检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2002年第4期24卷 378-380页

作者：张克斌金晓琳朱军民胡晓梅饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的　对新分离的铜绿假单胞菌dsDNA溶原性噬菌体PaP3进行基因组测序。方法　用CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP3颗粒 ,提取噬菌体基因组DNA ,建立shot-gun随机文库 ,从文库中随机挑取克隆进行测序并完成序列组装 ,同时通过限制性内切酶图谱... 详细信息

目的　对新分离的铜绿假单胞菌dsDNA溶原性噬菌体PaP3进行基因组测序。方法　用CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP3颗粒 ,提取噬菌体基因组DNA ,建立shot-gun随机文库 ,从文库中随机挑取克隆进行测序并完成序列组装 ,同时通过限制性内切酶图谱结合酶切片段的变性、复性实验分析基因组末端。结果　共进行了 778条序列的测定与拼接 ,测序量达到 1 3 5倍覆盖率 ,得到一条长为 4 42 4 9bp的重叠群 ,此重叠群错误率为 9 4 6ERR 1 0KB ,测序结果和酶切图谱分析表明该PaP3基因组是一 4 42 4 9bp长的线性平端dsDNA分子。其碱基组成为A =2 4 2 4 % ,G =2 6 1 8% ,T =2 3 6 3% ,C =2 5 94 % ;稀有碱基 =0 ;A +T =4 7 87% ,C +G=52 1 3%。结论　噬菌体PaP3基因组是由 4 42 4 9bp组成的线性平端双链DNA分子。测序完成为生物信息学分析和功能基因研究奠定了基础。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体基因组测序 PaP3

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高温变性对双链DNA分子的损害

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第三军医大学学报 2002年第4期24卷 491-492页

作者：朱军民饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

高温变性是实验室常用的方法 ,如用煮沸法提取质粒ＤＮＡ ,用煮沸法变性ＤＮＡ检测样品或ＤＮＡ双链探针 ,以及在ＰＣＲ中使用 94℃变性模板等[1～ 3] 。这给我们留下一个强烈印象 :即核苷酸链是耐高温以至可以接受煮沸处理的。基于这... 详细信息

高温变性是实验室常用的方法 ,如用煮沸法提取质粒ＤＮＡ ,用煮沸法变性ＤＮＡ检测样品或ＤＮＡ双链探针 ,以及在ＰＣＲ中使用 94℃变性模板等[1～ 3] 。这给我们留下一个强烈印象 :即核苷酸链是耐高温以至可以接受煮沸处理的。基于这一事实 ,最近我们使用煮沸法来灭菌欲无菌保存的ＤＮＡ样品 ,结果意外发现 10 0℃加温处理可以不同程度地损害ＤＮＡ分子 ,引起了我们对高温变性处理双链ＤＮＡ分子的高度重视 ,特设计实验观察高温对ＤＮＡ损害的程度以及高温对不同来源ＤＮＡ的损害是否有差异。现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　实验材料　　铜绿假单胞菌ＰＡ6(本研究室从临床分离株 )基因组ＤＮＡ ,约

关键词：高温变性双链DNA DNA损害

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肽抗生素hPAB-β的化学合成及其杀菌活性的初步证实

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第三军医大学学报 2002年第4期24卷 393-395页

作者：饶贤才金晓琳胡晓梅朱军民陈自瑾胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的　化学合成、纯化并初步测定肽抗生素hPAB β的活性 ,为后续研究奠定基础。方法　采用固相合成法合成肽抗生素hPAB β ,经RP HPLC纯化 ,用质谱进行分子量鉴定 ,谷胱甘肽氧化还原法复性合成产物 ,进一步用阳离子交换柱纯化复性产... 详细信息

目的　化学合成、纯化并初步测定肽抗生素hPAB β的活性 ,为后续研究奠定基础。方法　采用固相合成法合成肽抗生素hPAB β ,经RP HPLC纯化 ,用质谱进行分子量鉴定 ,谷胱甘肽氧化还原法复性合成产物 ,进一步用阳离子交换柱纯化复性产物 ,收集主峰 ,药敏法初步测定合成肽的抗菌活性。结果　合成肽抗生素hPAB β的纯度为 86 5 2 % ,经质谱分析 ,合成肽的分子量测定值与理论值相符。用谷胱甘肽氧化还原法复性合成肽取得了较好的效果。复性产物对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌具有杀灭作用。结论　化学合成的肽抗生素hPAB β具有良好的杀菌活性。

关键词：肽抗生素化学合成蛋白纯化杀菌活性 hPAB-β

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微生物基因组研究进展及其对生命科学的影响

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第三军医大学学报 2002年第4期24卷 375-377页

作者：胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

1　微生物学在历史上造就的辉煌　　微生物学是一个极具生命活力 ,发展十分活跃的学科 ,也是生命科学领域内重要的领头学科之一。在最近 10 0年中 ,微生物领域内获得诺贝尔奖 3 3项 ,有 61名学者获此殊荣。生命科学领域内的许多重大发... 详细信息

1　微生物学在历史上造就的辉煌　　微生物学是一个极具生命活力 ,发展十分活跃的学科 ,也是生命科学领域内重要的领头学科之一。在最近 10 0年中 ,微生物领域内获得诺贝尔奖 3 3项 ,有 61名学者获此殊荣。生命科学领域内的许多重大发现 ,都是在微生物学领域或以微生物作为研究模型而获得的 :①早在前基因组时代 (1990年人类基因组计划启动之前 ) ,Ｔａｔｕｍ及Ｂｅａｄｌｅ对链孢霉菌赖氨酸营养缺陷型的研究带来了一个基因一个酶的学说 ;②Ｇｒｉｆｆｉｔｈ通过肺炎球菌转化试验 ,证实了基因的载体是ＤＮＡ ;③Ｗａｔｓｏｎ及Ｃｒｉｃｋ从研究病毒ＤＮＡ的本质属性中 ,提出了ＤＮＡ双螺旋结构模型

关键词：微生物学微生物基因组生命科学影响

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一个承载分子的设计与肽抗生素hPAB-β的高效表达

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第三军医大学学报 2002年第4期24卷 389-392页

作者：饶贤才金晓琳胡晓梅朱军民陈自瑾胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的　通过设计一个承载蛋白分子高效表达肽抗生素hPAB β ,为大量制备hPAB β奠定基础。方法　根据肽抗生素的特性 ,确立 4条设计原则 ,并据此设计一 489bp的承载蛋白编码序列 ,用化学合成法获得该序列并将之克隆到pQE 3 2中构建成表... 详细信息

目的　通过设计一个承载蛋白分子高效表达肽抗生素hPAB β ,为大量制备hPAB β奠定基础。方法　根据肽抗生素的特性 ,确立 4条设计原则 ,并据此设计一 489bp的承载蛋白编码序列 ,用化学合成法获得该序列并将之克隆到pQE 3 2中构建成表达载体 ,进一步将肽抗生素hPAB β基因插入上述表达载体 ,肽抗生素基因位于承载蛋白编码序列 3’ 端 ,两者构成融合基因。将含融合基因的表达载体转化大肠杆菌JM10 9,筛选阳性重组子 ,并用阳性重组子表达融合蛋白。结果　设计的承载蛋白为 163个氨基酸 ,分子量 17668.80 ,等电点 5 .62 1。用承载分子与肽抗生素hPAB β构建的融合蛋白表达载体转化细菌后 ,筛选到 4个阳性重组子 ,均能高效表达肽抗生素融合蛋白 ,融合蛋白的产量占细菌总蛋白的 40 %～ 45 %。结论　设计的承载蛋白分子能够实现肽抗生素的高效表达。

关键词：承载蛋白肽抗生素高效表达 hPAB-β

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贝氏柯克斯体sucB基因的序列分析

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第三军医大学学报 2002年第4期24卷 407-409页

作者：余全 To Ho Hirai Katsuya 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 1日本歧阜大学联合兽医学部微生物学教研室歧阜5011193 日本歧阜大学联合兽医学部微生物学教研室歧阜5011193

目的　通过sucB基因序列比较 ,了解贝氏柯克斯体分离株的一些遗传特征。方法　对 16株贝氏柯克斯体分离株的sucB基因进行扩增、测序和分析。结果　sucB基因 113 7bp序列中 ,仅发现 3个位置的碱基突变 ,引起 3个氨基酸的改变。从 3个碱... 详细信息

目的　通过sucB基因序列比较 ,了解贝氏柯克斯体分离株的一些遗传特征。方法　对 16株贝氏柯克斯体分离株的sucB基因进行扩增、测序和分析。结果　sucB基因 113 7bp序列中 ,仅发现 3个位置的碱基突变 ,引起 3个氨基酸的改变。从 3个碱基突变可大致将这些分离株分为两大群。结论　sucB基因在贝氏柯克斯体是一个很保守的酶基因。群的划分似与分离株的质粒型有很大的相关性 ,而与疾病形式和分离株的地理分布相关性较少。

关键词：贝氏柯克斯体 DNA序列 sucB基因序列分析 Q热

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PPARα、γ配体对单核细胞来源的巨噬细胞的作用观察

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第三军医大学学报 2002年第8期24卷 924-927页

作者：舒茂琴何作云王国超方玉强李晓霞第三军医大学附属西南医院心血管内科重庆400038 第三军医大学附属新桥医院心血管内科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆40038 第三军医大学解放军总医院临床检验中心北京100853

目的　探讨PPARα和γ配体在动脉粥样硬化病变局部的作用。方法　观察PPARα和γ配体对氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)介导的巨噬细胞清道夫受体A(SRA)基因表达、肿瘤坏死因子 (TNF α)和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)释放、细胞增殖与凋亡的影... 详细信息

目的　探讨PPARα和γ配体在动脉粥样硬化病变局部的作用。方法　观察PPARα和γ配体对氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)介导的巨噬细胞清道夫受体A(SRA)基因表达、肿瘤坏死因子 (TNF α)和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)释放、细胞增殖与凋亡的影响。结果　中低浓度的PPARα和γ配体不但增强ox LDL介导的巨噬细胞TNF α、MMP 9表达 ,而且有促细胞凋亡和抗细胞增殖的作用 ;PPARγ配体不但能显著增加巨噬细胞PPARγmRNA表达 ,而且还能抑制ox LDL介导的巨噬细胞SRA。结论　PPARα和γ基因激活可能有抗炎和抗细胞增生的作用 ,后者可能还有助于减少粥样斑块脂质内容。

关键词：核受体泡沫细胞细胞凋亡单核巨噬细胞过氧化酶体增殖激活受体 γ基因动脉粥样硬化

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噬菌体最佳保存方法探讨

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第三军医大学学报 2001年第7期23卷 863-864页

作者：金晓琳张克斌胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　寻找噬菌体有效而方便的保存方法。方法　将绿脓杆菌裂菌性噬菌体以不同方法保存在不同温度下 ,在不同时间取出 ,用终点稀释法动态检测其裂菌活性滴度。结果　冻干、室温、4℃和液氮保存对噬菌体活性滴度的影响无明显差异 ,6个月... 详细信息

目的　寻找噬菌体有效而方便的保存方法。方法　将绿脓杆菌裂菌性噬菌体以不同方法保存在不同温度下 ,在不同时间取出 ,用终点稀释法动态检测其裂菌活性滴度。结果　冻干、室温、4℃和液氮保存对噬菌体活性滴度的影响无明显差异 ,6个月后仅有 10 2 数量级的降低 ;-2 0℃保存 6月后滴度下降 10 4 数量级 ,效果最差。结论　日常工作中 ,至少 6个月内 ,室温或 4℃是噬菌体最简便而可靠的保存方法。

关键词：噬菌体保存方法效果

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利用人工合成XcmⅠ接头盒构建T-载体

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第三军医大学学报 2001年第5期23卷 608-610页

作者：胡晓梅胡福泉饶贤才张光明张克斌金晓琳刘启富第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　采用人工法合成XcmⅠ接头盒 ,进而构建T 载体。方法　用人工方法合成含XcmⅠ酶切位点的寡核苷酸接头 ,将其插入pBluescriptSKⅡ (+ )质粒的EcoRⅤ位点 ,以XcmⅠ消化含接头的质粒即构建成T 载体。利用PCR反应扩增PEA全长结构基因 ... 详细信息

目的　采用人工法合成XcmⅠ接头盒 ,进而构建T 载体。方法　用人工方法合成含XcmⅠ酶切位点的寡核苷酸接头 ,将其插入pBluescriptSKⅡ (+ )质粒的EcoRⅤ位点 ,以XcmⅠ消化含接头的质粒即构建成T 载体。利用PCR反应扩增PEA全长结构基因 ,直接克隆入T 载体以验证所构建T 载体的可用性。结果　限制性酶切分析、DNA序列测定及PEA基因的克隆等均证实T 载体的构建成功。结论　所构建的T 载体可有效用于直接克隆PCR产物。

关键词： T-载体人工合成 PCR XcmⅠ接头构建

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半套式PCR和DNA探针技术检测Q热立克次体

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第三军医大学学报 2001年第9期23卷 1104-1106页

作者：胡廷徽温博海万泽生俞树荣第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　建立半套式PCR和DNA探针技术由于检测Q热立克次体。方法　依据已知的Q热立克次体的 16S和 2 3SrRNA基因及其间区的序列 ,设计 3条引物 ,建立了扩增 16S 2 3SrRNA基因间区的半套式PCR方法 ,并将扩增片段制成探针 ,建立了斑点杂交... 详细信息

目的　建立半套式PCR和DNA探针技术由于检测Q热立克次体。方法　依据已知的Q热立克次体的 16S和 2 3SrRNA基因及其间区的序列 ,设计 3条引物 ,建立了扩增 16S 2 3SrRNA基因间区的半套式PCR方法 ,并将扩增片段制成探针 ,建立了斑点杂交技术。结果　 10株Q热立克次体分离株均可扩增出 5 72bp的PCR条带 ,而对照菌都为阴性 ,此半套式PCR方法的灵敏度高达 1pg ;用九里株扩增片段标记后制成的探针 ,与 10个Q热立克次体分离株的全DNA呈阳性杂交 ,对照菌为阴性 ,此杂交方法的灵敏度为 0 .5ng。结论　基于Q热立克次体 16S 2 3SrRNA基因间区的半套式PCR和DNA探针技术具有较好的特异性和灵敏度 ,可联合应用于Q热的病原学诊断。

关键词：半套式PCR DNA探针 Q热立克次体诊断

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