检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1999年第3期17卷 172-174页

作者：吴丹郭瀛军孙树汉上海第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

目的：为增强猪囊尾蚴抗原ｃＣ１的免疫保护作用而构建一表达猪白细胞介素４（ＩＬ４）与ｃＣ１抗原融合蛋白的ＤＮＡ疫苗载体。方法：通过聚合酶链反应（ＰＣＲ），分别扩增猪ＩＬ４ｃＤＮＡ和ｃＣ１ｃ ... 详细信息

目的：为增强猪囊尾蚴抗原ｃＣ１的免疫保护作用而构建一表达猪白细胞介素４（ＩＬ４）与ｃＣ１抗原融合蛋白的ＤＮＡ疫苗载体。方法：通过聚合酶链反应（ＰＣＲ），分别扩增猪ＩＬ４ｃＤＮＡ和ｃＣ１ｃＤＮＡ片段并进行融合，获得的嵌合基因ＩＬ４ｃＣ１中含有１０个氨基酸的中间接头序列，同时对其５’ ＡＵＧ侧翼序列进行翻译优化突变。结果：经酶切鉴定，证实有一１．５ｋｂ的片段插入载体，其ＤＮＡ序列分析结果与文献报道和实验设计完全一致。结论：表达猪ＩＬ４与猪囊尾蚴抗原ｃＣ１融合蛋白的ＤＮＡ疫苗载体构建成功。

关键词：囊尾蚴病抗原基因融合 DNA疫苗 IL-4

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丙型肝炎病毒单链RNA免疫活性的研究

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第二军医大学学报 2010年第9期31卷 929-932页

作者：程娜章意亮魏伟王凯慧孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的筛选丙型肝炎病毒(HCV)单链RNA(single strand RNA,ssRNA)序列中有效的免疫激活序列,并进一步确定与免疫激活序列特异结合的蛋白。方法筛选并合成4条HCV ssRNA序列中的寡聚核苷酸序列(HCV-ORNs),通过ELISA法检测其诱导的细胞因子表... 详细信息

目的筛选丙型肝炎病毒(HCV)单链RNA(single strand RNA,ssRNA)序列中有效的免疫激活序列,并进一步确定与免疫激活序列特异结合的蛋白。方法筛选并合成4条HCV ssRNA序列中的寡聚核苷酸序列(HCV-ORNs),通过ELISA法检测其诱导的细胞因子表达情况,确定有效免疫激活序列。然后通过改良型凝胶阻滞实验及质谱分析技术筛选与该序列特异结合的蛋白。结果在4个HCV-ORNs中,ORNHCVtail可有效诱导细胞因子TNF-α、IFN-α升高(P<0.01)。与ORNHCVtail特异结合的蛋白条带经质谱鉴定共鉴定出83种蛋白,其中可能与HCV ssRNA激活免疫反应相关的蛋白包括:TLR3(Toll-like receptor3),NLRC3(NLR family,CARD domain-containing3),NLRC4(NLR family,CARD domain-containing4,又称IPAF)。结论成功筛选出HCV ssRNA序列中有效的免疫激活序列,并筛选出与其特异结合的蛋白,为HCV激活天然免疫反应的机制研究奠定了基础。

关键词：丙型肝炎病毒单链RNA 免疫激活序列 RNA结合蛋白

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MiR-122稳定转染细胞系的建立及其脂代谢特征

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第二军医大学学报 2009年第7期30卷 825-829页

作者：章亚南王芳杨富殷一旋张玲孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的:利用稳定表达人miR-122前体的表达载体,转染低表达miR-122的人肝癌细胞系HepG2细胞,获得过量表达miR-122的稳定转染细胞系,探讨miR-122对肝脏细胞脂代谢的影响及其机制。方法:对已构建完成的表达质粒pEZX-hsa-mir-122和对照质粒pEZ... 详细信息

目的:利用稳定表达人miR-122前体的表达载体,转染低表达miR-122的人肝癌细胞系HepG2细胞,获得过量表达miR-122的稳定转染细胞系,探讨miR-122对肝脏细胞脂代谢的影响及其机制。方法:对已构建完成的表达质粒pEZX-hsa-mir-122和对照质粒pEZX-mir-control进行酶切鉴定,对酶切正确的克隆进行DNA测序,测序正确的克隆应用脂质体试剂转染,绿色荧光蛋白表达监测转染效率,应用嘌呤霉素筛选稳定转染细胞系,实时定量PCR在RNA水平鉴定miR-122的表达,蛋白质印迹法从靶分子水平验证miR-122的抑制功能,尼罗红染色观察细胞内脂质。结果:pEZX-hsa-mir-122质粒成功转染HepG2细胞,质粒携带的miR-122前体序列整合到细胞基因组中,获得过量表达miR-122的HepG2细胞株,细胞内成熟体miR-122可抑制靶基因的翻译,细胞内脂质明显增加。结论:人miR-122前体序列可整合在HepG2细胞基因组中,过量表达miR-122的HepG2细胞出现脂质代谢异常。

关键词：人miR-122 稳定转染脂代谢嘌呤霉素 HepG2细胞

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慢性乙肝患者外周血microRNAs的表达变化

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第二军医大学学报 2010年第12期31卷 1381-1383页

作者：贾音张毅费明钰孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

microRNAs(mi RNAs)是大小约21－23个碱基的非编码单链小分子RNA,通过与靶基因3′端非翻译区(3′-UTR)的不完全碱基配对发挥基因调控作用,使mRNA降解或抑制靶mRNA翻译。mi RNAs广泛参与了生物体多种生理和病理过程,包括细胞增殖、凋亡... 详细信息

microRNAs(mi RNAs)是大小约21－23个碱基的非编码单链小分子RNA,通过与靶基因3′端非翻译区(3′-UTR)的不完全碱基配对发挥基因调控作用,使mRNA降解或抑制靶mRNA翻译。mi RNAs广泛参与了生物体多种生理和病理过程,包括细胞增殖、凋亡、应激反应和肿瘤生成等。最近有报道指出随着一些疾病的发生发展,外周血循环中的mi RNAs表达量也有显著变化。我国是乙型肝炎高发区,目前关于mi RNAs在乙型肝炎中的表达变化尚不清楚。[第一段]

关键词： microRNAs 血浆慢性乙型肝炎

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粒状头样2(GRHL2)与肿瘤

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第二军医大学学报 2013年第11期34卷 1243-1247页

作者：唐冠楠颜宏利王玉招孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

粒状头样2(GRHL2)作为果蝇GRH(grainyhead)基因在哺乳动物中的同源基因之一,不仅参与调控胚胎发育、表皮屏障形成、表皮损伤修复以及中枢神经系统的发育等诸多生命活动过程,而且在乳腺癌、肝癌、口腔鳞状细胞癌等多种肿瘤的发生发展中... 详细信息

粒状头样2(GRHL2)作为果蝇GRH(grainyhead)基因在哺乳动物中的同源基因之一,不仅参与调控胚胎发育、表皮屏障形成、表皮损伤修复以及中枢神经系统的发育等诸多生命活动过程,而且在乳腺癌、肝癌、口腔鳞状细胞癌等多种肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。GRHL2在肝癌、乳腺癌、口腔鳞状细胞癌等肿瘤中表达升高,促进肿瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡;而在上皮-间质转化(EMT)相关的乳腺癌中则下调表达,促进EMT的发生。GRHL2在肿瘤细胞中作用机制复杂而多样,既包括死亡受体相关的凋亡作用,人端粒反转录酶(hTERT)的活化,也涉及到EMT的发生、失巢凋亡敏感性增加。随着对GRHL2研究的深入,将有望为恶性肿瘤的临床诊断和治疗开辟新的方向。

关键词：粒状头样2 肿瘤上皮-间质转化

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膜联蛋白A7与IGFBP2结合抑制肝癌细胞增殖

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第二军医大学学报 2015年第4期36卷 378-382页

作者：王玉招刘音郭瀛军孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的分析膜联蛋白A7(ANXA7)与肝癌发生的相关性及筛选、鉴定ANXA7的相互作用分子,探讨ANXA7在肝癌发生中的机制。方法通过实时定量PCR法检测48对肝癌与癌旁组织以及多种肝和肝癌细胞株中ANXA7表达量的差异,并通过肝癌细胞ANXA7过表达及... 详细信息

目的分析膜联蛋白A7(ANXA7)与肝癌发生的相关性及筛选、鉴定ANXA7的相互作用分子,探讨ANXA7在肝癌发生中的机制。方法通过实时定量PCR法检测48对肝癌与癌旁组织以及多种肝和肝癌细胞株中ANXA7表达量的差异,并通过肝癌细胞ANXA7过表达及特异性干扰抑制分析其对肝癌细胞增殖的影响。采用免疫共沉淀法筛选与ANXA7发生结合的蛋白,并以点突变法分析蛋白质相互作用的关键位点;用蛋白免疫印迹法分析了ANXA7对肝癌相关的重要信号通路中ERK1/2磷酸化水平的影响。结果 ANXA7在肝癌组织与肝癌细胞中均呈下调表达。胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP2)能与ANXA7蛋白发生特异性结合,且IGFBP2上的RGD序列是两者结合的关键位点。肝癌细胞中ANXA7表达上调能抑制肿瘤细胞增殖(P<0.05),并能使IGFBP2介导的ERK1/2的磷酸化水平降低。下调ANXA7的表达可促进肝癌细胞增殖(P<0.01),磷酸化ERK1/2的水平升高。结论 ANXA7可能作为一种抑癌基因,通过介导IGFBP2对ERK1/2磷酸化水平的影响参与对肝癌增殖的调控。

关键词：膜联蛋白A7 肝细胞癌胰岛素样生长因子结合蛋白2 细胞增殖

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肿瘤细胞核旁斑的生物学结构及功能研究进展

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海军军医大学学报 2023年第10期44卷 1205-1211页

作者：谭坚王月帆戴智慧尹昊瓒王嗣杰杨富海军军医大学(第二军医大学)基础医学院医学遗传学教研室上海200433

核旁斑是细胞核内一类重要的亚核体。核旁斑可通过拘留RNA或蛋白以及与miRNA相互作用等方式调控基因的表达,从而在肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用,研究核旁斑在肿瘤细胞中的生物学结构及作用对肿瘤的诊疗具有重要意义。目前关于核旁... 详细信息

核旁斑是细胞核内一类重要的亚核体。核旁斑可通过拘留RNA或蛋白以及与miRNA相互作用等方式调控基因的表达,从而在肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用,研究核旁斑在肿瘤细胞中的生物学结构及作用对肿瘤的诊疗具有重要意义。目前关于核旁斑在肿瘤细胞中的结构、功能及临床意义尚未完全明确。本文综述了肿瘤细胞核旁斑的组成、结构、装配及其在肿瘤发生、发展过程的作用机制和临床意义,旨在为肿瘤的诊断、治疗及预后提供新的研究方向与线索。

关键词：核旁斑肿瘤核富集常染色体转录本1 结构功能

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泛素结合酶E2C通过特异性结合β-微管蛋白参与调控肝细胞癌进展

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第二军医大学学报 2021年第1期42卷 14-20页

作者：刘梦朱怡卿黄金凤肖邦陈美婷王芳海军军医大学(第二军医大学)基础医学院医学遗传学教研室上海200433

目的筛选泛素结合酶E2C(UBE2C)的底物蛋白,并探讨其在肝细胞癌进展中的作用。方法构建带有Halotag标签的UBE2C过表达质粒,将UBE2C与Halotag在人高转移肝癌细胞系HCCLM3中融合表达,通过Halolink树脂沉淀UBE2C结合的底物蛋白,并联合SDS-P... 详细信息

目的筛选泛素结合酶E2C(UBE2C)的底物蛋白,并探讨其在肝细胞癌进展中的作用。方法构建带有Halotag标签的UBE2C过表达质粒,将UBE2C与Halotag在人高转移肝癌细胞系HCCLM3中融合表达,通过Halolink树脂沉淀UBE2C结合的底物蛋白,并联合SDS-PAGE和质谱对底物蛋白进行鉴定。在人肝癌细胞系Huh-7中过表达UBE2C,通过qRT-PCR、蛋白质印迹分析和细胞免疫荧光实验检测UBE2C过表达对其底物蛋白表达的影响,利用细胞核质分离结合蛋白质印迹分析及TOP flash/FOP flash荧光素酶报告基因实验检测UBE2C过表达对Wnt信号通路的影响,并进一步通过qRT-PCR和蛋白质印迹分析验证UBE2C过表达对Wnt信号通路下游基因表达的影响。结果Halotag共沉淀产物经SDS-PAGE和银染后所获得差异条带的质谱鉴定结果显示,β-微管蛋白是UBE2C结合的底物蛋白。与对照组相比,过表达UBE2C降低了Huh-7细胞中β-微管蛋白在蛋白水平的表达(P<0.01),但对其在mRNA水平的表达没有影响(P>0.05)。同时,过表达UBE2C促进了β-联蛋白入核(P<0.05),提高了TOP flash/FOP flash荧光素酶活性(P<0.01),增强了Wnt信号通路下游基因JNK、细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶7的表达(P均<0.05)。结论UBE2C通过特异性结合β-微管蛋白降低肝癌细胞中β-微管蛋白水平,从而提高Wnt信号通路活性,促进其下游基因表达,进而参与调控肝细胞癌的进展。

关键词：肝细胞癌泛素结合酶E2C β-微管蛋白 Wnt信号通路

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胎肝特异性癌胚RNA——AK003710的筛选及功能研究

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第二军医大学学报 2015年第3期36卷 233-240页

作者：王少冰孙树汉王芳第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的筛选胎肝特异性癌胚RNA,探讨其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法对小鼠肝发育和肝再生的长链非编码RNA(lncRNA)芯片数据进行生物信息学分析,筛选得到在胎肝和再生肝脏中均高表达的候选lncRNA,利用实时定量PCR在小鼠肝癌组织中... 详细信息

目的筛选胎肝特异性癌胚RNA,探讨其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法对小鼠肝发育和肝再生的长链非编码RNA(lncRNA)芯片数据进行生物信息学分析,筛选得到在胎肝和再生肝脏中均高表达的候选lncRNA,利用实时定量PCR在小鼠肝癌组织中对候选lncRNA进行表达水平检测,综合芯片分析及实时定量PCR结果,选择表达差异最明显的lncRNA行进一步研究。首先在胎肝和肝再生模型中验证该lncRNA的表达,然后利用siRNA技术干扰该lncRNA,再通过EdU标记技术和Transwell实验分别检测细胞的增殖能力和侵袭能力。结果生物信息学分析筛选得到在胎肝和再生肝脏中均高表达的7条lncRNA,其中3条在小鼠肝癌组织中较正常肝组织高表达,3条表达无差异,1条无表达;高表达的3条lncRNA中,lncRNA-AK003710在小鼠肝发育和肝再生芯片中的差异表达倍数最高,可作为进一步研究对象。进一步验证显示lncRNA-AK003710在胎肝及多种肝损伤修复模型中表达上调;功能实验表明对lncRNA-AK003710靶向干扰后能降低小鼠肝癌细胞Hepa1-6的增殖和侵袭能力。结论 lncRNA-A003710在胎肝、再生肝组织及肝癌组织中均高表达,是胎肝特异性癌胚RNA,可调控肝癌细胞的增殖及侵袭过程,有望成为肝癌治疗的潜在靶点。

关键词：长链非编码RNA 肝发育肝再生肝损伤肝肿瘤

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组织型纤溶酶原激活剂在人胚胎表皮角质形成细胞分化中的作用

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中国医学科学院学报 2001年第6期23卷 623-626页

作者：宋川杨恬杨进第三军医大学细胞生物学教研室重庆400038

目的探讨组织型纤溶酶原激活剂(tPA)参与人表皮角质形成细胞(KC)分化调控的作用。方法采用免疫细胞化学(ICC)及原位杂交(ISH)技术定性、定量检测早、中、晚期人胚胎表皮KC中tPA蛋白及mRNA的表达。结果(1)tPA在人胚胎期表皮KC中表达量明... 详细信息

目的探讨组织型纤溶酶原激活剂(tPA)参与人表皮角质形成细胞(KC)分化调控的作用。方法采用免疫细胞化学(ICC)及原位杂交(ISH)技术定性、定量检测早、中、晚期人胚胎表皮KC中tPA蛋白及mRNA的表达。结果(1)tPA在人胚胎期表皮KC中表达量明显高于出生后期,胚胎期的表达高峰在胚胎中期,胚胎晚期其蛋白水平开始降低,而tPAmRNA表达则维持在相对较高水平。(2)tPA在人胚胎期主要存在于分化程度高的表皮浅层KC内。(3)tPA聚集于KC胞膜下方。结论tPA参与表皮KC分化的调控。

关键词：组织型纤溶酶原激活剂角质形成细胞细胞分化人胚胎

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