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第二十一届全军烧伤外科学术会议

作者：吴军杨俊杰彭彦孟甘成军贾雄飞陈希炜程文广袁顺宗张小容葛良鹏魏泓黄正根罗高兴贺伟峰谭江琳王晓娟胡婕杨世伟彭旭创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，第三军医大学西南医院全军烧伤研究所，重庆，400038 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室，重庆，400038

随着干细胞及组织工程的发展，创伤修复取得了很大的进步，然而如何提高大面积烧创伤患者的愈后功能、改善其生活质量仍旧是医学工作者面临的巨大挑战。近年有研究表明特定胎龄的猪或者人胚胎前体组织/器官(肝、肾、胰、脾等)异种移植... 详细信息

随着干细胞及组织工程的发展，创伤修复取得了很大的进步，然而如何提高大面积烧创伤患者的愈后功能、改善其生活质量仍旧是医学工作者面临的巨大挑战。近年有研究表明特定胎龄的猪或者人胚胎前体组织/器官(肝、肾、胰、脾等)异种移植后既能够生长发育成为相应的成熟组织(或器官)又不形成畸胎瘤，且能发挥一定的生理功能。胎猪皮肤前体组织是否也具有这种特性呢?我们对此做了系统的研究。目的拟解决大面积烧、创伤后创面覆盖材料来源，改善创面愈合质量等问题，我们系统评价了5个不同胎龄的胎猪皮肤前体组织的移植后生长潜能及成瘤性，探讨其应用于大面积烧、创伤创面的可能性及其可能的机理。

关键词：大面积烧创伤创面修复胚胎皮肤前体组织愈合质量愈后功能

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整合素β1在微粒皮混合移植中的异位表达及定量分析

整合素β1在微粒皮混合移植中的异位表达及定量分析

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：林恒彭代智严泉周新刘敬创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学西南医院全军烧伤研究所重庆市器官移植研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室第三军医大学基础医学部实验动物学教研室

目的:初步探索自异体微粒皮混合移植促进创面愈合的机理。方法:建立自异体微粒皮混合移植大鼠动物模型。实验分两部分,第一部分分为三组:(1)自体皮组,移植面积扩张比为10:1的自体微粒皮;(2)混合1组,自异体微粒皮移植面积扩张比各为10:1;... 详细信息

目的:初步探索自异体微粒皮混合移植促进创面愈合的机理。方法:建立自异体微粒皮混合移植大鼠动物模型。实验分两部分,第一部分分为三组:(1)自体皮组,移植面积扩张比为10:1的自体微粒皮;(2)混合1组,自异体微粒皮移植面积扩张比各为10:1;(3)混合2组,自异体微粒皮移植面积扩张比分别为10:1和10:3。第二部分也分为三组:(1)自体皮组,移植面积扩张比为20:1的自体微粒皮;(2)混合1组,自异体微粒皮移植面积分别为20:1和20:3;(3)混合2组,自异体微粒皮移植面积扩张比分别为20:1和20:6。于混合移植术后从各组大鼠愈合创面取样,第一部分动物实验取样时间为术后2、3、4周,第二部分动物实验取样时间为术后3、4周,每组动物每个时相点取3个标本。然后进行HE染色和整合素β1(Integrinβ1)免疫组织化学染色,并对表皮层厚度进行显微测量,然后软件测定、比较各组标本中整合素β1的表达情况。结果:(1)HE染色:微粒皮移植后大鼠创面的表皮层厚度明显增加,真皮内有不同程度的血管扩张和单个核细胞浸润;(2)术后2～4周,第一部分动物实验中两个混合组大鼠皮肤表皮层厚度均明显厚于自体皮组(p<0.05);术后3～4周,第二部分动物实验中两个混合组大鼠皮肤表皮层厚度均明显厚于自体皮组(p<0.05)。(3)混合移植术后各组新生表皮中均可见整合素β1阳性细胞,以棘细胞层和颗粒层为主。术后2周,第一部分实验中混合组整合素β1的表达情况明显强于自体皮组(p<0.01),且混合1组的表达也要明显强于混合2组(p<0.01);术后3～4周,混合1组的表达仍然明显强于自体皮组和混合2组(p<0.01)。第二部分实验仅在术后3周时混合2组整合素β1的表达要高于自体皮组(p<0.05)。结论:在自异体微粒皮混合移植中,整合素β1的异位表达和表达增强与表皮细胞的增殖分化、创面再上皮化以及表皮层增厚有密切关系,而且在自异体微粒皮混合移植促进创面愈合的过程中,整合素β1表达阳性细胞很可能发挥了重要的作用。

关键词：微粒皮扩张比混合移植整合素异位表达定量分析

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应用胚胎皮肤前体组织修复皮肤创面的实验研究

应用胚胎皮肤前体组织修复皮肤创面的实验研究

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：吴军黄正根罗高兴贺伟峰谭江琳王晓娟胡婕杨世伟彭旭杨俊杰彭彦孟甘成军贾雄飞陈希炜程文广袁顺宗张小容葛良鹏魏泓创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学西南医院全军烧伤研究所重庆市器官移植研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室第三军医大学基础医学部实验动物学教研室

随着干细胞及组织工程的发展,创伤修复取得了很大的进步,然而如何提高大面积烧创伤患者的愈后功能、改善其生活质量仍旧是医学工作者面临的巨大挑战。近年有研究表明特定胎龄的猪或者人胚胎前体组织/器官(肝、肾、胰、脾等)异种移植后... 详细信息

随着干细胞及组织工程的发展,创伤修复取得了很大的进步,然而如何提高大面积烧创伤患者的愈后功能、改善其生活质量仍旧是医学工作者面临的巨大挑战。近年有研究表明特定胎龄的猪或者人胚胎前体组织/器官(肝、肾、胰、脾等)异种移植后既能够生长发育成为相应的成熟组织(或器官)又不形成畸胎瘤,且能发挥一定的生理功能。胎猪皮肤前体组织是否也具有这种特性呢?我们对此做了系统的研究。

关键词：皮肤创面组织修复

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自体脂肪颗粒及微粒皮混合移植对大面积深度烧伤创面术后质量影响的临床研究

自体脂肪颗粒及微粒皮混合移植对大面积深度烧伤创面术后质量影响...

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：刘顺利彭毅志李晓鲁创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学西南医院全军烧伤研究所重庆市器官移植研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室第三军医大学基础医学部实验动物学教研室

目的:观察大面积深度烧伤患者自体脂肪颗粒及微粒皮混合移植对创面术后功能的作用,并初步探讨其机制方法:符合条件的20病例,按照入院先后顺序编号,自身对照,双侧肢体对称部位创面随机分为试验组与对照组,对照组采用自体微粒皮移植,试验... 详细信息

目的:观察大面积深度烧伤患者自体脂肪颗粒及微粒皮混合移植对创面术后功能的作用,并初步探讨其机制方法:符合条件的20病例,按照入院先后顺序编号,自身对照,双侧肢体对称部位创面随机分为试验组与对照组,对照组采用自体微粒皮移植,试验组采用自体微粒皮+脂肪颗粒(按照体积比1:1)混合移植。术后2周、5周、10周测定创面挛缩程度,术后30天、60天、90天观察患肢肘/膝关节活动度,SPSS软件比较两组间差异。术后7天、14天、21天、28天切取部分创面组织作组织切片HE染色。结果:(1)移植术后30天、60天、90天试验组肘/膝关节自主活动最大角度平均为(38.3±.62)°、(55.37±7.07)°、(61.57±8.12)°,均明显大于对照组(20.1±2.83)°、(37.00±6.33)°、(46.00±8.25)°(p<0.01)。(2)移植术后30天、60天、90天试验组30秒内肘/膝关节达到自主活动最大角度的活动次数依次为2.25±0.25、5±1.89、6.43±0.81,均明显大于对照组1.25±0.16、2.0±1.89、3.43±0.20(p<0.01)。(3)移植术后14天、35天试验组创面收缩率为(5.67±0.48)%、(6.64±0.78)%,与对照组(5.51±0.38)%、(7.90±1.65)%相比(p>0.05),无明显差异;移植术后70天试验组创面收缩率为(9.14±0.82)%,与对照组(11.25±1.25)%相比(p<0.05),有显著差别。(4)HE染色显示试验组上皮化早于对照组,胶原纤维排列较整齐。结论:自体脂肪颗粒及微粒皮混合移植后,能够明显提高深度烧伤创面的愈合质量,改善关节功能。

关键词：微粒皮大面积深度烧伤混合移植体脂肪临床研究

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慢病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白转基因小鼠的建立

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第三军医大学学报 2008年第10期30卷 885-889页

作者：刘勤张晋宇王露露刘昌峨王勇万瑛第三军医大学基础医学部动物学教研室重庆 400038 第三军医大学全军免疫学研究所重庆 400038

目的以慢病毒作为载体,制作增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠,建立慢病毒介导的转基因动物制备技术平台。方法慢病毒包装采用三质粒系统。3个质粒分别为转基因质粒FUGW、病毒结构蛋白表达质粒psPAX2以及病毒包膜蛋白表达质粒pMD2.G... 详细信息

目的以慢病毒作为载体,制作增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠,建立慢病毒介导的转基因动物制备技术平台。方法慢病毒包装采用三质粒系统。3个质粒分别为转基因质粒FUGW、病毒结构蛋白表达质粒psPAX2以及病毒包膜蛋白表达质粒pMD2.G。病毒包装时,用磷酸钙沉淀法将三质粒共转染来源于人胚肾细胞系的293FT细胞,培养48h后,收取含病毒的上清,并通过高速离心浓缩病毒。将含浓缩病毒液作梯度稀释后感染293FT细胞,通过流式细胞计数仪测定病毒滴度。用显微注射法将浓缩的病毒液注射至FVB/N小鼠1-细胞期胚胎透明带下。在荧光显微镜下观察胚胎EGFP的表达。将注射后发育至2-细胞期的胚胎移植至假孕受体母鼠,得F0代小鼠。通过紫外光照射观测EGFP在小鼠活体内的表达水平。结果病毒液浓缩前的滴度≥106TU/ml(transducing unit,TU),经过高速离心对病毒进行浓缩和纯化,其滴度达到109TU/ml以上。将浓缩病毒液注射至小鼠1-细胞期胚胎透明带下,注射后胚胎的2-细胞期卵裂率为81.8%(1189/1453),利用荧光显微镜分别在注射后60、84、132h观察胚胎,均发现有较强荧光。在2-细胞期,每一视野下胚胎阳性率>90%,说明包装的病毒成功并高效地转染小鼠胚胎。胚胎移植后假孕母鼠妊娠率为42.9%(12/28),首建鼠阳性率为60.8%(73/120),转基因小鼠的总体研制效率(转基因小鼠数/注射胚胎数)为5.0%(73/1453)。将F0代EGFP转基因小鼠分别与野生型小鼠交配,在其F1、F2、F3代小鼠中均获得了EGFP阳性小鼠,阳性率分别为91.4%(32/35)、93.8%(30/32)、93.1%(27/29)。结论通过慢病毒载体感染小鼠1-细胞期胚胎可有效地制备转基因小鼠。我们已初步建立了慢病毒介导的转基因小鼠制备技术体系。

关键词：慢病毒载体增强型绿色荧光蛋白转基因小鼠

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2种腺相关病毒介导的增强型绿色荧光蛋白对人成纤维细胞转染效率的研究

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第三军医大学学报 2008年第12期30卷 1111-1113页

作者：郑钧丰孔永葛良鹏魏泓第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038 西南大学生命科学院重庆400017

目的比较2种不同腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的增强型绿色荧光蛋白对人皮肤成纤维细胞(human fibroblast,HFB)的转染效率。方法原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定,按照感染复数(multiple of in-fection,MOI)为104、10... 详细信息

目的比较2种不同腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的增强型绿色荧光蛋白对人皮肤成纤维细胞(human fibroblast,HFB)的转染效率。方法原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定,按照感染复数(multiple of in-fection,MOI)为104、105、106转染传2代的人成纤维细胞,流式细胞检测AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP对HFB的转染效率,倒置荧光显微镜观察转染后的荧光强度。MTT法检测AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP对HFB的毒性。结果腺相关病毒AAV2-EGFP对HFB的转染效率随着MOI增加而增高,MOI为104时转染效率为(7.68±1.18)%,当MOI达到105后,转染效率稳定在(22.16±5.59)%,随着MOI增加,最高至MOI 106转染效率无显著提高。而病毒AAV2/1对于HFB的转染效率在MOI为106转染效率仅为(3.47±0.93)%。2种病毒在转染过程中,细胞生长正常,MTT显示各转染组与未转染组的吸光度值无统计学差异。结论AAV2载体对体外培养的HFB转染效率高于AAV2/1,但2种病毒载体对人皮肤成纤维细胞转染效率均不高,AAV2/1-EGFP对HFB几乎无感染能力。

关键词：腺相关病毒人皮肤成纤维细胞增强型绿色荧光蛋白流式细胞

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GPIF对免疫损伤小鼠T淋巴细胞膜表面共刺激分子表达的影响

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中国病理生理杂志 2008年第9期24卷 1845-1849页

作者：方廖琼傅晓岚牛荣纪贤文魏泓西南大学生物技术学院重庆400715 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部动物学教研室重庆400038

目的:分析羊胎盘免疫调节因子(GPIF)对BALB/c小鼠T淋巴细胞共刺激表面抗原分子表达及其细胞因子分泌的影响,探讨羊胎盘免疫调节因子免疫促进作用机理。方法:60Coγ-ray辐射所致免疫抑制小鼠连续7 d腹腔注射GPIF,流式细胞分析术分析BALB/... 详细信息

目的:分析羊胎盘免疫调节因子(GPIF)对BALB/c小鼠T淋巴细胞共刺激表面抗原分子表达及其细胞因子分泌的影响,探讨羊胎盘免疫调节因子免疫促进作用机理。方法:60Coγ-ray辐射所致免疫抑制小鼠连续7 d腹腔注射GPIF,流式细胞分析术分析BALB/c小鼠脾细胞表达CD28+、CD152+单阳性细胞百分率,表达CD4+CD28+、CD8+CD28+、CD4+CD152+、CD8+CD152+双阳性细胞百分率;ELISA法检测小鼠血清IL-2、IFN-γ分泌水平。结果:羊胎盘免疫调节因子显著提高免疫损伤小鼠脾淋巴细胞CD28+、CD4+CD28+、CD8+CD28+阳性细胞百分率(P<0.05,P<0.01),降低CD152+、CD4+CD152+阳性细胞百分率(P<0.05,P<0.01),提高小鼠血清IL-2、IFN-γ分泌水平(P<0.01)。结论:羊胎盘免疫调节因子的免疫促进作用与其调节T淋巴细胞CD28、CD152共刺激分子通路的活化信号传递,降低T淋巴细胞的功能抑制,促进T淋巴细胞的活化有关。活化的T淋巴细胞分泌细胞因子IL-2、IFN-γ,参与细胞因子介导的免疫网络调节。

关键词：胎盘免疫调节因子 T淋巴细胞细胞因子类

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胎猪皮肤前体组织异种移植研究

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中华烧伤杂志 2008年第6期24卷 437-440页

作者：黄正根吴军罗高兴贺伟峰甘成军袁顺宗贾雄飞谭江琳王晓娟葛良鹏魏泓第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室

目的系统筛选猪胚胎皮肤前体组织异种移植的最佳妊娠时间窗，了解其创面修复能力。方法取胎龄35、42、56、70d的胎猪皮肤前体组织，制成微粒后移植于BABL／c裸鼠背部创面，以整形患者术后剩余皮肤或者成年猪皮覆盖。观察术后移植物生长... 详细信息

目的系统筛选猪胚胎皮肤前体组织异种移植的最佳妊娠时间窗，了解其创面修复能力。方法取胎龄35、42、56、70d的胎猪皮肤前体组织，制成微粒后移植于BABL／c裸鼠背部创面，以整形患者术后剩余皮肤或者成年猪皮覆盖。观察术后移植物生长发育特性，并于移植后6、12周取材，用组织学方法观察其形态结构及成瘤性。结果胎猪皮肤前体组织移植后具有如下特点：（1）能成活并继续生长发育，微粒可融合成片；胎龄35、42、56、70d的前体组织移植后12周，新生组织面积分别为（18±8）、（47±6）、（31±12）、（20±8）mm^2，其中胎龄42d的组织与其余三者比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）新生（猪）皮肤组织具有表皮层和真皮层，真皮乳头明显。（3）能生长成为具有毛发、皮脂腺及汗腺等皮肤附属器的“完整”皮肤，且表皮层有黑素细胞。（4）胎龄56、70d的胎猪皮肤前体组织移植后未出现畸胎瘤。结论胎龄56d的胎猪皮肤前体组织可用于异种移植修复皮肤创面。

关键词：移植异种胚胎皮肤前体组织创面修复

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胎猪皮肤前体组织异种移植模型的研究

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第三军医大学学报 2008年第22期30卷 2072-2074页

作者：黄正根吴军罗高兴甘成军程文广贾雄飞葛良鹏魏泓第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市器官移植基础研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的探讨胎猪皮肤前体组织异种移植模型及移植后发育过程。方法取精确胎龄为56d的胎猪皮肤前体组织,分组进行移植,①背部创面模型组:制备成微粒皮后移植到BALB/c裸鼠背部创面,以人尸体皮覆盖;背部皮下模型组:制备成小张邮票皮,植入裸鼠... 详细信息

目的探讨胎猪皮肤前体组织异种移植模型及移植后发育过程。方法取精确胎龄为56d的胎猪皮肤前体组织,分组进行移植,①背部创面模型组:制备成微粒皮后移植到BALB/c裸鼠背部创面,以人尸体皮覆盖;背部皮下模型组:制备成小张邮票皮,植入裸鼠背部皮下;耳廓皮下模型组:制备成微粒皮植入裸鼠耳廓皮下。各组于移植后观察其生长发育特性,并于移植后6周和12周取材行HE染色观察其组织结构形态。新生组织块大小采用双样本t检验。结果各模型的胎猪皮肤前体组织移植后均能存活并继续生长,背部创面模型组生长能力显著大于耳廓皮下模型组,新生皮肤组织均具有真皮和表皮,耳廓皮下模型的真皮附属器仅见毛囊(毛发),偶见皮脂腺,未见汗腺,但是背部创面模型组及背部皮下模型组不仅能发育成毛囊(毛发)、还见大量皮脂腺和汗腺。结论背部创面移植模型最适合于胎猪皮肤前体组织异种移植及移植后发育的研究。

关键词：贵州香猪 BALB/c裸鼠皮肤前体组织异种移植移植模型

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残留剂量恩诺沙星对SPF小鼠肠道微生态的影响

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中国比较医学杂志 2008年第12期18卷 37-41页

作者：雷艳贺永亮袁静唐欢魏泓第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038 西南大学生命科学学院重庆400715

目的通过分析残留剂量恩诺沙星对SPF级小鼠肠道菌群耐药性、定植抗力的影响,评估现行恩诺沙星ADI值的微生物安全性。方法采用SPF级KM小鼠,通过饮水连续给药恩诺沙星35 d,给药剂量分别为0、0.005、0.05、0.55、mg/kg d。实验内容由两个... 详细信息

目的通过分析残留剂量恩诺沙星对SPF级小鼠肠道菌群耐药性、定植抗力的影响,评估现行恩诺沙星ADI值的微生物安全性。方法采用SPF级KM小鼠,通过饮水连续给药恩诺沙星35 d,给药剂量分别为0、0.005、0.05、0.55、mg/kg d。实验内容由两个独立的平行实验构成,实验一观察菌群耐药率的变化;实验二在给药恩诺沙星10 d后,灌胃接种白假丝酵母菌,观察小鼠肠道内白假丝酵母菌的清除情况。结果0.55、mg/kg d剂量组的总需氧菌及总厌氧菌的耐药率明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。0.55、mg/kg d剂量的恩诺沙星可降低小鼠肠道菌群对外源性白假丝酵母菌的清除力。结论未观察到0.05 mg/kg d恩诺沙星剂量(对应于现行ADI值)对小鼠肠道菌群的影响,当剂量大于0.05 mg/kg d时,可能对小鼠肠道微生态造成负面影响,说明我国现行恩诺沙星ADI值安全性较好,不会对人体肠道菌群造成负面影响。

关键词：恩诺沙星残留肠道菌群小鼠,SPF级

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