检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2005年第15期27卷 1551-1554页

作者：罗雪汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转... 详细信息

目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转化BL21菌,用IPTG诱导表达,表达产物通过免疫印迹实验鉴定。结果获得了预期的扩增目的片段,成功构建了pMD-18T重组克隆载体,核苷酸测序结果与GenBank登录的人sCR1-SCR15-18 cD-NA序列一致。成功的构建了原核表达载体pET32-sCR1-SCR15-18,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,并在菌体内形成包涵体。免疫印迹实验显示,在分子量约43×103处出现单一条带的阳性结果。结论从单核细胞中克隆出sCR1-SCR15-18片段基因,人sCR1-SCR15-18在大肠杆菌中得到高效表达。

关键词：可溶性补体Ⅰ型受体反转录多聚酶链式反应互补DNA克隆蛋白质表达

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AnnexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞中表达的研究

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第三军医大学学报 2005年第17期27卷 1793-1795页

作者：李习玲连小华杨力杨恬第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400044

目的探讨annexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞(keratinocyte,KC)中的表达。方法采用免疫组织化学(immunoh istochem istry,IHC)技术检测早、中、晚期人胚胎表皮KC及成人表皮KC中annexinⅡ蛋白的表达。结果①annexinⅡ在人胚胎期表皮KC... 详细信息

目的探讨annexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞(keratinocyte,KC)中的表达。方法采用免疫组织化学(immunoh istochem istry,IHC)技术检测早、中、晚期人胚胎表皮KC及成人表皮KC中annexinⅡ蛋白的表达。结果①annexinⅡ在人胚胎期表皮KC中的表达随胚胎的发育逐渐增强,在成人期表皮KC中的表达明显高于胚胎期。②annexinⅡ呈胞膜方式表达,主要分布于基底上层的分化KC中。结论annexinⅡ可能参与表皮KC分化的调控。

关键词： annexin Ⅱ 组织型纤溶酶原激活剂角质形成细胞分化人胚胎成人

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表皮角质形成细胞分化无血清培养方法的建立

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第三军医大学学报 2005年第13期27卷 1342-1344页

作者：李习玲连小华杨力杨恬第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400044

目的建立一种研究角质形成细胞分化的细胞培养方法。方法细胞培养采用无血清无钙离子的角质形成细胞生长培养基(keratinocytegrowthmedium,KGM),通过改变培养基中的钙离子浓度来调节角质形成细胞的分化状态,并对分化标记物K10以及在银... 详细信息

目的建立一种研究角质形成细胞分化的细胞培养方法。方法细胞培养采用无血清无钙离子的角质形成细胞生长培养基(keratinocytegrowthmedium,KGM),通过改变培养基中的钙离子浓度来调节角质形成细胞的分化状态,并对分化标记物K10以及在银屑病患者受损表皮中表达异常增高的组织型纤溶酶原激活剂(tissue-typeplasminogenactiva-tor,tPA)通过免疫细胞化学技术(immunocytochemistry,ICC)分别进行检测。结果低钙(0·09mmol/L)培养条件下,细胞处于未分化状态,K10染色为阴性,tPA呈弱阳性表达;高钙(1·5mmol/L)条件下,细胞出现分层分化,K10染色为阳性,tPA的表达明显增强。结论通过改变KGM的钙离子浓度来调节角质形成细胞的分化,可用于角质形成细胞分化的研究。

关键词：角质形成细胞生长培养基钙离子分化组织型纤溶酶原激活剂银屑病

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP1生物学特性的研究

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第三军医大学学报 2005年第9期27卷 860-863页

作者：李明申晓冬周莹冰黄建军胡晓梅饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1的形态大小、核酸类型、裂菌特性、最佳感染复数和一步生长曲线等基本生物学特性。方法　对CsCl梯度离心纯化后的噬菌体PaP1颗粒进行电镜观察;提取PaP1基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型... 详细信息

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1的形态大小、核酸类型、裂菌特性、最佳感染复数和一步生长曲线等基本生物学特性。方法　对CsCl梯度离心纯化后的噬菌体PaP1颗粒进行电镜观察;提取PaP1基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型;制备PaP1的单个噬斑,观察噬斑特点;按照感染复数(MOI)分别为0 0 0 0 1、0 0 0 1、0 0 1、0 1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌,3 7℃160r/min培养3 5h后测定噬菌体滴度;加入噬菌体及宿主菌使MOI =10 ,3 7℃温育15min后进行一步生长实验,于0时刻和每隔10min取样5 0 μl测定上清中噬菌体滴度。结果　PaP1噬菌体头部呈多面体立体对称,直径约70nm ,无囊膜,有一个约60nm长的尾;PaP1噬斑直径约2mm ,圆形透明;当MOI为0 0 1时PaP1感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高;根据一步生长实验结果绘制出了一步生长曲线。结论　PaP1属于肌尾科裂菌性噬菌体,其基因组为双链DNA分子;最佳感染复数为0 0 1,感染宿主菌的潜伏期是2 0min ,爆发期是40min ,平均爆发量约为65。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体裂菌性,最佳感染复数一步生长曲线

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生命科学的发展对寄生虫学教学改革的启示

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2005年第5期7卷 461-462页

作者：徐文岳夏丽莎黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室

在阐述模式昆虫和线虫对生命科学发展的基础上,大胆提出,从新的视角讲述人体寄生虫的生物学特点理应成为现有人体寄生虫学教学改革的重要部分之一.

关键词：寄生虫学教学改革模式生物

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诱导表皮角质形成细胞体外分层的途径及机制

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第三军医大学学报 2005年第12期27卷 1201-1203页

作者：连小华杨恬蔡绍皙杨力重庆大学生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400044 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的　探讨诱导表皮角质形成细胞体外分层途径及机制。方法　在体外培养状态下,利用气液界面培养法及高浓度钙离子诱导胎鼠皮片、表皮角质形成细胞分层,借助冰冻切片、免疫荧光及激光共聚焦等技术检测其分层层数及分化程度。结果　胚胎... 详细信息

目的　探讨诱导表皮角质形成细胞体外分层途径及机制。方法　在体外培养状态下,利用气液界面培养法及高浓度钙离子诱导胎鼠皮片、表皮角质形成细胞分层,借助冰冻切片、免疫荧光及激光共聚焦等技术检测其分层层数及分化程度。结果　胚胎龄16d的胎鼠皮片经气液界面培养3d后,其表皮基底上角质形成细胞由2层增加为5层;经气液界面培养7d后,胎鼠皮片表皮基底上角质形成细胞的局部区域分层已可达8层,细胞呈现更为分化的形态。在高浓度Ca2 + (1 5mmol L)条件下培养7d后,培养角质形成细胞发生了分层,分化标记物角蛋白K10在分层角质形成细胞中的表达明显增加。结论　气液界面培养法及高浓度钙离子能诱导表皮角质形成细胞的体外分层,同时促进其分化。

关键词：表皮角质形成细胞表皮分层体外诱导

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人层粘连蛋白α4链LG3-4组件的克隆和表达

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第三军医大学学报 2005年第11期27卷 1109-1112页

作者：戴旭芳连继勤张玉静胡仲明重庆师范大学特殊教育学院重庆400047 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 吉林大学和平校区生物化学与分子生物学教研室长春130062

目的　利用基因工程技术获得重组人层粘连蛋白α4链LG3 4组件(humanlamininAlpha4LG3 4Module ,hLNα4LG3 4)蛋白并检测其抗原性。方法　采用RT PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG3 4的cDNA片段,T A克隆法将其插入pMD 18T载体进行测... 详细信息

目的　利用基因工程技术获得重组人层粘连蛋白α4链LG3 4组件(humanlamininAlpha4LG3 4Module ,hLNα4LG3 4)蛋白并检测其抗原性。方法　采用RT PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG3 4的cDNA片段,T A克隆法将其插入pMD 18T载体进行测序。亚克隆法构建原核表达载体pET 2 8a LG3 4,在BL2 1(DE3 )中表达hLNα4LG3 4融合蛋白。融合蛋白经SDS PAGE鉴定、Ni NTA亲和层析纯化及Western印迹分析。结果　成功获得hLNα4LG3 4cDNA片段,与Gen Bank中序列同源性为98% ,突变碱基不改变蛋白的氨基酸序列。12 %SDS PAGE电泳检测显示:经IPTG诱导后BL2 1(DE3 ) /pET2 8a LG3 4细菌裂解液总蛋白中出现一条分子量为44×10 3的新蛋白带,纯化后目的蛋白纯度达95 %以上,且Western印迹可特异地检测到目的蛋白所对应转移带。结论　成功表达和纯化了hLNα4LG3 4蛋白,从而为研究LG组件在疾病发生过程中的作用及其功能位点打下了基础。

关键词： hLNα4LG3-4 克隆表达

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疟原虫蚊期发育相关基因的研究进展

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国外医学（寄生虫病分册） 2005年第3期32卷 120-125页

作者：陈继德张锡林宋蓓第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆市400038

疟原虫在蚊体内完成复杂的发育过程是疟原虫传播所必须的,研究蚊媒体内疟原虫的发育生物学是发展疟疾防治新策略的前提。近年来,对疟原虫在蚊体内发育,包括有性生殖开始阶段、配子生殖以及孢子增殖过程中表达基因的鉴别与分析取得了较... 详细信息

疟原虫在蚊体内完成复杂的发育过程是疟原虫传播所必须的,研究蚊媒体内疟原虫的发育生物学是发展疟疾防治新策略的前提。近年来,对疟原虫在蚊体内发育,包括有性生殖开始阶段、配子生殖以及孢子增殖过程中表达基因的鉴别与分析取得了较大的研究进展。随着疟原虫基因组测序的完成和多种方法学的应用,如蛋白组学、微阵列、基因敲除和差异文库等,大大推动了这方面的研究进展。该文就疟原虫在蚊体内生活史中的基因表达作一综述。

关键词：疟原虫相关基因蚊期发育发育生物学基因组测序发育过程疟疾防治体内发育有性生殖表达基因增殖过程配子生殖蛋白组学基因敲除基因表达蚊体内新策略方法学微阵列生活史

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约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白的二维电泳-质谱分析

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中国寄生虫病防治杂志 2005年第3期18卷 164-168页

作者：许颖张锡林段建华黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的分离和鉴定约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白,找出疟原虫子孢子侵入相关蛋白。方法采用二维蛋白电泳技术分离感染和未感染约氏疟原虫的斯氏按蚊中肠和唾液腺差异表达蛋白,考马斯亮蓝染色,BIORAD凝胶扫描仪和PDQUest图象软... 详细信息

目的分离和鉴定约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白,找出疟原虫子孢子侵入相关蛋白。方法采用二维蛋白电泳技术分离感染和未感染约氏疟原虫的斯氏按蚊中肠和唾液腺差异表达蛋白,考马斯亮蓝染色,BIORAD凝胶扫描仪和PDQUest图象软件分析,差异蛋白点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其肽质指纹图谱,用Mascot在相应的查询条件下搜索NCBInr数据库。结果获得了分辨率和重复性均较好的一维和二维蛋白图谱。凝胶扫描结果发现未感染蚊中肠有135个蛋白点,感染蚊中肠有158个蛋白点,相同有107个,pI偏酸性。未感染蚊唾液腺有178个蛋白点,感染蚊唾液腺有201个蛋白点,相同有167个,pI分布较均匀。选择7个差异蛋白点进行分析,得到了6个蛋白肽质指纹图谱,查询数据库初步鉴定疟原虫来源的蛋白质有5个,另1个来源于蚊组织。疟原虫来源蛋白为一些表面蛋白、代谢和运动相关的蛋白等。结论建立了一种较好的疟原虫子孢子蛋白分离和鉴定方法,并证明约氏疟原虫唾液腺子孢子表达大量差异表达蛋白,部分可能与其识别、侵入宿主细胞有关。

关键词：疟原虫约氏子孢子二维电泳基质辅助激光解析电离飞行时间质谱肽质指纹图谱

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斯氏按蚊PPO1基因克隆及其与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究

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中国寄生虫病防治杂志 2005年第5期18卷 321-324页

作者：杨松黄复生段建华第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的克隆和分析斯氏按蚊前酚氧化酶基因与约氏疟原虫卵囊黑化关系。方法根据其他昆虫前酚氧化酶基因的保守氨基酸序列设计简并引物,以斯氏按蚊全蚊RNA为模板,进行RT-PCR扩增,PCR产物纯化,克隆入pUCm-T载体,测定插入片段序列,对序列进行B... 详细信息

目的克隆和分析斯氏按蚊前酚氧化酶基因与约氏疟原虫卵囊黑化关系。方法根据其他昆虫前酚氧化酶基因的保守氨基酸序列设计简并引物,以斯氏按蚊全蚊RNA为模板,进行RT-PCR扩增,PCR产物纯化,克隆入pUCm-T载体,测定插入片段序列,对序列进行BLAST检索和鉴定。根据序列设计相应基因的特异引物,然后分别从血淋巴细胞或中肠扩增目的基因,并进行不同食源条件下前酚氧化酶基因的半定量、原位核酸分子杂交定位及与约氏疟原虫卵囊黑化关系的分析。结果获得了1种斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶基因cDNA部分序列,即AsPPO1(600bp),分别与冈比亚按蚊PPO1和大劣按蚊PPO2基因很相似,其编码的氨基酸序列均包含PO保守的铜结合位点CuA(HHWHWHLVYP)序列。在中肠和血淋巴内也获得相同的目的基因片段,半定量分析显示约氏疟原虫感染或诱导卵囊黑化呈现之前的表达明显增强,原位核酸分子杂交技术也进一步证实血淋巴有AsPPO1mRNA表达。结论As-PPO1很可能与疟原虫感染或约氏疟原虫卵囊黑化相关。

关键词：按蚊斯氏疟原虫约氏前酚氧化酶黑化 RT-PCR 原位核酸分子杂交

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