检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2003年第19期25卷 1755-1758页

作者：黎庶汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　探讨蛋白激酶C(PKC)在LPS激活肺巨噬细胞核转录因子 κB信号传导通路中的作用。方法　采用夹心ELISA的方法检测巨噬细胞NF κB的核内浓度 ;免疫组化染色观察LPS作用前后NF κB的位置改变。结果　LPS刺激可诱导巨噬细胞NF κB活... 详细信息

目的　探讨蛋白激酶C(PKC)在LPS激活肺巨噬细胞核转录因子 κB信号传导通路中的作用。方法　采用夹心ELISA的方法检测巨噬细胞NF κB的核内浓度 ;免疫组化染色观察LPS作用前后NF κB的位置改变。结果　LPS刺激可诱导巨噬细胞NF κB活化 ,二者之间存在时效与量效的依赖关系 ;免疫组化染色显示LPS作用后 ,NF κB发生核内移位 ,由胞浆进入细胞核内 ;而特异性PKC抑制剂 (CalC)和NF κB阻断剂 (PDTC)均能在不同程度上抑制LPS的作用。结论　PKC作为NF κB活化的上游信使 ,参与了LPS激活NF

关键词：脂多糖 NF-κB PKC 信号传导

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铜绿假单胞菌外毒素A全长基因的扩增与克隆

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中国人兽共患病杂志 2003年第4期19卷 93-95页

作者：胡晓梅胡福泉饶贤才黄建军金晓琳第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　从绿脓杆菌中提取染色体DNA ,PCR扩增及克隆外毒素A全长基因 ,为实现外毒素A的高效表达奠定基础。方法　从绿脓杆菌培养物中提取染色体DNA ,PCR扩增外毒素A全长基因 ,A -T克隆入本室自行构建的pSK -T载体中 ,对重组质粒进行酶切... 详细信息

目的　从绿脓杆菌中提取染色体DNA ,PCR扩增及克隆外毒素A全长基因 ,为实现外毒素A的高效表达奠定基础。方法　从绿脓杆菌培养物中提取染色体DNA ,PCR扩增外毒素A全长基因 ,A -T克隆入本室自行构建的pSK -T载体中 ,对重组质粒进行酶切与测序鉴定。结果与结论　成功地从高GC含量的绿脓杆菌染色体DNA中扩增到长片段的外毒素A全基因并进行了克隆与鉴定。

关键词：铜绿假单胞菌外毒素A全长基因扩增克隆

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3一个结构蛋白的N-端测序及编码基因的确定

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第三军医大学学报 2003年第13期25卷 1140-1142页

作者：张克斌金晓琳朱军民陈志瑾饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的主要结构蛋白基因。方法　将噬菌体PaP3颗粒用CsCl梯度离心纯化 ,SDS PAGE电泳其结构蛋白后 ,电转印于PVDF膜上 ,再用Edman降解法对主要结构蛋白作N端测序 ,根据蛋白N端 5个氨基酸残基序列逆推其编... 详细信息

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的主要结构蛋白基因。方法　将噬菌体PaP3颗粒用CsCl梯度离心纯化 ,SDS PAGE电泳其结构蛋白后 ,电转印于PVDF膜上 ,再用Edman降解法对主要结构蛋白作N端测序 ,根据蛋白N端 5个氨基酸残基序列逆推其编码读框。结果　PaP3主要结构蛋白的N端 5个氨基酸残基顺序为 :Ala Thr Pro Thr Asn。结论据此推定其编码基因为ORF 3 63 5 4～ 3 73 0 7(负链 )编码的蛋白 ,该蛋白共有 3 18氨基酸 ,其等电点为 7 70 ,分子质量为3 5 0 2 4 46。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体蛋白质 N端测序

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猪链球菌2型疫苗候选分子FBP的表达及免疫学活性研究

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 173-177页

作者：刘丽娜胡福泉朱军民赵岩陈志瑾唐家琪第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的表达SS2纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FBP),研究其免疫学活性,探讨其保护活性和作为疫苗候选分子的可能性。方法用PCR技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出fbp基因片段,插入表达载体pET-30b(+)中,构建... 详细信息

目的表达SS2纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FBP),研究其免疫学活性,探讨其保护活性和作为疫苗候选分子的可能性。方法用PCR技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出fbp基因片段,插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-fbp。该载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化***,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白。Western blot证实目的蛋白的分子量和免疫反应原性。重组蛋白免疫小鼠后收集多抗血清,间接ELISA检测其效价。结果PCR扩增的fbp基因长度约为1700bp,所构建重组表达载体酶切鉴定无误、测序证实碱基序列100%正确且保持正确读框。IPTG诱导表达,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的10%。亲和层析获得目的蛋白,纯度达80%以上。Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的病人血清发生阳性反应。重组蛋白免疫小鼠后血清效价达1∶25600以上。结论成功构建了表达载体pET30b-fbp,可在工程菌***中表达;表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。

关键词： SS2 FBP 表达免疫学活性

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半套式PCR和DNA探针技术检测Q热立克次体

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第三军医大学学报 2001年第9期23卷 1104-1106页

作者：胡廷徽温博海万泽生俞树荣第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　建立半套式PCR和DNA探针技术由于检测Q热立克次体。方法　依据已知的Q热立克次体的 16S和 2 3SrRNA基因及其间区的序列 ,设计 3条引物 ,建立了扩增 16S 2 3SrRNA基因间区的半套式PCR方法 ,并将扩增片段制成探针 ,建立了斑点杂交... 详细信息

目的　建立半套式PCR和DNA探针技术由于检测Q热立克次体。方法　依据已知的Q热立克次体的 16S和 2 3SrRNA基因及其间区的序列 ,设计 3条引物 ,建立了扩增 16S 2 3SrRNA基因间区的半套式PCR方法 ,并将扩增片段制成探针 ,建立了斑点杂交技术。结果　 10株Q热立克次体分离株均可扩增出 5 72bp的PCR条带 ,而对照菌都为阴性 ,此半套式PCR方法的灵敏度高达 1pg ;用九里株扩增片段标记后制成的探针 ,与 10个Q热立克次体分离株的全DNA呈阳性杂交 ,对照菌为阴性 ,此杂交方法的灵敏度为 0 .5ng。结论　基于Q热立克次体 16S 2 3SrRNA基因间区的半套式PCR和DNA探针技术具有较好的特异性和灵敏度 ,可联合应用于Q热的病原学诊断。

关键词：半套式PCR DNA探针 Q热立克次体诊断

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查菲埃立克体120000表面抗原蛋白基因的克隆与表达

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第三军医大学学报 2001年第8期23卷 938-941页

作者：蹇锐温博海第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的构建查菲埃立克体特异性表面抗原Ｐ１２０基因的原核表达质粒，并使该基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。方法依据查菲埃立克体Ｐ１２０基因序列设计一对特异性引物，用ＰＣＲ从查菲埃立克体的基因组中扩增含有编码Ｐ１２０抗原决... 详细信息

目的构建查菲埃立克体特异性表面抗原Ｐ１２０基因的原核表达质粒，并使该基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。方法依据查菲埃立克体Ｐ１２０基因序列设计一对特异性引物，用ＰＣＲ从查菲埃立克体的基因组中扩增含有编码Ｐ１２０抗原决定簇的基因片段，而后将ＰＣＲ产物用Ｔ载体克隆。用酶将ＰＣＲ产物从Ｔ载体切下，将它定向插入原核表达质粒ＰＥＴ１１Ｃ构建ＰＥＴ１１Ｃ／ｐ１２０重组质粒；用重组质粒转化Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）。结果从ＤＮＡ片断中扩增出一约１１１９ｂｐ产物，经测序为查菲埃立克体ｐ１２０基因。ＰＥＴ１１Ｃ／ｐ１２０重组质粒转化的Ｅ．ｃｏｌｉ在ＩＰＴＧ的诱导下产生一分子量为４１０００的天然蛋白，它的产量占细菌蛋白总量的２８％，用免疫印迹分析证明它能特异地与查菲埃立克体感染病人血清反应。结论查菲埃立克体特异性的Ｐ１２０抗原在原核表达系统被高效表达，该抗原的研制成功为制备人单核细胞埃立克体病诊断抗原和疫苗奠定了基础。

关键词：查菲埃立体体表面抗原基因表达病原体克隆埃立克体病

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PCR-SSCP分析Q热立克次体中国分离株16S-23SrDNA基因间区

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第三军医大学学报 2001年第11期23卷 1312-1314页

作者：胡廷徽温博海万泽生俞树荣第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　建立快速分析Q热立克次体分离株 16S 2 3SrDNA基因间区株间差异的PCR SSCP方法。方法　用半套式PCR扩增 7株中国分离株 (七医、新桥、雅安、李、YS 8、YS 9和YH 11)和 3株国际参考株 (九里、Henzerling和Grita)的 16S 2 3SrDNA基... 详细信息

目的　建立快速分析Q热立克次体分离株 16S 2 3SrDNA基因间区株间差异的PCR SSCP方法。方法　用半套式PCR扩增 7株中国分离株 (七医、新桥、雅安、李、YS 8、YS 9和YH 11)和 3株国际参考株 (九里、Henzerling和Grita)的 16S 2 3SrDNA基因间区 ,对扩增产物进行PCR SSCP分析。结果　 3株云南分离株 (YS 8,YS 9和YH 11)与其它 7株之间的差异较大。与此区域的序列分析结果一致。结论　Q热立克次体分离株的 16S 2 3SrRNA基因间区由于适应不同的地理环境可发生变异 ,PCR SSCP是快速分析这些变异的有效方法。

关键词：贝氏柯克斯体 16S-23S rDNA基因间区 PCR-SSCP 中国分离株株间差异

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C5a对血管内皮细胞表达P-选择素的影响

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第三军医大学学报 2001年第9期23卷 1057-1057,1060页

作者：黎庶汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

中性粒细胞与血管内皮细胞间的粘附及跨内皮移行是炎症反应的关键环节 ,选择素等粘附分子在其中发挥着重要的作用。炎症局部产生的ＴＮＦ、凝血酶、激活的补体片段等多种因素都能上调粘附分子的表达 ,但Ｃ5ａ对Ｐ选择素表达的影响尚不... 详细信息

中性粒细胞与血管内皮细胞间的粘附及跨内皮移行是炎症反应的关键环节 ,选择素等粘附分子在其中发挥着重要的作用。炎症局部产生的ＴＮＦ、凝血酶、激活的补体片段等多种因素都能上调粘附分子的表达 ,但Ｃ5ａ对Ｐ选择素表达的影响尚不十分清楚 ,本实验在体外用不同浓度Ｃ5ａ与培养的人脐静脉内皮细胞用 ,测定Ｐ选择素及中性粒细胞粘附率的动态变化 ,研究Ｃ5ａ对Ｐ选择素表达和对中性粒细胞粘附的影响。1　材料与方法1.1　材料　　人脐静脉内皮细胞株ＥＣＶ30 4:本室冻存 ;重组人Ｃ5ａ[美国ｓｉｇｍａ公司 ] ;小鼠抗人Ｐ选择素单克隆抗体 [美国Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ公司 ] ;其它试剂均为国产分析纯。1

关键词： C5a 血管内皮细胞 P-选择素内皮细胞粘附率

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转座突变株插入位点侧翼序列的研究

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免疫学杂志 2007年第5期23卷 518-520页

作者：陈志瑾朱军民饶贤才丛延广第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的比较用于扩增弗氏枸橼酸杆菌转座突变株插入位点侧翼序列的3种PCR方法,以选择最有效、最简便的扩增方法进行转座突变基因的分析。方法分别采用step-outPCR、随机引物巢式PCR和反向PCR对弗氏枸橼酸杆菌转座突变株基因组中插入位点的... 详细信息

目的比较用于扩增弗氏枸橼酸杆菌转座突变株插入位点侧翼序列的3种PCR方法,以选择最有效、最简便的扩增方法进行转座突变基因的分析。方法分别采用step-outPCR、随机引物巢式PCR和反向PCR对弗氏枸橼酸杆菌转座突变株基因组中插入位点的侧翼序列进行扩增,并取产物进行直接测序,以对方法的有效性进行比较。结果随机引物巢式PCR方法简便,但扩增产物的条带较多,不利于后续的测序操作。Step-outPCR产物中非特异性片段更多,方法不可取,反向PCR法最为简便有效。结论反向PCR法适宜用于扩增弗氏枸橼酸杆菌转座突变株插入位点的侧翼序列,可以对突变基因进行定位。

关键词：转座突变株 PCR 弗氏枸橼酸杆菌

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sCR1-SCR15-18蛋白减轻补体介导的大鼠脑缺血/再灌注损伤

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中国病理生理杂志 2009年第12期25卷 2436-2440页

作者：何莉杨永涛郭光金刘高科汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部应用解剖与手术学教研室重庆400038

目的:探讨补体在大鼠大脑缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤中的作用及重组人可溶性补体受体Ⅰ型SCR15-18蛋白(sCR1-SCR15-18)的保护作用。方法:75只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、I/R组和sCR1-SCR15-18保护组。采用线栓法建... 详细信息

目的:探讨补体在大鼠大脑缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤中的作用及重组人可溶性补体受体Ⅰ型SCR15-18蛋白(sCR1-SCR15-18)的保护作用。方法:75只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、I/R组和sCR1-SCR15-18保护组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型(middle cerebral artery occlusion MCAO),缺血2h,再灌注24h后,进行神经功能学评分,测定脑梗死体积、大脑皮质髓过氧化物酶(myeloperoxi-dase,MPO)活性,观察大脑皮质区补体C3b沉积和病理改变。结果:缺血/再灌注24h后,sCR1-SCR15-18保护组神经功能学评分,脑梗死体积及脑皮质MPO活性明显低于I/R组(P<0.05);sCR1-SCR15-18保护组缺血脑组织补体C3b沉积明显减少,病理损伤减轻。结论:补体在脑I/R损伤中起一定作用,sCR1-SCR15-18蛋白对大鼠I/R损伤脑具有保护作用。

关键词：补体可溶性补体受体1型SCR15-18 脑缺血再灌注损伤炎症

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