神经突起导向因子Netrin-1是Netrin家族成员之一,由底板分泌,是最早被发现的可溶性神经突起导向因子,在许多物种的神经系统中都有较高表达。在神经发育过程中,Netrin-1通过与其受体结肠直肠癌缺失（deleted in colorectal cancer,DCC）...
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神经突起导向因子Netrin-1是Netrin家族成员之一,由底板分泌,是最早被发现的可溶性神经突起导向因子,在许多物种的神经系统中都有较高表达。在神经发育过程中,Netrin-1通过与其受体结肠直肠癌缺失（deleted in colorectal cancer,DCC）蛋白和UNC-5同源蛋白（uncoordinated-5 homolog,
目的表达2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的谷氨酸脱氢酶(glutamatedehydrogenase,GDH),研究其免疫学活性,探讨其作为疫苗候选分子的可能性。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出gd...
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目的表达2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的谷氨酸脱氢酶(glutamatedehydrogenase,GDH),研究其免疫学活性,探讨其作为疫苗候选分子的可能性。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出gdh基因片段,插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-gdh。该载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化*** Rosetta,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白。蛋白免疫印迹(western blot)证实目的蛋白的分子量和免疫反应原性。重组蛋白免疫小鼠后收集多抗血清,间接原位末端标记法(ELISA)检测其效价。结果 PCR扩增的gdh基因长度约为1300碱基对(bp),所构建重组表达载体酶切鉴定无误、测序证实碱基序列100%正确且保持正确读框。IPTG诱导表达,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的14.2%。亲和层析获得目的蛋白,纯度达80%以上。Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的患者血清发生阳性反应。重组蛋白免疫小鼠后血清效价达1∶25600以上。结论成功构建了表达载体pET30b-gdh,可在工程菌*** Rosetta中表达;表达蛋白具有良好的免疫学活性。
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