检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学杂志 2007年第1期27卷 50-54页

作者：李明胡福泉唐家琪第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

二元信号转导系统是广泛存在于细菌中的信号传导机制。病原菌在感染宿主的过程中,能通过该系统密切感受和响应体内外各种微环境的变化,进而调节各种基因表达以完成其致病过程。由于二元信号转导系统在病原菌的致病性方面具有重要作用,... 详细信息

二元信号转导系统是广泛存在于细菌中的信号传导机制。病原菌在感染宿主的过程中,能通过该系统密切感受和响应体内外各种微环境的变化,进而调节各种基因表达以完成其致病过程。由于二元信号转导系统在病原菌的致病性方面具有重要作用,将其作为抗感染治疗中的靶点具有良好的应用前景。

关键词：二元信号转导系统病原菌致病性

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抑制FoxO1基因表达的siRNA重组腺病毒载体的构建及功能鉴定

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第三军医大学学报 2007年第23期29卷 2215-2218页

作者：卢忠燕甘立霞王哲何凤田邹全明曹廷兵第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038 大坪医院野战外科研究所内分泌科重庆市高血压病研究所重庆400042

目的构建针对转录因子FoxO1的siRNA腺病毒载体,并鉴定重组腺病毒在人肝癌细胞系HepG2中对内源性FoxO1基因表达的影响。方法设计并合成针对FoxO1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细... 详细信息

目的构建针对转录因子FoxO1的siRNA腺病毒载体,并鉴定重组腺病毒在人肝癌细胞系HepG2中对内源性FoxO1基因表达的影响。方法设计并合成针对FoxO1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,转染293细胞,包装得到含si-FoxO1的重组腺病毒,体外转染人肝癌细胞系HepG2,Westernblot检测FoxO1蛋白表达水平的变化。结果成功构建针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,该重组腺病毒能显著抑制HepG2细胞中FoxO1蛋白的表达(P<0.01)。结论成功构建了针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,能有效抑制HepG2细胞中FoxO1的表达。

关键词： FoxO1 siRNA 腺病毒载体 HepG2细胞

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稳定表达人胰岛素原突变基因的HepG2细胞构建及其胰岛素分泌

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第三军医大学学报 2007年第24期29卷 2361-2363页

作者：郑宏庭邓华聪兰丽珍方芳刘金波李丙蓉蹇锐重庆医科大学附属第一医院内分泌科重庆400016 第三军医大学新桥医院内分泌科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的构建稳定表达人胰岛素原突变(mutated human proinsulin,mhPINS)基因的HepG2细胞,将HepG2细胞改建为具有胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"(artificial beta cell)。方法重组逆转录病毒载体pL-mhPINS-SN转包装细胞PA317,经G... 详细信息

目的构建稳定表达人胰岛素原突变(mutated human proinsulin,mhPINS)基因的HepG2细胞,将HepG2细胞改建为具有胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"(artificial beta cell)。方法重组逆转录病毒载体pL-mhPINS-SN转包装细胞PA317,经G418筛选,NIH3T3细胞测定病毒滴度,获取高滴度的稳定产毒细胞克隆,以PCR进行鉴定。以mhPINS病毒感染HepG2细胞,经G418筛选,对HepG2/mhPINS细胞进行RT-PCR、Western blot、放免法鉴定,并行葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测。结果所获HepG2/mhPINS细胞生长良好,RT-PCR获得286bp目的条带,Western blot检测可见34×103的特异性条带,放免法在其培养上清中检测到胰岛素与C肽,而HepG2/pLXSN细胞上述各项检测均为阴性。葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测显示,HepG2/mhPINS细胞在不同葡萄糖浓度(0.1、10、20mmol/L)条件下引起的胰岛素分泌无显著性差异(P>0.05)。结论成功构建稳定表达mhPINS基因的HepG2细胞,其内获得成熟胰岛素的表达与分泌,但其胰岛素分泌对葡萄糖刺激缺乏反应。

关键词： mhPINS基因逆转录病毒 HepG2细胞胰岛素

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HeLa细胞感染痢疾杆菌前后差异表达的新EST序列的电子延伸及验证

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世界华人消化杂志 2007年第17期15卷 1905-1913页

作者：黄留玉史兆兴袁静胡福泉军事医学科学院疾病预防控制所北京市100071 中国人民解放军第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆市400038

目的:研究痢疾杆菌福氏2a入侵前和入侵后3h的人上皮细胞差异表达的新基因.方法:采用增毒的痢疾杆菌福氏2a 2457T侵袭HeLa细胞,检查HeLa细胞中细菌的数量并用RT-PCR方法从HeLa细胞中提取总RNA,制备探针.采用含有约3000个代表新基因的芯... 详细信息

目的:研究痢疾杆菌福氏2a入侵前和入侵后3h的人上皮细胞差异表达的新基因.方法:采用增毒的痢疾杆菌福氏2a 2457T侵袭HeLa细胞,检查HeLa细胞中细菌的数量并用RT-PCR方法从HeLa细胞中提取总RNA,制备探针.采用含有约3000个代表新基因的芯片进行芯片杂交,分析杂交结果.将所获得的新的156条EST序列为种子序列用cDNA微阵列实验,以人类EST数据库为基础库,应用siClone软件进行EST拼接、校对并尽可能延长获得大片段或全长cDNA.选取基因组未注释的编码区序列作为新基因进行RT-PCR实验验证.结果:共鉴定到≥3倍或≤0.33的差异表达的代表新基因的EST序列45条,其中25个延伸序列鉴定为与重要的肠道功能相关的已知基因,并有3个在痢疾杆菌侵袭期间高表达的存在显著差异的新EST序列,他们分别名为:NPCCKH12、ADBCSB02和HTBAMG05,这3个基因是新的人基因或假基因.结论:鉴定出了在HeLa细胞感染痢疾杆菌前后差异表达的新EST序列,为进一步研究痢疾杆菌与寄主相互作用奠定了基础.

关键词：痢疾杆菌福氏2a 表达序列标签:cDNA微阵列电子延伸反转录聚合酶链反应基因鉴定

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猪链球菌二元信号转导系统89hk/rr基因敲除突变株的构建和鉴定

猪链球菌二元信号转导系统89hk/rr基因敲除突变株的构建和鉴定

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第九届全军流行病学、第八届全军防生物危害医学专业学术会议

作者：李明胡福泉王长军王晶郑峰潘秀珍唐家琪南京军区疾病预防控制中心流行病微生物学研究所南京 210002 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆 400038 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆 400038 南京军区疾病预防控制中心流行病微生物学研究所南京 210002

98年和2005年,我国江苏省和四川省分别发生两起猪链球菌(***)2型暴发流行感染猪和人的公共卫生事件,临床病人出现了国内外从未报导过的中毒性休克综合征(STSS)。为了对造成这两次公共卫生事件的S. suis 2流行菌株的致病性进行深入研究,... 详细信息

98年和2005年,我国江苏省和四川省分别发生两起猪链球菌(***)2型暴发流行感染猪和人的公共卫生事件,临床病人出现了国内外从未报导过的中毒性休克综合征(STSS)。为了对造成这两次公共卫生事件的S. suis 2流行菌株的致病性进行深入研究,本室(南京军区军事医学研究所)选择1998年江苏流行的强致病株98HAH12和2005年四川流行的强致病株05ZYH33(两株均分离自STSS病人)及无毒株05JYS68(分离自江苏健康猪)进行了全基因组测序,现测序已全部完成并对基因组进行了初步注释(待发表)。将98HAH12和05ZYH33基因组与Sanger研究中心公布的标准株P1/7全基因组序列进行比较后发现,三者的同源性很高,均属于S. suis 2血清型。

关键词：猪链球菌基因敲除信号转导基因组序列

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2-型猪链球菌疫苗候选分子FBPS的表达及纯化研究

2-型猪链球菌疫苗候选分子FBPS的表达及纯化研究

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第九届全军流行病学、第八届全军防生物危害医学专业学术会议

作者：刘丽娜胡福泉朱军民赵岩李明唐家琪第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆 400038 南京军区疾病预防控制中心流行病微生物学研究所南京 210002 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆 400038 南京军区疾病预防控制中心流行病微生物学研究所南京 210002

2-型猪链球菌(***)是造成养猪业重大经济损失的病原之一,同时也是一种重要的人畜共患病病原体。迄今,国外报告的人类感染病例己达200余人,但多为散在发病。近年,我国江苏省(1998年)和四川省(2005年)分别暴发了人感染2-型猪链球菌事件,... 详细信息

2-型猪链球菌(***)是造成养猪业重大经济损失的病原之一,同时也是一种重要的人畜共患病病原体。迄今,国外报告的人类感染病例己达200余人,但多为散在发病。近年,我国江苏省(1998年)和四川省(2005年)分别暴发了人感染2-型猪链球菌事件,出现了"中毒性休克综合征"(STSS)这一新的临床类型,病死率高达60％~80％,引起了全世界的广泛关注。作为一种新出现突发传染病,严重威胁着我国养猪业和人类健康。

关键词：猪链球菌人畜共患病病原体疫苗

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2-型猪链球菌溶血素sly基因的克隆表达及活性研究

2-型猪链球菌溶血素sly基因的克隆表达及活性研究

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第九届全军流行病学、第八届全军防生物危害医学专业学术会议

作者：刘丽娜胡福泉朱军民赵岩潘渠李明唐家琪第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆 400038 南京军区疾病预防控制中心流行病微生物学研究所南京 210002 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆 400038 南京军区疾病预防控制中心流行病微生物学研究所南京 210002 南京军区疾病预防控制中心流行病微生物学研究所南京 210002

2-型猪链球菌(***)是一种重要的人畜共患病病原菌。迄今,国外报告的人类感染病例已达200余人,但多为散在发病.近来,我国江苏省(1998年)和四川省(2005年)分别暴发了人感染2-型猪链球菌事件,出现了"中毒性休克综合征"(STSS)这... 详细信息

2-型猪链球菌(***)是一种重要的人畜共患病病原菌。迄今,国外报告的人类感染病例已达200余人,但多为散在发病.近来,我国江苏省(1998年)和四川省(2005年)分别暴发了人感染2-型猪链球菌事件,出现了"中毒性休克综合征"(STSS)这一新的临床类型(以往仅见于A群链球菌感染),病死率高达60％~80％,引起了全世界的巨大关注。2-型猪链球菌致病机理复杂,虽有诸多研究,但尚未明确。已知的与2-型猪链球菌致病性相关的毒力因子主要有荚膜多糖(CPS)、溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外因子(EF)、溶血素(SLY)、粘附素(Adbesin)、谷氨酸脱氢酶(GDH)和IgG结合蛋白(热休克蛋白家族成员)等,其中,溶血素是重要的毒力因子之一,体外实验证实溶血素能增强了猪链球菌强毒株对上皮细胞的侵袭和对细胞的裂解。

关键词：猪链球菌溶血素基因克隆致病机理人畜共患病病原菌

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日本脑炎病毒基因片段-GM-CSF双顺反子表达载体的构建

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第三军医大学学报 2006年第10期28卷 1019-1021页

作者：高娜彭涛陈炜张俊磊王嘉丽万颖杰陈宗涛李东英田衍平安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的利用分子生物学技术,构建pCAG- JG双顺反子真核表达质粒,为研制新型的日本脑炎病毒(Japanese encephalitisvirus,JEV)核酸疫苗奠定基础。方法RT PCR扩增JEV的prM- E- NS1和小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophageco... 详细信息

目的利用分子生物学技术,构建pCAG- JG双顺反子真核表达质粒,为研制新型的日本脑炎病毒(Japanese encephalitisvirus,JEV)核酸疫苗奠定基础。方法RT PCR扩增JEV的prM- E- NS1和小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophagecolony stimulatingfactor,GM -CSF)后,分别克隆入中间载体pIRES,经酶切获得prM- E- NS1IRES- GM -CSF片段,并将其插入pCAGGSP7质粒,鉴定阳性重组子。结果成功的将prM- E -NS1IRES- GM- CSF片段插入到pCAGGSP7质粒,测序鉴定结果正确,该质粒命名为pCAG- JG。结论成功的构建了pCAG JG双顺反子真核表达质粒。

关键词：日本脑炎病毒 GM-CSF pCAG-JG

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肽抗生素hPAB-β制备工艺中基因工程菌的改建

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第三军医大学学报 2006年第22期28卷 2243-2246页

作者：张椿丛延广胡福泉饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的通过重新构建新的3拷贝串联体基因工程菌phPAB-β(3)/M15,在原有肽抗生素hPAB-β制备工艺路线基础上,使发酵后目的肽的最终产量得到提高。方法重新构建含有重组质粒pQE31-hPAB-β(3)的基因工程菌M15,然后筛选出能够稳定而且高效表... 详细信息

目的通过重新构建新的3拷贝串联体基因工程菌phPAB-β(3)/M15,在原有肽抗生素hPAB-β制备工艺路线基础上,使发酵后目的肽的最终产量得到提高。方法重新构建含有重组质粒pQE31-hPAB-β(3)的基因工程菌M15,然后筛选出能够稳定而且高效表达目标蛋白的最佳工程菌株,进行传代稳定性分析,并明确新建工程菌中目标融合蛋白的表达形式和亲和层析的效果,最后通过相同条件下,在逐步放大的发酵规模(1L摇瓶,3.7L和10L发酵罐),与以往的3拷贝串联体工程菌phPAB-β(3)/JM109进行对比研究(湿菌产量、目标蛋白表达率),同时观察新建工程菌在10L发酵中目标蛋白的表达和遗传稳定性。结果筛选出的最佳工程菌株的目标蛋白的表达效率为34.8%,经LB培养传代10次后,点种LB(AMP、KAN)平板,生长率为100%,质粒保存率达100%。在1L摇瓶,3.7L和10L发酵罐的发酵规模下,phPAB-β(3)/M15与phPAB-β(3)/JM109一样,目标融合蛋白都以包涵体形式表达,亲和层析效果相近,目标蛋白表达率无显著性差异(P>0·05),但发酵产量大于后者,有非常显著性差异(P<0·01)。且新建工程菌在10L发酵中发酵产量达到55.15g/L,诱导表达后的第5小时,蛋白表达达到高峰,蛋白表达率为30.2%,重组质粒保存率为100%。结论新构建工程菌phPAB-β(3)/M15比起原来基因工程菌phPAB-β(3)/JM109,是更为理想且利于肽抗生素hPAB-β工业生产的基因工程菌。

关键词：肽抗生素 hPAB—β 发酵 M15

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抑制Blimp-1表达导致浆细胞去分化

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免疫学杂志 2006年第2期22卷 141-146页

作者：邓少丽胡福泉蹇锐蒋静程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的探讨转录因子Blimp-1在浆细胞发育中的作用。方法应用慢病毒载体稳定表达针对Blimp-1的siR-NA,抑制骨髓瘤细胞J558L中Blimp-1的表达。采用免疫荧光及流式细胞技术观察Blimp-1抑制前后细胞的免疫表型变化,半定量RT-PCR检测XBP-1J、-c... 详细信息

目的探讨转录因子Blimp-1在浆细胞发育中的作用。方法应用慢病毒载体稳定表达针对Blimp-1的siR-NA,抑制骨髓瘤细胞J558L中Blimp-1的表达。采用免疫荧光及流式细胞技术观察Blimp-1抑制前后细胞的免疫表型变化,半定量RT-PCR检测XBP-1J、-chainc、-myc、BCMA的变化。结果Blimp-1抑制后,浆细胞表面标志CD138表达显著下降,B淋巴细胞免疫标志CD19表达增加。同时,与浆细胞功能及存活密切相关的XBP-1、J-chain、BCMA基因表达下降,而促进B淋巴细胞增殖发育的c-myc表达上升。结论浆细胞中Blimp-1被抑制后,浆细胞发育程序出现再编程,发生了去分化现象,返回到更早期的发育阶段,提示Blimp-1特异性shRNA有可能用于浆细胞相关疾病的治疗。

关键词： Blimp-1 浆细胞细胞发育 BCMA RNA干扰

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