检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2007年第5期47卷 810-816页

作者：黄留玉史兆兴袁静胡福泉军事医学科学院疾病预防控制研究所北京100071 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

采用cDNA微阵列技术检测了HeLa细胞被痢疾杆菌侵袭1h和3h后的基因表达变化,共发现2倍以上差异表达基因752个,上调基因有509个,下调基因有306个,并初步推测HeLa细胞通过激活某些信号通路,诱导表达多个基因,产生整体的细胞效应,以对抗痢... 详细信息

采用cDNA微阵列技术检测了HeLa细胞被痢疾杆菌侵袭1h和3h后的基因表达变化,共发现2倍以上差异表达基因752个,上调基因有509个,下调基因有306个,并初步推测HeLa细胞通过激活某些信号通路,诱导表达多个基因,产生整体的细胞效应,以对抗痢疾杆菌的侵袭。对显著差异表达的两个基因TNFR 1B和ERBB2,在痢疾杆菌侵袭HeLa细胞1h和3h后的表达量经荧光实时定量PCR验证,确定这两个基因的确在痢疾杆菌侵袭期间高表达,它们在细胞对痢疾杆菌2457T侵袭反应中起重要的作用。这些结果促进了对痢疾杆菌分子致病机理的认识,也为形成预防和治疗痢疾的策略提供了理论基础。

关键词：痢疾杆菌福氏2a HeLa细胞 cDNA微阵列技术荧光实时定量PCR 信号通路

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

结核分枝杆菌PstS1-U1融合抗原的表达、纯化及其免疫活性测定

引用

第三军医大学学报 2007年第15期29卷 1473-1476页

作者：丛延广刘利陈志瑾饶贤才胡晓梅李明胡勇胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 解放军324医院检验科重庆400020

目的为获得一种适于本地结核病临床诊断用抗原,将结核分枝杆菌38×103抗原——即磷酸盐传送蛋白1(phosphate transport system protein l,PstS1)和尿蛋白1(urine protein1,U1)进行融合表达、纯化并测定其抗原活性。方法用基因拼接... 详细信息

目的为获得一种适于本地结核病临床诊断用抗原,将结核分枝杆菌38×103抗原——即磷酸盐传送蛋白1(phosphate transport system protein l,PstS1)和尿蛋白1(urine protein1,U1)进行融合表达、纯化并测定其抗原活性。方法用基因拼接法将结核分枝杆菌编码PstS1和U1蛋白的基因拼接在一起,克隆到原核表达载体pET28a中,通过IPTG诱导实现其高效表达,采用亲和层析纯化表达产物。用纯化的融合抗原免疫家兔获得抗血清,用该血清以及活动性肺结核患者血清对纯化产物的抗原活性进行测定。结果成功构建了原核表达质粒,对表达产物进行亲和层析纯化,获得相对分子质量为57×103的目的蛋白。经Western blot检测融合抗原能够与活动性肺结核患者血清中的抗体发生结合。结论本研究表达并纯化出PstS1-U1融合抗原,为进一步的应用奠定基础。

关键词：结核分枝杆菌融合抗原原核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

登革病毒及其E蛋白和NS3蛋白对HepG2细胞中GSH水平的影响

引用

第三军医大学学报 2007年第24期29卷 2311-2314页

作者：江雯田衍平刘丽梅陈炜陈宗涛高娜徐小峰安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室西南医院病理学研究所重庆400038 第三军医大学西南医院病理学研究所

目的通过对登革病毒感染后不同时相点以及稳定表达登革病毒E蛋白和NS3蛋白的HepG2细胞中GSH水平的测定,确定登革病毒感染后细胞内GSH水平的变化规律,以及登革病毒蛋白的表达对HepG2细胞内GSH水平的影响。方法用分光光度计比色定量检测... 详细信息

目的通过对登革病毒感染后不同时相点以及稳定表达登革病毒E蛋白和NS3蛋白的HepG2细胞中GSH水平的测定,确定登革病毒感染后细胞内GSH水平的变化规律,以及登革病毒蛋白的表达对HepG2细胞内GSH水平的影响。方法用分光光度计比色定量检测登革病毒2型感染后不同时相点以及稳定表达登革病毒E蛋白和NS3蛋白的HepG2细胞中GSH水平的变化。结果总体来说,登革病毒2型感染后48h内,HepG2细胞内GSH的水平呈下降趋势,其中以感染后的30min、2h和24h细胞内GSH变化最为明显,与模拟感染组和其他时相点比较,均有显著差异;而稳定表达登革病毒E蛋白和NS3蛋白的HepG2细胞内GSH的水平也均较空质粒对照组降低。结论登革病毒2型感染HepG2细胞,可使细胞内的GSH下降,且呈现阶段性,推测可能与病毒的吸附、穿入、蛋白质合成、释放等过程有关,且登革病毒E蛋白和NS3蛋白在细胞内的表达也能一定程度地降低其GSH水平。

关键词：登革病毒 HepG2细胞 GSH

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

HeLa细胞感染痢疾杆菌前后差异表达的新EST序列的电子延伸及验证

引用

世界华人消化杂志 2007年第17期15卷 1905-1913页

作者：黄留玉史兆兴袁静胡福泉军事医学科学院疾病预防控制所北京市100071 中国人民解放军第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆市400038

目的:研究痢疾杆菌福氏2a入侵前和入侵后3h的人上皮细胞差异表达的新基因.方法:采用增毒的痢疾杆菌福氏2a 2457T侵袭HeLa细胞,检查HeLa细胞中细菌的数量并用RT-PCR方法从HeLa细胞中提取总RNA,制备探针.采用含有约3000个代表新基因的芯... 详细信息

目的:研究痢疾杆菌福氏2a入侵前和入侵后3h的人上皮细胞差异表达的新基因.方法:采用增毒的痢疾杆菌福氏2a 2457T侵袭HeLa细胞,检查HeLa细胞中细菌的数量并用RT-PCR方法从HeLa细胞中提取总RNA,制备探针.采用含有约3000个代表新基因的芯片进行芯片杂交,分析杂交结果.将所获得的新的156条EST序列为种子序列用cDNA微阵列实验,以人类EST数据库为基础库,应用siClone软件进行EST拼接、校对并尽可能延长获得大片段或全长cDNA.选取基因组未注释的编码区序列作为新基因进行RT-PCR实验验证.结果:共鉴定到≥3倍或≤0.33的差异表达的代表新基因的EST序列45条,其中25个延伸序列鉴定为与重要的肠道功能相关的已知基因,并有3个在痢疾杆菌侵袭期间高表达的存在显著差异的新EST序列,他们分别名为:NPCCKH12、ADBCSB02和HTBAMG05,这3个基因是新的人基因或假基因.结论:鉴定出了在HeLa细胞感染痢疾杆菌前后差异表达的新EST序列,为进一步研究痢疾杆菌与寄主相互作用奠定了基础.

关键词：痢疾杆菌福氏2a 表达序列标签:cDNA微阵列电子延伸反转录聚合酶链反应基因鉴定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

稳定表达人胰岛素原突变基因的HepG2细胞构建及其胰岛素分泌

引用

第三军医大学学报 2007年第24期29卷 2361-2363页

作者：郑宏庭邓华聪兰丽珍方芳刘金波李丙蓉蹇锐重庆医科大学附属第一医院内分泌科重庆400016 第三军医大学新桥医院内分泌科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的构建稳定表达人胰岛素原突变(mutated human proinsulin,mhPINS)基因的HepG2细胞,将HepG2细胞改建为具有胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"(artificial beta cell)。方法重组逆转录病毒载体pL-mhPINS-SN转包装细胞PA317,经G... 详细信息

目的构建稳定表达人胰岛素原突变(mutated human proinsulin,mhPINS)基因的HepG2细胞,将HepG2细胞改建为具有胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"(artificial beta cell)。方法重组逆转录病毒载体pL-mhPINS-SN转包装细胞PA317,经G418筛选,NIH3T3细胞测定病毒滴度,获取高滴度的稳定产毒细胞克隆,以PCR进行鉴定。以mhPINS病毒感染HepG2细胞,经G418筛选,对HepG2/mhPINS细胞进行RT-PCR、Western blot、放免法鉴定,并行葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测。结果所获HepG2/mhPINS细胞生长良好,RT-PCR获得286bp目的条带,Western blot检测可见34×103的特异性条带,放免法在其培养上清中检测到胰岛素与C肽,而HepG2/pLXSN细胞上述各项检测均为阴性。葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测显示,HepG2/mhPINS细胞在不同葡萄糖浓度(0.1、10、20mmol/L)条件下引起的胰岛素分泌无显著性差异(P>0.05)。结论成功构建稳定表达mhPINS基因的HepG2细胞,其内获得成熟胰岛素的表达与分泌,但其胰岛素分泌对葡萄糖刺激缺乏反应。

关键词： mhPINS基因逆转录病毒 HepG2细胞胰岛素

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

转录因子Blimp-1的原核表达、纯化及抗体制备

引用

第三军医大学学报 2006年第3期28卷 205-207页

作者：邓少丽胡福泉蹇锐饶贤才蒋静程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的获得B limp-1纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究浆细胞发育的调控奠定基础。方法采用PCR方法从B limp-1质粒中克隆B limp-1编码前350个氨基酸的基因片段,构建B limp-1与6个H is的融合蛋白原核表达质粒,进行原核表达与蛋白纯化后,免疫... 详细信息

目的获得B limp-1纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究浆细胞发育的调控奠定基础。方法采用PCR方法从B limp-1质粒中克隆B limp-1编码前350个氨基酸的基因片段,构建B limp-1与6个H is的融合蛋白原核表达质粒,进行原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备B limp-1多抗。采用ELISA方法检测其效价,W estern检验抗体特异性及在骨髓瘤细胞株中的表达。结果构建了表达B limp-1前350个氨基酸的原核表达质粒PQE-B limp-1,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,得到分子量约46×103的融合蛋白,免疫家兔后得到多抗血清。ELISA显示抗体效价达1/20 000。W esternb lot结果显示此多克隆抗体与B limp-1蛋白特异性结合,并在骨髓瘤细胞中表达。结论本研究获得B limp-1纯化蛋白,制备了B limp-1多克隆抗体,为进一步研究B limp-1的作用机制及与血液疾病间的关系奠定了基础。

关键词： Blimp-1 原核表达抗体制备

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

IFN-β基因启动子调控区域的分析及IRF-3报告基因的构建

引用

第三军医大学学报 2006年第9期28卷 896-899页

作者：蒋静胡福泉蹇锐张伟邓少丽程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞... 详细信息

目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞系后观察细胞对LPS刺激的反应。结果IFN-β启动子PRD调控区域上游序列、PRD I区,PRD II区和PRD IV区缺失后,LPS同样能诱导EGFP报告基因的表达。只保留PRD区及IFN-β启动子核心区的载体转染Raw264.7细胞后,可以在LPS刺激下诱导EGFP报告基因的高表达。结论构建了能检测IRF-3活性的报告基因载体,为进一步研究LPS激活IRF-3的信号转导通路奠定了基础。

关键词： IRF-3 IFN-β 启动子调控元件报告基因

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

难测序噬菌体基因组PaP1的大片段克隆及测序

引用

第三军医大学学报 2006年第6期28卷 539-542页

作者：李明申晓冬丛延广谭银玲饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛... 详细信息

目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛选阳性克隆进行测序。结果AatⅡ将PaP1基因组切成8个片段,通过大片段克隆共获得3个阳性克隆,测出插入片段大小分别为9 805、8 335 bp和3 465 bp,使该难测序基因组的测出量达到47 757 bp。结论大片段克隆策略能够克服鸟枪法测序的不足,将有望获得噬菌体PaP1的全基因组序列。

关键词：大片段克隆噬菌体基因组测序 PaP1

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

光化学作用增强阳离子聚合物介导EGFP转染结肠癌

引用

第三军医大学学报 2006年第9期28卷 922-925页

作者：肖卫东陈炜陈祖林刘嘉葛海燕第三军医大学新桥医院普通外科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响。方法以结肠癌细胞SW 480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2 a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2 a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用... 详细信息

目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响。方法以结肠癌细胞SW 480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2 a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2 a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用,同时以阳离子聚合物PEI为DNA载体,EGFP质粒为目的DNA,通过流式细胞技术对比观察光化学作用对阳离子聚合物介导EGFP质粒转染结肠癌细胞的影响。结果TPPS2 a在2种结肠癌细胞系呈颗粒状分布于细胞质;基于TPPS2 a的光动力效应对结肠癌细胞的生长抑制作用随光照剂量增大而逐渐加大,SW 480细胞取得IC50的光照时间为约6 m in,而HT29取得IC50的光照时间为约12 m in;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可将阳性细胞率分别提高至(29.61±1.15)(SW 480细胞)和(23.47±0.62)(HT29细胞)(P<0.05)。结论TPPS2 a的胞内分布与内吞密切相关;基于TPPS2 a的光化学细胞毒性作用呈剂量依赖性;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可明显提高阳离子聚合物介导转染目的DNA的阳性细胞率。

关键词：光敏剂光动力疗法阳离子聚合物转染

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

慢病毒携带shRNA对宫颈癌细胞中HPV16型E6表达的抑制作用

引用

第三军医大学学报 2006年第11期28卷 1218-1220页

作者：郭建新李力白垚程小星邓少丽郑秀惠第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的研究慢病毒携带的短发夹状干扰RNA(short hairp in RNA,shRNA)对宫颈癌Cask i细胞中人乳头瘤病毒(hum an pap illom a virus,HPV)16型E6表达的抑制作用。方法将靶向HPV16型E6的shRNA表达序列克隆到改建的慢病毒表达载体PLL3.7中,经... 详细信息

目的研究慢病毒携带的短发夹状干扰RNA(short hairp in RNA,shRNA)对宫颈癌Cask i细胞中人乳头瘤病毒(hum an pap illom a virus,HPV)16型E6表达的抑制作用。方法将靶向HPV16型E6的shRNA表达序列克隆到改建的慢病毒表达载体PLL3.7中,经限制性酶切鉴定和测序后,与3种包装质粒混合,以L ipofectam ine 2000包裹后转染293FT细胞,72 h后收取含病毒的上清液并感染宫颈癌Cask i细胞,感染48 h后加入G418筛选阳性克隆。每天对阳性细胞克隆进行细胞计数;提取细胞总mRNA,进行RT-PCR反应。结果与对照组相比HPV16型E6的表达降低70%,宫颈癌Cask i细胞生长速度减慢50%。结论慢病毒携带的短发夹状干扰RNA能干扰宫颈癌细胞中HPV16型E6的表达并有抑制癌细胞生长的作用。

关键词：宫颈癌慢病毒 RNA干扰人乳头瘤病毒

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：