检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2004年第13期26卷 1137-1140页

作者：程小星 G.E.Duhamel 第三军医大学基础医学部微生物学教研室 University of Nebraska LincolnNebraska68583USA

目的　研究肠道螺旋体对肠上皮细胞吸附的特性。方法　利用人工培养的肠上皮细胞系H40 7细胞建立研究肠道螺旋体与肠上皮细胞相互作用的方法 ,并用该方法研究肠道螺旋体对肠上皮细胞吸附的特性。结果　 4种不同来源的肠道螺旋体分离株... 详细信息

目的　研究肠道螺旋体对肠上皮细胞吸附的特性。方法　利用人工培养的肠上皮细胞系H40 7细胞建立研究肠道螺旋体与肠上皮细胞相互作用的方法 ,并用该方法研究肠道螺旋体对肠上皮细胞吸附的特性。结果　 4种不同来源的肠道螺旋体分离株均能吸附到人肠上皮细胞系H40 7细胞的表面 ,其中以人的分离株SP16的吸附率为最高 ,而非致病性的BrachyspirainnocensB2 5 6株则没有明显的吸附。人分离株SP16与H40 7细胞共同孵育 1h后的吸附率为 63 .77% ,2h则达到 89.11%。H40 7细胞经固定后肠道螺旋体仍能有效地吸附到细胞上 ,显示受体是稳定表达在肠上皮细胞的表面。结论　利用人工培养的肠上皮细胞系H40 7细胞建立了研究肠道螺旋体与肠上皮细胞相互作用的体外模型。

关键词：肠道螺旋体肠上皮细胞吸附

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微管骨架在登革病毒感染ECV304细胞中作用的初步研究

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第三军医大学学报 2005年第7期27卷 628-631页

作者：陈炜王嘉丽彭涛陈宗涛高娜万颖杰张俊磊安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆微生物工程实验室重庆400038

目的　研究登革病毒在与ECV3 0 4细胞相互作用过程中细胞微管骨架的变化,以及微管在病毒释放过程中的作用。方法　用2型登革病毒感染ECV3 0 4细胞株,间接免疫荧光双染色技术观察微管和病毒抗原的分布;应用col cemid破坏微管骨架,检测细... 详细信息

目的　研究登革病毒在与ECV3 0 4细胞相互作用过程中细胞微管骨架的变化,以及微管在病毒释放过程中的作用。方法　用2型登革病毒感染ECV3 0 4细胞株,间接免疫荧光双染色技术观察微管和病毒抗原的分布;应用col cemid破坏微管骨架,检测细胞内外病毒滴度的变化,以明确微管是否参与病毒的复制。结果　登革病毒感染后ECV3 0 4细胞微管骨架的排列发生明显的变化,表现为3种类型:无序排列;围绕核形成环状结构;微管结成束状形成线状突触。间接免疫荧光双染色结果显示登革病毒抗原与微管共染,分布在微管组织中心。感染后8h ,药物组上清中的病毒滴度高于一般感染组,而细胞内的病毒滴度低于一般感染组。结论　登革病毒感染引起ECV3 0 4细胞微管的排列发生变化,可能是病毒感染造成了微管解聚,后者促进病毒的释放;药物的添加,加剧了对微管的破坏程度,从而进一步促进了病毒的释放。

关键词：登革病毒微管骨架 ECV304细胞

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Ⅱ型登革病毒感染对细胞波形蛋白表达及磷酸化水平调控的实验研究

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第三军医大学学报 2011年第21期33卷 2265-2267页

作者：雷舜陈炜宋富强王嘉丽饶贤才黎庶胡晓梅第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室

目的研究Ⅱ型登革病毒(dengue virus serotype 2,DV2)感染ECV304细胞后,波形蛋白(vimentin)的表达及丝氨酸第71位点(Ser71)磷酸化水平的变化。方法使用DV2感染ECV304细胞,以Western blot检测病毒进入和复制期不同时相点细胞波形蛋白的... 详细信息

目的研究Ⅱ型登革病毒(dengue virus serotype 2,DV2)感染ECV304细胞后,波形蛋白(vimentin)的表达及丝氨酸第71位点(Ser71)磷酸化水平的变化。方法使用DV2感染ECV304细胞,以Western blot检测病毒进入和复制期不同时相点细胞波形蛋白的表达和Ser71磷酸化水平。结果 DV2感染的ECV304细胞中波形蛋白表达较对照组没有显著差异(P>0.05),而波形蛋白Ser71位点的磷酸化水平较对照组有显著差异:DV2在进入ECV304细胞第30分钟时波形蛋白Ser71磷酸化水平显著增高,达到对照组的176.3%(P<0.01);而在感染后第8小时,Ser71位点磷酸化水平再次显著增高,达到对照组的333.2%(P<0.01),感染后第12小时降低至对照组的203.5%(P<0.05)。结论波形蛋白Ser71位点的磷酸化水平变化与DV2在ECV304细胞中的感染与复制周期密切相关。

关键词：登革病毒 ECV304细胞波形蛋白磷酸化

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SigB(Q225P)突变促进金黄色葡萄球菌生物被膜形成

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第三军医大学学报 2017年第8期39卷 711-717页

作者：刘慧尚伟龙彭华刚周坤胡珍周人杰饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室、重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院急救部重庆430037

目的探讨金黄色葡萄球菌Sig B(Q225P)突变对其生物被膜形成能力的影响。方法比较临床分离金葡菌(XQ株)与实验室传代获得菌落颜色变白之XQW株的生物学特性,通过结晶紫染色法以及激光共聚焦检测菌株的生物被膜形成。进行XQ及XQW全基因组测... 详细信息

目的探讨金黄色葡萄球菌Sig B(Q225P)突变对其生物被膜形成能力的影响。方法比较临床分离金葡菌(XQ株)与实验室传代获得菌落颜色变白之XQW株的生物学特性,通过结晶紫染色法以及激光共聚焦检测菌株的生物被膜形成。进行XQ及XQW全基因组测序,比较相关基因,寻找突变位点。分别扩增sigB(Q225P)基因及其上游片段,经酶切后连接穿梭载体p BT2,构建同源重组质粒p BT2-sigB(Q225P),电转化至金葡菌RN4220,再将经RN4220修饰后的质粒电转入Newman。利用p BT2质粒对温度敏感的特点筛选Newman-sigB(Q225P)。利用同样的方法构建sigB敲除菌株Newman-△sigB,并构建回补菌株Newman-△sigB/sigB以及Newman-△sigB/sigB(Q225P)。比较这些菌株的生物被膜形成差异。结果 XQW株在液体培养基中呈絮状生长,结晶紫法以及激光共聚焦检测结果显示其生物被膜形成能力显著强于野生株,全基因组测序和比较发现XQW的sigB基因发生(Q225P)突变。构建的同源重组质粒p BT2-sigB(Q225P)及p BT2-△sigB转化金葡菌Newman后,经筛选,获得Newman-sigB(Q225P)及Newman-△sigB菌株;回补质粒p LI50-sigB及p LI50-sigB(Q225P)转化Newman-△sigB,筛选获得回补菌株Newman-△sigB/sigB及Newman-△sigB/sigB(Q225P)。经过结晶紫染色法及激光共聚焦测定生物被膜,发现Newman-sigB(Q225P)较野生株的生物被膜形成能力显著升高,与XQW的生物被膜形成能力强于XQ野生型的表型相一致;Newman-△sigB/sigB(Q225P)的生物被膜形成能力明显高于Newman-△sigB/sigB。结论 Sig B(Q225P)具有促进金葡菌生物被膜形成的能力。

关键词：金黄色葡萄球菌生物被膜同源重组 sigB

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的密码使用偏嗜性与tRNA基因

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第三军医大学学报 2002年第4期24卷 385-388页

作者：张克斌金晓琳陈志瑾朱军民饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆微生物工程重点实验室重庆400038

目的　检索分析铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的遗传密码使用偏嗜性及其tRNA基因的关系。方法　利用生物信息学软件和网上生物信息学工具 ,检索分析PaP3的遗传密码使用偏嗜性 ;并与铜绿假单胞菌PAO1的遗传密码使用偏嗜性进行对比分析 ;检索PaP... 详细信息

目的　检索分析铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的遗传密码使用偏嗜性及其tRNA基因的关系。方法　利用生物信息学软件和网上生物信息学工具 ,检索分析PaP3的遗传密码使用偏嗜性 ;并与铜绿假单胞菌PAO1的遗传密码使用偏嗜性进行对比分析 ;检索PaP3基因组中tRNA基因并分析其与遗传密码使用偏嗜性的关系。结果　遗传密码偏嗜性分析发现噬菌体PaP3和铜绿假单胞菌优势码一致的氨基酸有F uuc ,I auc ,V guc ,A gcc ,Y uac ,H cac ,N aac ,K aag和T acc ;PaP3单独具有偏嗜性密码的氨基酸有A gcu ,G ggu ,T acu和V gua ;铜绿假单胞菌PAO1单独具有偏嗜性密码的氨基酸有L cug ,V gug ,P ccg ,V gcg ,Q cag ,D gac ,E gag ,C ugc ,R cgc ,S agc和G ggc。tRNA基因查询发现了PaP3基因组中存在三段tRNA编码序列 ,分别编码tRNAAsn,tRNAAsp,tRNAPro;它们的反密码子分别为“gtt” ,“gtc”和“tgg” ,分析结果没有表明这三个tRNA基因与优势转运氨基酸有关。结论　铜绿假单胞菌PAO1的遗传密码偏嗜性更为明显 ,而PaP3的遗传密码偏嗜性相对较弱 ,两者在遗传密码偏嗜性方面并未表现出一致性 ;

关键词：噬菌体 PaP3 基因组密码偏嗜性 tRNA基因铜绿假单胞菌

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基于VEGFR靶点的小分子肿瘤靶向抑制肽的99Tcm标记及鉴定

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第三军医大学学报 2012年第1期34卷 24-28页

作者：冯世斌李前伟郑磊邹凌云查林任浩黄定德第三军医大学西南医院核医学科重庆400038 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室

目的探讨基于血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)靶点的小分子肿瘤靶向抑制肽理想的放射性核素99Tcm标记方法。方法多肽QKRKRKKSRKKH、RKRKRKKSRYIVLS分别经双功能螯合剂S-acetyl-MAG3、GA(D)GG、HYNIC修饰后进行放射性核素99 Tcm标记,HPLC及纸层析法鉴定其标记率及放化纯度,3 H-TdR参入实验鉴定其抑制细胞增殖的能力,体外受体竞争结合实验鉴定其受体结合活性。结果以HYNIC为双功能螯合剂,这2条多肽的99Tcm标记率分别为(94.13±1.77)%、(93.79±3.53)%,明显高于S-acetyl-MAG3、GA(D)GG修饰多肽的标记率。经HYNIC修饰后的多肽对肿瘤细胞A549增殖的抑制率约为(32.86±3.36)%、(61.50±4.50)%,与修饰前无明显变化(P>0.05);多肽标记后仍保持了良好的VEGFR结合活性,室温下放置24 h后,放化纯度仍高达90%左右。结论以HYNIC为双功能螯合剂,以TPPTS为协同配体及还原剂,多肽QKRKRKKSRKKH、RKRKRKKSRYIVLS的99 Tcm标记率高,且仍具有良好的抑制肿瘤细胞增殖的能力和VEGFR结合活性。

关键词：血管内皮生长因子双功能螯合剂核素标记肿瘤显像

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重复序列致agrC突变对金黄色葡萄球菌致病性的影响

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第三军医大学学报 2015年第5期37卷 398-403页

作者：饶青尚伟龙周人杰胡启文张晓鹏杨延成胡珍朱军民饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室、重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院急救部重庆400037

目的探讨金黄色葡萄球菌XQ株毒力变异的机制。方法以金黄色葡萄球菌ATCC25923为对照,采用动物实验观察临床分离的金葡菌XQ株在体外传代后的毒力改变;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析菌体及培养上清的蛋白谱变化,应用PCR进行金... 详细信息

目的探讨金黄色葡萄球菌XQ株毒力变异的机制。方法以金黄色葡萄球菌ATCC25923为对照,采用动物实验观察临床分离的金葡菌XQ株在体外传代后的毒力改变;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析菌体及培养上清的蛋白谱变化,应用PCR进行金葡菌附属调节基因agr扩增并测序,分析菌株毒力变异的机制,并进一步通过qRT-PCR检测XQ株agr调控的毒力因子变化情况。结果动物毒力实验证实XQ株的毒力较对照菌ATCC25923强,体外传代培养后,XQ株第180代菌株（XQ180）的毒力明显下降,SDS-PAGE分析发现毒力下降的XQ株（XQM株）培养上清的蛋白表达谱较XQ株有明显改变,对金葡菌agr基因进行测序分析发现XQM株的agr C基因第443位有一段188 bp的序列插入,而该插入序列就是agr C基因255~442间序列,正是该188 bp重复序列导致Agr C蛋白的截短型突变,引起新桥株的致病性降低,qRT-PCR检测结果证实XQM株中受agr调控的毒力基因表达水平显著下降。结论临床分离的金葡菌XQ株毒力强,在体外传代中易发生毒力变异,这种变异与重复序列导致的agr C突变有关。

关键词：金黄色葡萄球菌致病性动物毒力实验附属调节基因agr 重复序列

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位DNA结合能力的测定

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第三军医大学学报 2006年第22期28卷 2205-2208页

作者：申晓冬张克斌李明周莹冰蹇锐胡晓梅陈志瑾饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室第三军医大学新桥医院医学实验技术中心重庆400037

目的检测铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位与噬菌体基因组末端cos位点的结合能力。方法通过PCR扩增出末端酶大亚单位编码基因tls,经pMD-T18载体克隆至表达载体pQE31上,IPTG诱导表达,获得包涵体蛋白,用包涵体裂解液溶解包涵体,通过N... 详细信息

目的检测铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位与噬菌体基因组末端cos位点的结合能力。方法通过PCR扩增出末端酶大亚单位编码基因tls,经pMD-T18载体克隆至表达载体pQE31上,IPTG诱导表达,获得包涵体蛋白,用包涵体裂解液溶解包涵体,通过Ni-NTA亲和层析,分离出重组目的蛋白rTLS,透析复性后,与生物素标记的基因组末端cos片段进行结合反应,通过EMSA检测DNA滞后现象。结果成功构建了表达载体pQE-tls,获得了纯化的具有生物学活性的重组末端酶大亚单位rTLS,EMSA结果证实结合rTLS后的cos片段与无蛋白加入的对照组相比明显滞后。结论重组噬菌体PaP3末端酶大亚单位在体外可与基因组末端cos片段发生特异性结合,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。

关键词：末端酶大亚单位噬菌体PaP3 EMSA 蛋白表达

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重组Rab8截短体蛋白的原核表达、纯化和抗体制备

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 234-237页

作者：徐小峰田衍平陈宗涛陈炜江雯刘丽梅安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础。方法首先从HepG2细胞中克隆Rab8基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒... 详细信息

目的获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础。方法首先从HepG2细胞中克隆Rab8基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒。原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备Rab8多克隆抗体。采用ELISA法检测其效价,Western检验抗体特异性,间接免疫荧光染色法验证其免疫组化特性。结果克隆了人Rab8编码基因,构建了表达Rab8C端编码122个氨基酸的原核表达质粒pQE31-Rab8-122,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,获得相对分子量约15000的融合蛋白,免疫Balb/c小鼠后收获抗血清。ELISA显示抗体效价达1/20000。Western blot和免疫荧光染色结果显示此多克隆抗体能够与原核表达的Rab8蛋白发生特异性反应,并能够识别HepG2细胞中内源性Rab8蛋白。结论本研究获得原核表达的Rab8纯化蛋白,成功的制备了Rab8多克隆抗体,为进一步研究Rab8参与病毒感染宿主细胞提供了重要的实验材料。

关键词： Rab8 原核表达抗体制备

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Dynamitin真核表达载体的构建及鉴定

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 167-169页

作者：陈炜高娜王嘉丽田衍平陈宗涛徐小峰张俊磊刘丽梅江雯安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。... 详细信息

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-dyn;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示胞浆中有dyanimtin蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pRe-dyn,为后续研究dynamitin在病毒感染过程中的作用积累了有价值的实验资料。

关键词：病毒微管骨架逆行性运输胞质动力蛋白 Dynamitin

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