检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2005年第15期27卷 1551-1554页

作者：罗雪汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转... 详细信息

目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转化BL21菌,用IPTG诱导表达,表达产物通过免疫印迹实验鉴定。结果获得了预期的扩增目的片段,成功构建了pMD-18T重组克隆载体,核苷酸测序结果与GenBank登录的人sCR1-SCR15-18 cD-NA序列一致。成功的构建了原核表达载体pET32-sCR1-SCR15-18,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,并在菌体内形成包涵体。免疫印迹实验显示,在分子量约43×103处出现单一条带的阳性结果。结论从单核细胞中克隆出sCR1-SCR15-18片段基因,人sCR1-SCR15-18在大肠杆菌中得到高效表达。

关键词：可溶性补体Ⅰ型受体反转录多聚酶链式反应互补DNA克隆蛋白质表达

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微管骨架在登革病毒感染ECV304细胞中作用的初步研究

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第三军医大学学报 2005年第7期27卷 628-631页

作者：陈炜王嘉丽彭涛陈宗涛高娜万颖杰张俊磊安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆微生物工程实验室重庆400038

目的　研究登革病毒在与ECV3 0 4细胞相互作用过程中细胞微管骨架的变化,以及微管在病毒释放过程中的作用。方法　用2型登革病毒感染ECV3 0 4细胞株,间接免疫荧光双染色技术观察微管和病毒抗原的分布;应用col cemid破坏微管骨架,检测细... 详细信息

目的　研究登革病毒在与ECV3 0 4细胞相互作用过程中细胞微管骨架的变化,以及微管在病毒释放过程中的作用。方法　用2型登革病毒感染ECV3 0 4细胞株,间接免疫荧光双染色技术观察微管和病毒抗原的分布;应用col cemid破坏微管骨架,检测细胞内外病毒滴度的变化,以明确微管是否参与病毒的复制。结果　登革病毒感染后ECV3 0 4细胞微管骨架的排列发生明显的变化,表现为3种类型:无序排列;围绕核形成环状结构;微管结成束状形成线状突触。间接免疫荧光双染色结果显示登革病毒抗原与微管共染,分布在微管组织中心。感染后8h ,药物组上清中的病毒滴度高于一般感染组,而细胞内的病毒滴度低于一般感染组。结论　登革病毒感染引起ECV3 0 4细胞微管的排列发生变化,可能是病毒感染造成了微管解聚,后者促进病毒的释放;药物的添加,加剧了对微管的破坏程度,从而进一步促进了病毒的释放。

关键词：登革病毒微管骨架 ECV304细胞

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP1生物学特性的研究

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第三军医大学学报 2005年第9期27卷 860-863页

作者：李明申晓冬周莹冰黄建军胡晓梅饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1的形态大小、核酸类型、裂菌特性、最佳感染复数和一步生长曲线等基本生物学特性。方法　对CsCl梯度离心纯化后的噬菌体PaP1颗粒进行电镜观察;提取PaP1基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型... 详细信息

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1的形态大小、核酸类型、裂菌特性、最佳感染复数和一步生长曲线等基本生物学特性。方法　对CsCl梯度离心纯化后的噬菌体PaP1颗粒进行电镜观察;提取PaP1基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型;制备PaP1的单个噬斑,观察噬斑特点;按照感染复数(MOI)分别为0 0 0 0 1、0 0 0 1、0 0 1、0 1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌,3 7℃160r/min培养3 5h后测定噬菌体滴度;加入噬菌体及宿主菌使MOI =10 ,3 7℃温育15min后进行一步生长实验,于0时刻和每隔10min取样5 0 μl测定上清中噬菌体滴度。结果　PaP1噬菌体头部呈多面体立体对称,直径约70nm ,无囊膜,有一个约60nm长的尾;PaP1噬斑直径约2mm ,圆形透明;当MOI为0 0 1时PaP1感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高;根据一步生长实验结果绘制出了一步生长曲线。结论　PaP1属于肌尾科裂菌性噬菌体,其基因组为双链DNA分子;最佳感染复数为0 0 1,感染宿主菌的潜伏期是2 0min ,爆发期是40min ,平均爆发量约为65。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体裂菌性,最佳感染复数一步生长曲线

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广州2002年登革病毒流行株的分离鉴定及进化分析

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第三军医大学学报 2005年第4期27卷 282-286页

作者：张俊磊蹇锐万颖杰彭涛安静张复春唐小平第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 广州市第八人民医院广州510060

目的　从 2 0 0 2年广州采集的可疑登革病人血清中分离登革病毒 ,明确流行株的血清型及基因型 ,并鉴定该分离株的毒力。方法　采集疑似登革热患者血清 2 0份 ,应用C6 3 6细胞体外培养的方法进行病毒分离 ,并合成登革病毒通用引物 ,进行... 详细信息

目的　从 2 0 0 2年广州采集的可疑登革病人血清中分离登革病毒 ,明确流行株的血清型及基因型 ,并鉴定该分离株的毒力。方法　采集疑似登革热患者血清 2 0份 ,应用C6 3 6细胞体外培养的方法进行病毒分离 ,并合成登革病毒通用引物 ,进行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)后 ,将PCR扩增产物克隆到T载体进行序列测定和比对。确定血清型后 ,进一步扩增在病毒进化上有代表意义的病毒血清型特异性E NS1连接区基因片段 ,测序后用邻位相连 (N J)法构建登革病毒进化树 ,分析此次登革病毒流行株的来源。通过乳鼠脑内接种及空斑实验 ,测定分离株的毒力。结果　上述 2 0份血清标本中 ,5份标本出现明显的细胞病变 ,主要表现为细胞融合 ,形成大小不一的空泡和网状结构。RT PCR扩增、序列测定证实为登革病毒Ⅰ型。E NS1连接区基因序列片段分析表明 ,2 0 0 2年广州分离株 (DEN 1 GZ2 0 0 2 )的核苷酸序列与基因型Ⅳ型的DEN 1 T14株 (澳大利亚 ,1981)同源性最高 ,达 98%。N J法构建进化树显示 :11株DEN 1病毒分成 3个基因群 ,分别与Rico Hesse 1990分型中的Ⅰ ,Ⅳ和Ⅴ型以及AnaP .Goncalvez 2 0 0 2年分型中的亚洲型 ,南太平洋型和美洲非洲型相符 ,本室分离的DEN 1 GZ2 0 0 2株属于Ⅳ型或者称南太平洋型。DEN 1 GZ2 0 0 2?

关键词：登革病毒 GZ2002株进化分析毒力

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整合素在病毒感染宿主细胞过程中的作用

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第三军医大学学报 2004年第2期26卷 176-178页

作者：张俊磊安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室，重庆市微生物工程实验室，重庆400038

病毒感染细胞的第一个关键步骤是病毒与被感染细胞表面病毒受体结合 ,在病毒受体的介导下 ,病毒颗粒通过细胞的内吞等过程进入细胞内复制。因此病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的主要因素之一。过去认为病毒受体是存在于细胞表... 详细信息

病毒感染细胞的第一个关键步骤是病毒与被感染细胞表面病毒受体结合 ,在病毒受体的介导下 ,病毒颗粒通过细胞的内吞等过程进入细胞内复制。因此病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的主要因素之一。过去认为病毒受体是存在于细胞表面的、一种特异性识别病毒的分子。随着病毒研究的不断进展 ,对病毒受体的认识也更加深入。目前认为 ,病毒受体是指由宿主基因组所编码、控制和表达的一组能参与病毒结合、相互作用、便于病毒感染宿主细胞 ,位于细胞表面的蛋白质分子复合物。也就是说病毒受体是膜蛋白 ,它可以是结构和功能尚未为人所知的膜蛋白 ,也可以是具有细胞信号传导功能的表面受体 ,参与细胞分化、移行、细胞与细胞相互作用等

关键词：整合素病毒病毒受体

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登革病毒特异性T细胞在DHF/DSS发病中作用的研究

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第三军医大学学报 2004年第21期26卷 1940-1943页

作者：万颖杰张俊磊王嘉丽安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的　研究登革病毒特异性T细胞在登革病毒致病中的作用。方法　首先把培养的HepG2移植到严重联合免疫功能不全 (SCID)小鼠体内 ,建立HepG2 graftedSCID (HepG2 SCID) ,然后将该小鼠分为 3组 :①A组 :登革病毒特异性T细胞 ( 2D42 )接... 详细信息

目的　研究登革病毒特异性T细胞在登革病毒致病中的作用。方法　首先把培养的HepG2移植到严重联合免疫功能不全 (SCID)小鼠体内 ,建立HepG2 graftedSCID (HepG2 SCID) ,然后将该小鼠分为 3组 :①A组 :登革病毒特异性T细胞 ( 2D42 )接种后次日 ,腹腔内接种 10 6pfu的Ⅱ型登革病毒 (DEN2 ) ;②B组 :正常小鼠胸腺细胞 (NMT)接种后次日 ,腹腔内接种DEN2 ;③C组 :腹腔内接种DEN2。观察感染后各组动物的死亡率、病毒血症及主要脏器的病理变化。结果　接种 2D42细胞 +感染的小鼠 ,80 %出现明显的临床表现 ,并在感染后 12 8d死亡 ,剩余的 2 0 %小鼠有一过性的临床表现 ,然后从疾病中恢复 ,并存活在 3个月以上。而接种NMT +感染或单纯感染的小鼠 ,死亡率均为 10 0 %。A组和B组小鼠血清中的病毒滴度和主要脏器的病理变化发生率明显高于C组。结论　DEN T细胞有保护机体免受病毒侵害和加重病情进展的双重作用 ,而NMT细胞只有加重病情的单一作用。

关键词：登革病毒登革病毒特异性T细胞 SCID小鼠

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承载分子PaP3.30在小分子活性肽融合表达中的应用

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医学研究生学报 2004年第7期17卷 577-580页

作者：张椿胡福泉胡金川黎庶胡晓梅黄建军陈志瑾饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的 :筛选并克隆一个承载分子 ,研究其在肽抗生素及其他小分子活性肽融合表达中的应用。　方法 :根据肽抗生素为小分子活性肽 ,通常带正电荷的特性 ,从绿脓杆菌噬菌体 (PaP3)基因组中筛选一承载分子 ,构建其与肽抗生素hPAB β的融合蛋... 详细信息

目的 :筛选并克隆一个承载分子 ,研究其在肽抗生素及其他小分子活性肽融合表达中的应用。　方法 :根据肽抗生素为小分子活性肽 ,通常带正电荷的特性 ,从绿脓杆菌噬菌体 (PaP3)基因组中筛选一承载分子 ,构建其与肽抗生素hPAB β的融合蛋白表达载体 ,确认该承载分子能在大肠杆菌中融合表达肽抗生素后 ,再选择一组不同来源、不同大小、不同等电点的小肽分子作为研究对象 ,分别构建它们与承载分子的融合蛋白表达载体 ,转化大肠杆菌进行表达。根据表达情况 ,分析所选择的承载分子融合表达生物活性小肽的能力。　结果 :从PaP3基因组中成功地筛选到ORF 30编码的 1 6 2个氨基酸组成的蛋白作为承载分子 (PaP3.30 ) ;构建该承载分子与肽抗生素hPAB β的融合蛋白表达质粒pQE PaP30 hPAB β,在大肠杆菌中表达的融合蛋白占细菌总蛋白的 30 %以上 ;对所选择的不同来源 (人、蜜蜂、爪蟾、大肠杆菌 )、不同大小(相对分子质量为 70 0～5 30 0 )、不同等电点 (pⅠ 2 .9～ 1 2 )的六种小肽分子PaP3.30 ,均能实现其在大肠杆菌中高效融合表达 ,表达量为细菌总蛋白的 35 %～4 4 %。　结论 :所筛选的承载分子PaP3.30具有很强的融合表达小分子活性肽的能力。

关键词：承载分子肽抗生素活性小肽融合表达

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采用PCR技术从高GC含量绿脓杆菌模板中扩增长片段外毒素A全基因

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第三军医大学学报 2003年第9期25卷 833-834页

作者：胡晓梅饶贤才黄建军金晓琳朱军民胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

从高GC含量的模板中用PCR方法扩增长片段DNA序列是相当困难的。本室通过对PCR反应体系和条件的优化，成功地从绿脓杆菌高GC含量的染色体模板中扩增到了1 966 bp的外毒素A（Pseudomoneas aeruginosa exotoxin A, PEA）全长结构基因，为实... 详细信息

从高GC含量的模板中用PCR方法扩增长片段DNA序列是相当困难的。本室通过对PCR反应体系和条件的优化，成功地从绿脓杆菌高GC含量的染色体模板中扩增到了1 966 bp的外毒素A（Pseudomoneas aeruginosa exotoxin A, PEA）全长结构基因，为实现PEA的高效表达奠定了基础。

关键词： PCR技术高GC含量绿脓杆菌模板 DNA 外毒素A PCR扩增长片段基因

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3基因组测序

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第三军医大学学报 2002年第4期24卷 378-380页

作者：张克斌金晓琳朱军民胡晓梅饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的　对新分离的铜绿假单胞菌dsDNA溶原性噬菌体PaP3进行基因组测序。方法　用CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP3颗粒 ,提取噬菌体基因组DNA ,建立shot-gun随机文库 ,从文库中随机挑取克隆进行测序并完成序列组装 ,同时通过限制性内切酶图谱... 详细信息

目的　对新分离的铜绿假单胞菌dsDNA溶原性噬菌体PaP3进行基因组测序。方法　用CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP3颗粒 ,提取噬菌体基因组DNA ,建立shot-gun随机文库 ,从文库中随机挑取克隆进行测序并完成序列组装 ,同时通过限制性内切酶图谱结合酶切片段的变性、复性实验分析基因组末端。结果　共进行了 778条序列的测定与拼接 ,测序量达到 1 3 5倍覆盖率 ,得到一条长为 4 42 4 9bp的重叠群 ,此重叠群错误率为 9 4 6ERR 1 0KB ,测序结果和酶切图谱分析表明该PaP3基因组是一 4 42 4 9bp长的线性平端dsDNA分子。其碱基组成为A =2 4 2 4 % ,G =2 6 1 8% ,T =2 3 6 3% ,C =2 5 94 % ;稀有碱基 =0 ;A +T =4 7 87% ,C +G=52 1 3%。结论　噬菌体PaP3基因组是由 4 42 4 9bp组成的线性平端双链DNA分子。测序完成为生物信息学分析和功能基因研究奠定了基础。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体基因组测序 PaP3

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高温变性对双链DNA分子的损害

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第三军医大学学报 2002年第4期24卷 491-492页

作者：朱军民饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

高温变性是实验室常用的方法 ,如用煮沸法提取质粒ＤＮＡ ,用煮沸法变性ＤＮＡ检测样品或ＤＮＡ双链探针 ,以及在ＰＣＲ中使用 94℃变性模板等[1～ 3] 。这给我们留下一个强烈印象 :即核苷酸链是耐高温以至可以接受煮沸处理的。基于这... 详细信息

高温变性是实验室常用的方法 ,如用煮沸法提取质粒ＤＮＡ ,用煮沸法变性ＤＮＡ检测样品或ＤＮＡ双链探针 ,以及在ＰＣＲ中使用 94℃变性模板等[1～ 3] 。这给我们留下一个强烈印象 :即核苷酸链是耐高温以至可以接受煮沸处理的。基于这一事实 ,最近我们使用煮沸法来灭菌欲无菌保存的ＤＮＡ样品 ,结果意外发现 10 0℃加温处理可以不同程度地损害ＤＮＡ分子 ,引起了我们对高温变性处理双链ＤＮＡ分子的高度重视 ,特设计实验观察高温对ＤＮＡ损害的程度以及高温对不同来源ＤＮＡ的损害是否有差异。现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　实验材料　　铜绿假单胞菌ＰＡ6(本研究室从临床分离株 )基因组ＤＮＡ ,约

关键词：高温变性双链DNA DNA损害

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