检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫病防治杂志 2005年第3期18卷 169-171页

作者：张健徐文岳段建华黄复生王英第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的构建大劣按蚊抗约氏疟原虫感染相关cDNA文库,为进一步筛选、克隆按蚊免疫差异新基因奠定基础。方法以大劣按蚊-约氏疟原虫为实验模型,分别将饱吸约氏疟原虫感染鼠血和正常鼠血后24h的大劣按蚊作为T组和D组,采用抑制差减杂交方法和T/... 详细信息

目的构建大劣按蚊抗约氏疟原虫感染相关cDNA文库,为进一步筛选、克隆按蚊免疫差异新基因奠定基础。方法以大劣按蚊-约氏疟原虫为实验模型,分别将饱吸约氏疟原虫感染鼠血和正常鼠血后24h的大劣按蚊作为T组和D组,采用抑制差减杂交方法和T/A克隆技术构建大劣按蚊抗约氏疟原虫感染相关cDNA文库。结果扩增差减cDNA文库获得2500余个白色阳性克隆,随机挑取白色克隆进行PCR扩增,92%的克隆中均有200～600bp的插入片段,测序显示,有与冈比亚按蚊未知功能基因同源的克隆。结论成功构建了大劣按蚊差异基因文库。

关键词：大劣按蚊疟原虫,约氏抑制差减杂交基因文库

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广州2002年登革病毒流行株的分离鉴定及进化分析

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第三军医大学学报 2005年第4期27卷 282-286页

作者：张俊磊蹇锐万颖杰彭涛安静张复春唐小平第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 广州市第八人民医院广州510060

目的　从 2 0 0 2年广州采集的可疑登革病人血清中分离登革病毒 ,明确流行株的血清型及基因型 ,并鉴定该分离株的毒力。方法　采集疑似登革热患者血清 2 0份 ,应用C6 3 6细胞体外培养的方法进行病毒分离 ,并合成登革病毒通用引物 ,进行... 详细信息

目的　从 2 0 0 2年广州采集的可疑登革病人血清中分离登革病毒 ,明确流行株的血清型及基因型 ,并鉴定该分离株的毒力。方法　采集疑似登革热患者血清 2 0份 ,应用C6 3 6细胞体外培养的方法进行病毒分离 ,并合成登革病毒通用引物 ,进行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)后 ,将PCR扩增产物克隆到T载体进行序列测定和比对。确定血清型后 ,进一步扩增在病毒进化上有代表意义的病毒血清型特异性E NS1连接区基因片段 ,测序后用邻位相连 (N J)法构建登革病毒进化树 ,分析此次登革病毒流行株的来源。通过乳鼠脑内接种及空斑实验 ,测定分离株的毒力。结果　上述 2 0份血清标本中 ,5份标本出现明显的细胞病变 ,主要表现为细胞融合 ,形成大小不一的空泡和网状结构。RT PCR扩增、序列测定证实为登革病毒Ⅰ型。E NS1连接区基因序列片段分析表明 ,2 0 0 2年广州分离株 (DEN 1 GZ2 0 0 2 )的核苷酸序列与基因型Ⅳ型的DEN 1 T14株 (澳大利亚 ,1981)同源性最高 ,达 98%。N J法构建进化树显示 :11株DEN 1病毒分成 3个基因群 ,分别与Rico Hesse 1990分型中的Ⅰ ,Ⅳ和Ⅴ型以及AnaP .Goncalvez 2 0 0 2年分型中的亚洲型 ,南太平洋型和美洲非洲型相符 ,本室分离的DEN 1 GZ2 0 0 2株属于Ⅳ型或者称南太平洋型。DEN 1 GZ2 0 0 2?

关键词：登革病毒 GZ2002株进化分析毒力

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登革病毒受体研究进展

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国外医学（临床生物化学与检验学分册） 2005年第2期26卷 92-94页

作者：陈炜安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

登革病毒(DV)属于黄病毒属,分为4 个血清型,是具有包膜的单股正链RNA病毒。DV可通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,引起登革热和登革出血热/登革休克综合征。该病广泛流行于热带和亚热带地区,是一种危害较大的传染病。DV感染机理尚不十分清楚... 详细信息

登革病毒(DV)属于黄病毒属,分为4 个血清型,是具有包膜的单股正链RNA病毒。DV可通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,引起登革热和登革出血热/登革休克综合征。该病广泛流行于热带和亚热带地区,是一种危害较大的传染病。DV感染机理尚不十分清楚,靶细胞上DV特异性受体的研究是近几年关注的热点,目前认为DV受体包括糖胺聚糖(GAGs)、硫酸乙酰肝素(HS)、与脂多糖连接的CD14相关分子等。现就DV受体的研究进展作一综述。

关键词：受体登革病毒研究进展埃及伊蚊登革出血热登革休克综合征黄病毒属感染机理糖胺聚糖 RNA病毒

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细胞培养中细菌类微生物污染的快速检测

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局解手术学杂志 2005年第2期14卷 88-90页

作者：万颖杰张俊磊安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　检测细胞培养中细菌类(包括支原体)微生物的污染情况。方法　用细胞培养中常见的培养物人为污染HeLa细胞,设计细菌类微生物16SrRNA基因序列通用引物,PCR扩增16SrRNA基因序列片断,建立PCR检测培养细胞污染的方法,并用该方法检测本... 详细信息

目的　检测细胞培养中细菌类(包括支原体)微生物的污染情况。方法　用细胞培养中常见的培养物人为污染HeLa细胞,设计细菌类微生物16SrRNA基因序列通用引物,PCR扩增16SrRNA基因序列片断,建立PCR检测培养细胞污染的方法,并用该方法检测本室保存的细胞株的污染情况。结果　人为污染绿脓杆菌、大肠杆菌、白色葡萄球菌和支原体M .fermentans的Hela细胞的培养上清中均扩增出大小的片段,与目的片段相符。本室所收藏的15个细胞株有3株的培养上清中扩增出大小的片段。结论　本实验建立了16SrRNA基因序列通用引物PCR法,可用于快速检测培养细胞中细菌类微生物的污染。

关键词：细胞培养细菌污染 PCR

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HLA与登革病毒致病的相关性研究进展

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国外医学（临床生物化学与检验学分册） 2005年第2期26卷 83-85页

作者：陈宗涛安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

人类白细胞抗原是目前已知人体最复杂的遗传多态性系统,其在人体生理、病理机制中的重要作用正逐步被认识。现就人类白细胞抗原与登革病毒致病机制的关系,尤其是与登革出血热/休克综合征的关系作一综述。

关键词：登革病毒人类白细胞抗原致病机制相关性研究登革出血热休克 HLA 遗传多态性人体生理

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布氏杆菌PBP_(39)蛋白抗原表达及免疫效果的研究

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第三军医大学学报 2005年第9期27卷 817-820页

作者：罗德炎曾政李非高永辉李鹏王希良何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室北京100071

目的　获得纯化的布氏杆菌PBP3 9重组蛋白抗原,观察PBP3 9重组蛋白的免疫原性。方法　扩增不同种布氏杆菌PBP3 9基因,测序、连接表达载体PET3 2a ,诱导表达,柱纯化PBP3 9重组蛋白抗原,免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗体及抗体亚型。结果　... 详细信息

目的　获得纯化的布氏杆菌PBP3 9重组蛋白抗原,观察PBP3 9重组蛋白的免疫原性。方法　扩增不同种布氏杆菌PBP3 9基因,测序、连接表达载体PET3 2a ,诱导表达,柱纯化PBP3 9重组蛋白抗原,免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗体及抗体亚型。结果　我国牛、羊、猪布氏杆菌PBP3 9基因与国外已报道的PBP3 9编码基因不完全相同。在蛋白N端5 8位碱基后多一G ,造成移码突变。故在85、86、87位编码终止子TCA。而在13 4、13 5、13 6位的ATG又编码了新的起始密码。布氏杆菌PBP3 9蛋白在大肠杆菌高效表达,表达量达40 % ,纯化重组蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,产生了较高水平的特异性抗体免疫应答,抗体亚型主要是IgG1。结论　我国牛、羊、猪布氏杆菌PBP3 9编码抗原蛋白同国外已报道的不完全相同,纯化的PBP3 9重组蛋白抗原可诱导高水平的抗体反应,为筛选布氏杆菌病新型疫苗保护性抗原分子奠定了基础。

关键词：布氏杆菌PBP39 重组蛋白抗原免疫原性

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人层粘连蛋白α4链LG4-5组件的原核表达及多克隆抗体制备

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第三军医大学学报 2005年第17期27卷 1729-1731页

作者：连继勤戴旭芳张玉静江渝何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 重庆师范大学特殊教育学院重庆400047 解放军军需大学军事兽医系生物化学与分子生物学教研室长春130062

目的利用基因工程技术克隆、表达人层粘连蛋白α4链LG4-5组件(hum an lam in in alpha4 LG4-5 modu le,hLNα4LG4-5)蛋白并制备其特异性多克隆抗体。方法采用RT-PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG4-5的cDNA片段,T/A克隆法将其插入pMD-18... 详细信息

目的利用基因工程技术克隆、表达人层粘连蛋白α4链LG4-5组件(hum an lam in in alpha4 LG4-5 modu le,hLNα4LG4-5)蛋白并制备其特异性多克隆抗体。方法采用RT-PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG4-5的cDNA片段,T/A克隆法将其插入pMD-18T载体进行测序。采用DNA重组技术构建原核表达载体pET-28 a-LG4-5,用BL21(DE3)/pET系统表达hLNα4LG4-5融合蛋白,以SDS-PAGE鉴定所表达的融合蛋白。用含融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫家兔,制备抗hLNα4LG4-5多克隆抗体,W estern印迹法检测抗体的特异性。结果成功克隆了hLNα4LG4-5的cDNA片段,12%SDS-PAGE电泳检测显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28 a-LG4-5总蛋白中出现一条分子质量为42×103的新蛋白带,制备了效价为1∶10 240的hLNα4LG4-5多克隆抗体,W estern印迹分析证实可检测到特异性目的蛋白带。结论克隆并原核表达了hLNα4LG4-5蛋白,制备了特异性抗hLNα4LG4-5的多克隆抗体,为进一步研究LG组件在疾病发生中所起的作用打下了基础。

关键词： hLNα4LG4-5 克隆表达多克隆抗体

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人LXR-LBD原核表达载体的构建及其在***中的表达

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生命科学研究 2005年第1期9卷 33-37页

作者：巩艳叶治家曹廷兵彭家和江渝第三军医大学西南医院消化科中国重庆400038 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室中国重庆400038

从正常中国人的肝脏组织分离总RNA,采用RT-PCR获得人的LXR-LBDcDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,构建高效原核表达质粒pET28a-LXR-LBD,序列分析表明正常中国人的LXR-LBDcDNA序列与GeneBank报道的序列一致.把构建的pET28a-LXR-LBD质粒... 详细信息

从正常中国人的肝脏组织分离总RNA,采用RT-PCR获得人的LXR-LBDcDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,构建高效原核表达质粒pET28a-LXR-LBD,序列分析表明正常中国人的LXR-LBDcDNA序列与GeneBank报道的序列一致.把构建的pET28a-LXR-LBD质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG进行诱导表达,Westernblot检测表达产物,在相对分子质量35kD处有特异的蛋白表达条带,表达蛋白以可溶性和包涵体方式存在.在N末端融合6×His纯化标签的表达产物用Ni2+-NTA离子交换树脂进行纯化,纯化蛋白进行SDS-PAGE纯度分析大于90%以上.

关键词： LXR LXR—LBD 克隆表达

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DAT1相互作用蛋白的筛选

DAT1相互作用蛋白的筛选

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中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会

作者：惠玲季朝能蔡文琴顾少华应康谢毅毛裕民第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室复旦大学生命科学院遗传所第三军医大学基础医学部神经生物学教研室复旦大学生命科学院遗传所复旦大学生命科学院遗传所复旦大学生命科学院遗传所复旦大学生命科学院遗传所

＜正＞目的:DAT1是LMO家族成员之一,在多巴胺刺激星形胶质细胞时上调表达,目前所知在神经系统有广泛表达,但具体作用未知。本文拟利用酵母双杂交系统筛选人胎脑组织中能与多巴胺相关转录因子DAT1的LIM2相互作用的蛋白质,以初步了解DAT1... 详细信息

＜正＞目的:DAT1是LMO家族成员之一,在多巴胺刺激星形胶质细胞时上调表达,目前所知在神经系统有广泛表达,但具体作用未知。本文拟利用酵母双杂交系统筛选人胎脑组织中能与多巴胺相关转录因子DAT1的LIM2相互作用的蛋白质,以初步了解DAT1的功能。方法:构建酵母双杂交诱饵质粒pLexA-LIM2,筛选人胎脑cDNA文库,并用酵母交配试验初步验证。结果:（1）果表明融合质粒pLexA-LIM2克隆成功。将此pLexA-LIM2质粒用LiAc法转化酵母双杂交报告菌株EGY48（p8op-LacZ）,将阳性的菌落涂布在加有X-Gal的SD/Gal/Raf/-His/-Ura营养缺陷型诱导平板,

关键词： DAT1 蛋白筛选 cDNA文库

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医学微生物学实验教学中的体会

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局解手术学杂志 2005年第2期14卷 121-121页

作者：陈炜万颖杰安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

医学微生物学是一门医学基础课,其特点是具有很强的实践性和应用性.实验教学的目的不仅是使学生了解和掌握微生物学实验基本方法和操作技术的一个学习过程,也为学生进一步深入学习微生物学及相关学科奠定基础.通过本课程学习,使学生牢... 详细信息

医学微生物学是一门医学基础课,其特点是具有很强的实践性和应用性.实验教学的目的不仅是使学生了解和掌握微生物学实验基本方法和操作技术的一个学习过程,也为学生进一步深入学习微生物学及相关学科奠定基础.通过本课程学习,使学生牢固掌握微生物学研究的基本方法与实验技术;加深学生对微生物学基本理论知识的理解与认识;提高观察、思考、分析和解决问题的能力;培养实事求是、严谨踏实的科学态度和良好作风[1].如何搞好实验教学,提高实验课质量,增强学生的学习兴趣,提高学生的综合能力,以下谈些初浅体会.

关键词：医学微生物学实验教学

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