检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2014年第9期36卷 847-851页

作者：熊浩君赵凯何凤田曾益军陈姗陈丙波第三军医大学实验动物中心重庆400038 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制肾癌细胞增殖的分子机制。方法采用不同浓度的5-Aza-CdR作用于769-P和ACHN 2种肾癌细胞,处理72 h后CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h后,流式细胞仪测定细胞周... 详细信息

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制肾癌细胞增殖的分子机制。方法采用不同浓度的5-Aza-CdR作用于769-P和ACHN 2种肾癌细胞,处理72 h后CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h后,流式细胞仪测定细胞周期分布,RT-PCR测定甲基化转移酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b以及细胞信号抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的表达,Western blot测定SOCS3、P21在蛋白质水平的表达;siRNA干扰SOCS3表达以后,加5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h,Western blot检测细胞内SOCS3、P21的表达。结果 5-Aza-CdR可以剂量性依赖地抑制肾癌细胞系769-P和ACHN的增殖(P<0.05),且使769-P细胞阻滞在G2/M期。RT-PCR检测发现,5-Aza-CdR可以下调DNMT1和DNMT3a的表达和上调SOCS3的表达(P<0.05)。Western blot检测发现5-Aza-CdR可以促进SOCS3蛋白质的表达,并且伴随着P21蛋白的升高。在干扰SOCS3的表达后,用5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h,P21的表达明显降低。结论 5-Aza-CdR通过抑制甲基化转移酶,增强SOCS3介导P21的表达,从而抑制肾癌细胞769-P增殖。

关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷肾细胞癌细胞增殖细胞信号抑制因子3 P21

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TNF-α对小鼠骨髓间充质干细胞免疫抑制作用影响

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青岛大学医学院学报 2015年第2期51卷 169-171,174页

作者：亓俊华吴梅徐祥黄宏刘晓萍青岛大学医学院组织与胚胎学教研室山东青岛266071 青岛大学基础医学实验中心人体显微结构学实验室第三军医大学野战外科研究所干细胞移植&细胞治疗中心

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)免疫抑制作用影响。方法采用全骨髓贴壁培养法分离培养小鼠的BMSCs,观察其细胞形态学的变化。应用免疫荧光法检测小鼠BMSCs CXCR4的表达;应用油红O和阿尔新蓝染色分别鉴定... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)免疫抑制作用影响。方法采用全骨髓贴壁培养法分离培养小鼠的BMSCs,观察其细胞形态学的变化。应用免疫荧光法检测小鼠BMSCs CXCR4的表达;应用油红O和阿尔新蓝染色分别鉴定BMSCs成脂和成软骨诱导情况;应用ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中白细胞介素-10(IL-10)和前列腺素2(PGE2)的表达;应用免疫印迹实验检测培养细胞环氧化物水解酶2(COX-2)和核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达。结果体外培养的小鼠BMSCs贴壁呈现克隆性生长,大部分细胞呈圆形,部分呈梭形。BMSCs CXCR4的阳性表达率为100%。BMSCs可分化为脂肪细胞及软骨细胞。TNF-α处理组上清液中IL-10和PGE2的表达明显高于对照组(t=14.235、12.005,P<0.05),细胞COX-2和NF-κB蛋白的表达明显高于对照组(t=8.557、4.301,P<0.05)。结论 TNF-α可能通过NF-κB信号通路,明显增强小鼠BMSCs的免疫抑制作用。

关键词：骨髓间质干细胞肿瘤坏死因子-α 免疫抑制小鼠

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Akt/mTOR信号通路介导低浓度过氧化氢对小鼠表皮干细胞的促增殖作用

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感染．炎症．修复 2015年第3期16卷 138-144页

作者：亓俊华聂刚吴梅刘晓萍陈民佳朱明袁培松张娅宋昱庆郭韡邢伟李向云罗东林黄宏徐祥第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第一研究室重庆400042 青岛大学医学院组织胚胎学教研室山东青岛266071 温州医科大学附属第一医院皮肤科浙江温州325000 青岛大学基础医学实验中心人体显微结构学实验室山东青岛266071

目的:探讨低浓度过氧化氢(H_2O_2)对小鼠表皮干细胞(mESCs)体外促增殖作用及其机制。方法:以酶消化法分离培养mESCs。免疫荧光技术鉴定第3代mESCsβ1整合素和角蛋白19(K19)表达,流式细胞术鉴定CD34的表达;以不同低浓度H_2O_2(0、25、50... 详细信息

目的:探讨低浓度过氧化氢(H_2O_2)对小鼠表皮干细胞(mESCs)体外促增殖作用及其机制。方法:以酶消化法分离培养mESCs。免疫荧光技术鉴定第3代mESCsβ1整合素和角蛋白19(K19)表达,流式细胞术鉴定CD34的表达;以不同低浓度H_2O_2(0、25、50、100、150和200μmol/L)处理mESCs 48 h和72h。同时,另一组实验中在用不同浓度H_2O_2刺激的同时加入或不加入雷帕霉素(50 ng/ml)培养48 h。甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Western Blot法检测H_2O_2刺激小鼠mESCs 48 h Akt/mTOR信号通路关键蛋白mTOR、Akt、P70s6k、e IF4E、4E-BP1、p-mTOR、p-Akt、p-P70s6k、p-eIF4E、p-4E-BP1和细胞增殖相关蛋白Cyclin D1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:免疫荧光技术检测分离培养的mESCs细胞100%表达β1整合素和K19;流式细胞术检测99.8%的mESCs表达CD34;MTT检测结果显示,48 h和72 h时25μmol/L和50μmol/L的H_2O_2可以有效地促进mESCs的增殖(P<0.05),而雷帕霉素能拮抗这一效应;但当H_2O_2浓度为200μmol/L时,则显著抑制mESCs增殖(P<0.05);免疫印迹结果显示低浓度H_2O_2处理mESCs 48 h后,Akt/mTOR信号通路关键蛋白mTOR、Akt、eIF4E、4E-BP1水平及其磷酸化水平(p-mTOR、p-eIF4E、p-4E-BP1)显著增加(P<0.05或P<0.01),当H_2O_2浓度为200μmol/L时则抑制其表达(P<0.05或P<0.01)。此外,50μmol/L的H_2O_2能上调细胞周期蛋白Cyclin D1和PCNA的表达,而雷帕霉素能拮抗这一作用。结论:低浓度的H_2O_2对mESCs有明显的促增殖作用,并且能激活Akt/mTOR通路。而低浓度H_2O_2对mESCs的促增殖作用至少部分是通过活化Akt/mTOR信号通路介导的。

关键词：表皮干细胞过氧化氢 Akt/mTOR信号通路细胞增殖

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多指标正交设计评价和优化巴马香猪精液冷冻稀释液

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西南大学学报（自然科学版） 2014年第7期36卷 1-7页

作者：孔德营商海涛刘福慧韩勇魏泓张家骅遵义医学院基础医学院生理学教研室贵州遵义563000 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038 遵义医学院附属医院输血科贵州遵义563000 西南大学动物科技学院重庆市草食动物资源保护与利用工程技术研究中心重庆400716

该文通过多指标正交实验设计对巴马香猪精液冷冻稀释液中低密度脂蛋白(LDL,因素A)、海藻糖(因素B)和甘油(因素C)等3种保护剂联合使用时的作用进行评价,并分别对3种物质的最佳体积质量分数、摩尔浓度和体积百分比进行优化.结果表明3种保... 详细信息

该文通过多指标正交实验设计对巴马香猪精液冷冻稀释液中低密度脂蛋白(LDL,因素A)、海藻糖(因素B)和甘油(因素C)等3种保护剂联合使用时的作用进行评价,并分别对3种物质的最佳体积质量分数、摩尔浓度和体积百分比进行优化.结果表明3种保护剂对精子活率(TMS)、质膜完整性(PMI)和彗星率(CR)作用的主次顺序均为A>C>B,对精子顶体完整性(AI)作用的主次顺序为B>A>C;3种保护剂对TMS和PMI均有极显著的保护作用(p<0.01),对CR均无显著性作用(p>0.05);LDL和海藻糖对AI有显著的保护作用(p<0.05),甘油对AI无显性作用(p>0.05);通过因素与指标关系趋势图的绘制,发现由各个指标得到的最佳组合均为A2B3C2,且指标间的相关性均达到了显著水平(p<0.05).因此,用TMS,PMI,AI和CR评价巴马香猪冷冻-解冻后精液质量时,指标间不存在矛盾,用9%(w/v)低密度脂蛋白、200mmol/L海藻糖和2%甘油为巴马香猪精液冷冻稀释液中最优组合.

关键词：巴马香猪精液冷冻多指标正交试验设计低密度脂蛋白甘油海藻糖

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不同限饲水平下巴马香猪血液生理、生化指标的比较

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第三军医大学学报 2013年第11期35卷 1111-1114页

作者：李亮刘宇商海涛魏泓第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的测定不同限饲水平下巴马香猪重要血液生理、生化指标,探讨限饲对血液生理生化指标的影响。方法将336头断奶巴马香猪根据不同限饲水平按完全随机法分为对照组、80%日粮组和50%日粮组,每组112头,在60日龄和90日龄前腔静脉采集血液样本... 详细信息

目的测定不同限饲水平下巴马香猪重要血液生理、生化指标,探讨限饲对血液生理生化指标的影响。方法将336头断奶巴马香猪根据不同限饲水平按完全随机法分为对照组、80%日粮组和50%日粮组,每组112头,在60日龄和90日龄前腔静脉采集血液样本,对重要的10项血液生理指标和7项血液生化指标进行测定,统计不同限饲水平下指标的差异。结果血液生化指标中ALT、TP、UREA和CREA指标值随着限饲水平的上升而上升;而TCHOL和GLU指标值随着限饲水平的上升而下降(P<0.05)。血液生理指标中RBC、HGB、HCT、MCH和MCHC指标含量随着限饲水平的上升而上升;而PLT、MCV、RDW-SD和RDW-CV指标含量随着限饲水平的上升而下降(P<0.05)。结论巴马香猪在3个限饲水平下,血液生理、生化指标存在明显差异;按80%日粮限饲的巴马香猪更能获得稳定标准的巴马香猪血液生理、生化指标。

关键词：巴马香猪限饲血液生理血液生化

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AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸对L929成纤维细胞增殖及纤维化介质表达的影响

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医学研究杂志 2014年第3期43卷 98-102页

作者：亓俊华聂刚徐祥黄宏刘晓萍王晓慧吴梅青岛大学医学院组织胚胎学教研室 266071 温州医科大学附属第一医院皮肤科 325000 第三军医大学野战外科研究所干细胞移植&细胞治疗中心重庆400042 青岛大学基础医学实验中心人体显微结构学实验室 266071

目的探讨AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸对L929成纤维细胞增殖及纤维化介质表达的影响。方法设计并合成AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸、AP-1,Smad3阳性对照诱骗寡核苷酸及随机诱骗寡核苷酸,然后通过脂质体分别转染进入L929成纤维细胞... 详细信息

目的探讨AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸对L929成纤维细胞增殖及纤维化介质表达的影响。方法设计并合成AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸、AP-1,Smad3阳性对照诱骗寡核苷酸及随机诱骗寡核苷酸,然后通过脂质体分别转染进入L929成纤维细胞内。分别通过ELISA法、细胞计数、ATP生物荧光法及免疫印迹法检测合成的诱骗寡核苷酸及其对L929细胞增殖及纤维化介质表达的影响。结果与随机诱骗核酸对照相比,双功能诱骗核苷酸既能明显抑制AP-1的DNA结合活性,又能抑制Smad3的DNA结合活性(P<0.01)。与随机诱骗寡核苷酸相比,AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸、AP-1,Smad3阳性对照诱骗核酸均能抑制TGF-β诱导的L929细胞的增殖并且降低其表达FN、PAI-1、c-fos、Collα2、TGF-β1、CTGF等纤维化介质,其中以AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸的作用最为显著。结论设计并合成的AP-1和Smad3双功能诱骗寡核苷酸可以有效地抑制L929成纤维细胞的增殖和纤维化介质的表达。

关键词： AP-1 Smad3诱骗寡核苷酸 L929 成纤维细胞

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人胃源乳杆菌耐受性及抗幽门螺杆菌活性的鉴定

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中国人兽共患病学报 2013年第6期29卷 556-561页

作者：黄微微郭刚宋阳曾本华张卫军解庆华杨致邦重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 第三军医大学医学检验系临床微生物学及免学疫教研室重庆400038 中国人民解放军总医院微生物科北京100853 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038

目的分离自人胃粘膜的乳杆菌抗幽门螺杆菌活性的筛选,为观察乳杆菌与幽门螺杆菌相互作用寻找合适的研究对象。方法从21例胃镜检查者的胃粘膜组织中分离鉴定出6株乳杆菌,检测其在pH 2.5～pH 4.5和含0.05%～0.2%胆盐条件下的耐受性,并结... 详细信息

目的分离自人胃粘膜的乳杆菌抗幽门螺杆菌活性的筛选,为观察乳杆菌与幽门螺杆菌相互作用寻找合适的研究对象。方法从21例胃镜检查者的胃粘膜组织中分离鉴定出6株乳杆菌,检测其在pH 2.5～pH 4.5和含0.05%～0.2%胆盐条件下的耐受性,并结合琼脂扩散牛津杯法检测其抑制幽门螺杆菌生长的能力及通过细胞试验检测其抗幽门螺杆菌粘附人胃上皮细胞的活性。结果 6株乳杆菌分离株中L3产酸量最大,耐酸和高浓度胆盐,其活菌和上清液在血平板中对幽门螺杆菌作用后形成的抑菌环直径均最大,对大肠杆菌的抑菌环大于金黄色葡萄球菌的,处理液相同的两两比较差异有统计学意义(P<0.05),同时能使幽门螺杆菌粘附人胃上皮细胞的粘附率最低。结论人胃粘膜来源的乳杆菌菌株L3具有较好的耐受性和抗幽门螺杆菌活性,研究结果为幽门螺杆菌感染的微生态治疗提供依据。

关键词：幽门螺杆菌乳杆菌胃粘膜耐受性抑制性

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巴马香猪类固醇激素急性调节蛋白(StAR)基因真核表达载体的构建及鉴定

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中国兽医杂志 2013年第5期49卷 19-22页

作者：吴群魏泓肖榕卿利娟葛亮李婧商海涛郑小波刘宇西南大学荣昌校区动物医学系重庆荣昌402460 中国人民解放军第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆沙坪坝400038

本试验通过RT-PCR扩增巴马香猪StAR基因,分析其序列的结构特点并构建真核表达载体,为StAR基因在猪睾丸间质细胞中的超量表达研究奠定基础。根据NCBI中猪StAR基因序列设计并合成引物,以巴马香猪睾丸组织总RNA为模板进行RT-PCR,将所得目... 详细信息

本试验通过RT-PCR扩增巴马香猪StAR基因,分析其序列的结构特点并构建真核表达载体,为StAR基因在猪睾丸间质细胞中的超量表达研究奠定基础。根据NCBI中猪StAR基因序列设计并合成引物,以巴马香猪睾丸组织总RNA为模板进行RT-PCR,将所得目的基因与pEGFP-C1进行双酶切后连接构建真核表达载体pEGFP-C1-StAR。结果显示,连接到pSURE-T克隆载体上的目的片段测序结果为858碱基组成,编码含有285个氨基酸残基的蛋白质,与NCBI报道的StAR基因比对,核酸同源性在99.3%以上,并成功构建了重组载体pEGFP-C1-StAR。

关键词：巴马香猪类固醇激素急性调节蛋白真核表达载体表达鉴定

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胃转流手术对模型猪肠道菌群及部分血清学指标的影响

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上海畜牧兽医通讯 2013年第3期 2-4页

作者：葛亮曾本华肖榕王立斌卿利娟吴群李婧郑小波魏泓西南大学动物医学系重庆荣昌402460 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038

为研究模型猪在实行胃转流手术后肠道菌群以及血清学指标的变化情况。选取6头成年雌性巴马香猪,接受胃转流手术后,检测血清学指标变化,并利用变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)评价该术式对肠道菌群的影响。结果:正常组菌群平均丰富度(Richnes... 详细信息

为研究模型猪在实行胃转流手术后肠道菌群以及血清学指标的变化情况。选取6头成年雌性巴马香猪,接受胃转流手术后,检测血清学指标变化,并利用变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)评价该术式对肠道菌群的影响。结果:正常组菌群平均丰富度(Richness,S)为6.44±0.33,术后一月、二月、三月组为5.30±1.50、7.22±0.60、7.47±0.76;正常组Shannon指数(H')为3.29±0.05,术后组分别为3.12±0.34、3.42±0.11、3.40±0.21;正常组术后一月组跟术后二月组、三月组总相似度为63%,组间差异不明显;血清学统计分析中,正常组和术后七月组在肌酐和总胆红素两项有显著差异。结果表明:胃转流手术会对模型猪肠道微生态造成一定影响,但并不显著;另外该手术可能会损伤肝脏,并降低肾小球通过率。

关键词：胃转流手术模型猪变性梯度凝胶电泳肠道菌群血清学指标

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慢病毒介导HLA-G转基因小鼠的建立

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第三军医大学学报 2012年第14期34卷 1392-1396页

作者：王露露刘勤周晓杨刘昌峨王勇魏泓第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的以慢病毒作为载体建立HLA-G转基因小鼠,为研究HLA-G与移植免疫提供模型动物。方法利用FUW载体,构建含有HLA-G编码序列的慢病毒表达载体FUW-HLA-G。用磷酸钙沉淀法将包装质粒psPAX2、PMD2.G与重组慢病毒载体质粒FUW-HLA-G共转染293F... 详细信息

目的以慢病毒作为载体建立HLA-G转基因小鼠,为研究HLA-G与移植免疫提供模型动物。方法利用FUW载体,构建含有HLA-G编码序列的慢病毒表达载体FUW-HLA-G。用磷酸钙沉淀法将包装质粒psPAX2、PMD2.G与重组慢病毒载体质粒FUW-HLA-G共转染293FT细胞,包装成慢病毒。通过同步转染含有绿色荧光标记基因的慢病毒质粒FUGW为参照,测定FUW-HLA-G病毒液的滴度。用显微注射法将浓缩后的病毒液注射至FVB/N小鼠1-细胞期胚胎透明带下,建立HLA-G转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因整合,用RT-PCR检测转基因在转录水平的表达,用Western blot检测HLA-G蛋白的表达。结果载体BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切结果和测序结果显示重组的慢病毒质粒与所设计的序列一致。浓缩和纯化后的病毒液滴度达到109TU/ml以上,符合用慢病毒制备转基因小鼠的要求。PCR筛选出阳性鼠6只,RT-PCR与Western blot检测结果表明HLA-G基因在F0和F1代转基因小鼠中均有表达。结论通过慢病毒介导的基因转移,成功建立了表达人HLA-G蛋白的转基因小鼠,为研究HLA-G的功能及其在器官或组织移植中的效应提供了动物模型。

关键词： HLA-G 慢病毒转基因小鼠

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