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第一军医大学学报 2001年第12期21卷 888-889,F002页

作者：侯云霞罗深秋冀群升第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广东广州510515

目的研究磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)在人胚组织中的表达情况。方法收集人胚组织(包括软骨、软骨膜、骨骼肌)并行石蜡包埋及切片,采用免疫细胞化学ABC染色法观察人胚组织细胞中PLC-γ1的表达情况。结果PLC-γ1在这几种细胞中均有较强的表达,... 详细信息

目的研究磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)在人胚组织中的表达情况。方法收集人胚组织(包括软骨、软骨膜、骨骼肌)并行石蜡包埋及切片,采用免疫细胞化学ABC染色法观察人胚组织细胞中PLC-γ1的表达情况。结果PLC-γ1在这几种细胞中均有较强的表达,主要位于胞质中。结论PLC-γ1相关的细胞内信号传递途径对于人早期胚胎细胞的发育、增殖具有重要的生物学意义。

关键词：磷脂酶C-γ1 胚胎组织免疫细胞化学

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人腺苷酸环化酶激活多肽cDNA克隆和序列分析

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中国生物化学与分子生物学报 1998年第3期14卷 248-253页

作者：余焱林刘飞鹏第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室

以人睾丸组织总ＲＮＡ为材料，用ＲＴ－ＰＣＲ方法合成了人腺苷酸环化酶激活多肽（ＡＣＡＰ）编码区（５３０ｂｐ）和全长ｃＤＮＡ（１９３０ｂｐ）片段．并分别将这些ｃＤＮＡ片段克隆入ｐＵＣ１８载体的ＳｍａⅠ限制性内切酶位点．对... 详细信息

以人睾丸组织总ＲＮＡ为材料，用ＲＴ－ＰＣＲ方法合成了人腺苷酸环化酶激活多肽（ＡＣＡＰ）编码区（５３０ｂｐ）和全长ｃＤＮＡ（１９３０ｂｐ）片段．并分别将这些ｃＤＮＡ片段克隆入ｐＵＣ１８载体的ＳｍａⅠ限制性内切酶位点．对重组质粒分别采用直接ＤＮＡ双链末端终止法和在核酸外切酶Ⅲ和核酸酶Ｓ１作用下连续缺失ＤＮＡ后，相继克隆，构成一系列连续缺失的缺失体的方法，测定了全部核苷酸顺序．结果表明：ＡＣＡＰ编码区的ｃＤＮＡ顺序与已报道的有１２处碱基的改变，其中１１处碱基顺序的改变不引起编码的氨基酸变化，只有第３８５位的Ｔ→Ａ后，才引起其编码的氨基酸由Ｓｅｒ→Ｔｈｒ，但由于Ｓｅｒ和Ｔｈｒ的理化性质极其相似，这一变化可能并不导致蛋白质的生物活性的变化．这些改变可能是由于种族、群体或个体的差异．

关键词：腺苷酸环化酶激活多肽 PCR DNA重组序列分析

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一种用FRAP测定细胞间隙连接介导通讯的方法

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中国细胞生物学学报 1997年第4期19卷 191-193+2-197页

作者：莫永炎罗深秋鲍永耀张薇黄辉侯云霞第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广州 510515 第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室第一军医大学中心实验室广州 51051

本文探讨了利用荧光漂白恢复技术(FRAP)测定体外培养小鼠大脑皮层神经胶质细胞间隙连接通讯的方法。经细胞培养、荧光染色、荧光激发、荧光漂白、激光扫描及计算机分析等处理,结果各所选神经胶质细胞内荧光均得到不同程度的恢复,即经扫... 详细信息

本文探讨了利用荧光漂白恢复技术(FRAP)测定体外培养小鼠大脑皮层神经胶质细胞间隙连接通讯的方法。经细胞培养、荧光染色、荧光激发、荧光漂白、激光扫描及计算机分析等处理,结果各所选神经胶质细胞内荧光均得到不同程度的恢复,即经扫描15.3分钟后,1—5号细胞内荧光相对强度分别上升了14％、28％、43％、17.5%、12.5％,三次平均上升了18.57±10.06％,荧光恢复速率平均为1.223±0.785％/min(n=14)。表明该方法可用来测定细胞间隙连接通讯。

关键词：荧光漂白恢复技术间隙连接通讯神经胶质细胞

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对曾育21三体综合征患儿者行胚胎种植前遗传学诊断获妊娠1例

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第一军医大学学报 2002年第3期22卷 269-271页

作者：罗琛邢福祺罗深秋第一军医大学南方医院生殖中心广东广州510515 第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广东广州510515

目的在体外受精-胚胎移植过程中,对高危夫妇进行胚胎种植前遗传学诊断以避免21三体综合征患儿的出生.方法常规激素替代治疗,对患者夫妇行胞母细胞质内单精子注射(ICSI),正常受精培养到第3天,对6～10细胞期胚胎活检1个细胞,利用荧光原位... 详细信息

目的在体外受精-胚胎移植过程中,对高危夫妇进行胚胎种植前遗传学诊断以避免21三体综合征患儿的出生.方法常规激素替代治疗,对患者夫妇行胞母细胞质内单精子注射(ICSI),正常受精培养到第3天,对6～10细胞期胚胎活检1个细胞,利用荧光原位杂交技术(FISH)进行胚胎种植前遗传学诊断(PGD),挑选染色体数目正常的胚胎移植入患者子宫.结果共对8个胚胎进行PGD,7个有诊断结果者中6个为正常胚胎、1个为21三体胚胎.挑选3个胚胎移植,获得妊娠并产下一健康男婴.结论应用FISH对染色体数目异常的遗传疾病,如21三体综合征,进行胚胎种植前遗传学诊断是切实可行的.

关键词： 21三体综合征胚胎种植前遗传学诊断荧光原位杂交技术儿童 PGD

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一个少见的β地中海贫血突变家系

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中华医学遗传学杂志 2003年第6期20卷 468-470页

作者：李文军老雄武贾世奇梁凤爱莫秋华马建英徐湘民第一军医大学医学遗传学教研室广州510515 广东省四会市妇幼保健医院

目的　鉴定中国人中 1个少见的 β地中海贫血 (β-地贫 )家系成员的基因转录突变 (- 90C→ T)。　方法　表型分析采用常规的红细胞指数和血红蛋白电泳分析技术 ;反向点杂交技术用于检测中国人 18种已知类型的β-地贫突变 ;β珠蛋白基因... 详细信息

目的　鉴定中国人中 1个少见的 β地中海贫血 (β-地贫 )家系成员的基因转录突变 (- 90C→ T)。　方法　表型分析采用常规的红细胞指数和血红蛋白电泳分析技术 ;反向点杂交技术用于检测中国人 18种已知类型的β-地贫突变 ;β珠蛋白基因全长 DNA测序技术用于确定样品的基因突变及其基因型 ;RT- PCR半定量法分析该突变对 β-珠蛋白基因转录水平的影响。　结果　家系分析发现 :先证者、先证者之兄和其母亲为有典型 β-地贫特征的个体 ,反向点杂交筛查未发现已知的 β-地贫突变 ,DNA直接测序分析发现该家系的这 3个成员均携带有 1种中国人中未见报道的 β地贫等位基因—— β-珠蛋白基因启动子区近侧 CACCC盒中 - 90位的 C→ T转录突变。RT- PCR分析显示该突变引起β-珠蛋白基因转录水平下降 (突变 :2 .2 33± 0 .0 1vs正常 :3.779± 1.19;95 % CI:3.0 6 0 ,4 .4 99) ,与其他类型的β-地贫杂合子β-基因的表达水平相当 (2 .110± 0 .5 3,95 % CI:1.732 ,2 .4 88)。　结论　 - 90位的 C→ T转录突变是中国人中未见报道的稀少类型的 β-地贫转录突变。

关键词： β地中海贫血基因突变家系 β-珠蛋白基因基因转录

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磷酸脂酶C-γ1在人早期胚胎组织细胞中表达的免疫细胞化学研究

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中国组织化学与细胞化学杂志 2000年第4期9卷 376-378页

作者：侯云霞罗深秋冀群升第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广州510515

采用免疫细胞化学方法探讨了磷酸脂酶 C-γ1(PL C-γ1)在人早期胚胎组织细胞中的表达 ,发现在胚胎龄为 5 2 -76天的多种细胞中均有表达 ,以软骨、软骨膜及肌组织反应最强。结果提示 ,PL C-γ1相关的细胞内信号传递途径对于人早期胚胎细... 详细信息

采用免疫细胞化学方法探讨了磷酸脂酶 C-γ1(PL C-γ1)在人早期胚胎组织细胞中的表达 ,发现在胚胎龄为 5 2 -76天的多种细胞中均有表达 ,以软骨、软骨膜及肌组织反应最强。结果提示 ,PL C-γ1相关的细胞内信号传递途径对于人早期胚胎细胞的发育、增殖具有重要的生物学意义。

关键词：磷酸脂酶C-γ1 人胚胎组织免疫细胞化学表达

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温度对细胞膜流动性影响的研究进展

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第一军医大学学报 2000年第3期20卷 287-288,S11页

作者：杨翠兰罗深秋第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广东广州510515

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应用温度梯度凝胶电泳分析非缺失型〆-地中海贫血突变

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中华医学遗传学杂志 2001年第1期18卷 51-55页

作者：赵永忠徐湘民杨阳第一军医大学细胞生物学和医学遗传学教研室广州510515 附属南方医院肿瘤科实验室

目的　建立用于非缺失型 α-地中海贫血 (α-地贫 )突变筛查的温度梯度凝胶电泳(temperature gradientgel electrophoresis,TGGE)技术。方法　以不同基因型人基因组 DNA为模板 ,选择性扩增全长 α2 -珠蛋白基因 ,继以巢式 PCR扩增突变... 详细信息

目的　建立用于非缺失型 α-地中海贫血 (α-地贫 )突变筛查的温度梯度凝胶电泳(temperature gradientgel electrophoresis,TGGE)技术。方法　以不同基因型人基因组 DNA为模板 ,选择性扩增全长 α2 -珠蛋白基因 ,继以巢式 PCR扩增突变热点区域 ,然后建立并优化 TGGE参数。在此基础上 ,筛查表型阳性的 15例非缺失型 α-地贫疑诊样品 ,阳性样品经 DNA序列测定确认突变。结果　建立了分析5 43bp PCR片段和 α2珠蛋白基因全长 10 85 bp片段的 TGGE技术 ,可检测出中国人群中常见的两种 α-地贫点突变 :Hb Constant Spring(Hb CS)和 Hb Quong Sze(Hb QS)及 Hb Westmeadα2 CD12 2 CAC→ CAG(His→ Gln)。15例样品中 ,10例为 Hb CS,2例为 Hb QS,2例为 Hb Westmead,1例为新的与 Hb H病相关的突变 α2 CD31AGG→ AAG(Arg→ L ys)。结论　所建立的 PCR- TGGE技术可用于非缺失型 α-地贫点突变和

关键词：温度梯度凝胶电泳 α-地中海贫血 α-珠蛋白基因

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应用短串联重复序列快速诊断21三体

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中华医学遗传学杂志 2004年第5期21卷 466-469页

作者：杨琳琳欧阳鸿徐湘民广东省妇幼保健院新生儿科广州医学院附属广东省妇儿医院广州510010 第一军医大学分校生化教研室第一军医大学医学遗传学教研室

目的　采用聚合酶链反应 -单链构象多态性技术 ,对短串联重复序列 (short tandem repeat,STR)进行分析 ,探讨应用串联重复序列信息进行 2 1三体定性诊断的可行性。方法　以染色体 G显带核型分析为对照 ,选择 19例 2 1三体阳性患儿和 3... 详细信息

目的　采用聚合酶链反应 -单链构象多态性技术 ,对短串联重复序列 (short tandem repeat,STR)进行分析 ,探讨应用串联重复序列信息进行 2 1三体定性诊断的可行性。方法　以染色体 G显带核型分析为对照 ,选择 19例 2 1三体阳性患儿和 3例高风险胎儿及其双亲为对象 ,抽提基因组 DNA,用聚合酶链反应扩增 D2 1S14 11和 D2 1S11位点的 STR片段 ,并对其进行单链构象多态性分析 ,通过电泳带型特征诊断 2 1三体。结果　本法可以通过检测三条染色体的 STR片段电泳带型来诊断 2 1三体。应用该基因诊断方法分析了 2 2例 2 1三体患儿 ,除 1例患儿的 D2 1S11电泳谱带与父母的电泳条带完全相同不能诊断外 ,其他病例的 D2 1S14 11和 D2 1S11位点的诊断结果与细胞遗传学核型分析结果相符 ,其中 3例孕中期高风险胎儿的分析结果被流产样品的核型分析所证实。结论　基于短串联重复序列的聚合酶链反应 -单链构象多态性分析技术是一种简单、快速和可靠的 2 1三体定性基因诊断技术 ,可应用于 2 1三体的基因诊断和遗传筛查。

关键词：短串联重复序列 21三体单链构象多态性分子诊断

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应用两种麦管系统对小鼠囊胚的玻璃化冷冻

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第一军医大学学报 2003年第9期23卷 992-995页

作者：朱亮罗琛黄敏珍李红邢福祺广州第一军医大学南方医院生殖医学中心广东广州510515 广州第一军医大学遗传学教研室广东广州510515

目的比较两种麦管系统对小鼠囊胚的玻璃化冷冻比较,以期建立一种有效的囊胚冷冻方法。方法分别应用开放麦管系统和传统麦管系统对小鼠扩张囊胚进行玻璃化冷冻,比较冷冻复苏以后囊胚的存活率和孵出率。结果应用开放麦管系统冷冻的小鼠囊... 详细信息

目的比较两种麦管系统对小鼠囊胚的玻璃化冷冻比较,以期建立一种有效的囊胚冷冻方法。方法分别应用开放麦管系统和传统麦管系统对小鼠扩张囊胚进行玻璃化冷冻,比较冷冻复苏以后囊胚的存活率和孵出率。结果应用开放麦管系统冷冻的小鼠囊胚复苏后的存活率(82.3%)显著高于应用传统麦管系统者(68.6%, P<0.01)。前者冷冻的小鼠囊胚复苏后的囊胚孵出率(70.3%),也明显高于应用传统麦管系统者(57.1%, P<0.05)。结论应用开放性麦管系统进行小鼠囊胚的玻璃化冷冻是一种行之有效的冷冻方法。

关键词：小鼠囊胚玻璃化冷冻开放性麦管系统辅助生殖

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