性硬化症 “免疫学+X”教学交叉思维医学教育

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小鼠脊髓损伤急性期不同来源巨噬细胞活化和功能比较分析

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神经解剖学杂志 2021年第3期37卷 265-273页

作者：李鹏辉梁世倩胡昳旸秦鸿雁王哲空军军医大学西京医院骨科西安710032 空军军医大学基础医学院医学遗传学与发育生物学教研室西安710032

目的:研究小鼠脊髓损伤(SCI)急性期损伤区巨噬细胞表型和功能异质性。方法:将6~8周C57BL/6J雄鼠随机分为正常(normal)组和脊髓损伤(SCI)组,SCI组利用改造的Dumont系结镊建立标准脊髓钳夹损伤模型。在SCI急性期(1、3和7 d),利用流式细胞... 详细信息

目的:研究小鼠脊髓损伤(SCI)急性期损伤区巨噬细胞表型和功能异质性。方法:将6~8周C57BL/6J雄鼠随机分为正常(normal)组和脊髓损伤(SCI)组,SCI组利用改造的Dumont系结镊建立标准脊髓钳夹损伤模型。在SCI急性期(1、3和7 d),利用流式细胞术检测脊髓损伤区中免疫细胞亚群的比例变化;培养原代小胶质细胞(MG)和骨髓来源巨噬细胞(BMDM),利用流式细胞术比较其增殖和吞噬功能差异;利用real time RT-PCR比较其免疫应答差异。结果:在小鼠SCI急性期,脊髓损伤区周围中性粒细胞比例短暂升高,损伤后第3 d恢复至正常水平;高表达CX3CR1的MG和高表达Ly6C的BMDM比例在损伤第1 d大量增加,在第3 d时达到峰值,之后在第7 d时呈现下降的趋势;在体外实验中,原代培养的MG比BMDM具有更强的增殖、吞噬能力;然而,在LPS 100 ng/ml和IFN-γ20 ng/ml细胞因子刺激下,BMDM比MG分泌较多的促炎作用的分子:iNOS、TNF-α和IL-1β;在IL-420 ng/ml细胞因子的作用下,BMDM比MG分泌较少的抗炎作用分子Arg1、Mcr1和YM1。结论:在小鼠SCI急性期,脊髓损伤区中存在两种来源不同的巨噬细胞,即中枢MG和外周招募而来的BMDM,并且MG增加的速度和数量显著快于和多于BMDM。体外实验中,发现MG比BMDM具有更强的增殖、吞噬能力;在相同炎性细胞因子的刺激下,MG分泌更多的抗炎细胞因子和较少的促炎细胞因子。

关键词：脊髓损伤异质性组织定居小胶质细胞骨髓来源巨噬细胞小鼠

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