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OX40信号上调Survivin表达对CD4^+T淋巴细胞增殖存活的影响

免疫学杂志 2005年第2期21卷 81-83,87页

作者：王艳艳白云宋建勋杨晓亚第三军医大学医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学全军免疫学研究所重庆400038

目的　探讨OX4 0信号抑制活化后CD4 + T细胞凋亡,维持细胞存活及促增殖作用是否与Survivin相关。方法　分离培养小鼠脾脏CD4 + T淋巴细胞,以去除T细胞的脾细胞作为抗原呈递细胞,交联CD3单克隆抗体活化T细胞。用免疫印迹法比较不同时相点... 详细信息

目的　探讨OX4 0信号抑制活化后CD4 + T细胞凋亡,维持细胞存活及促增殖作用是否与Survivin相关。方法　分离培养小鼠脾脏CD4 + T淋巴细胞,以去除T细胞的脾细胞作为抗原呈递细胞,交联CD3单克隆抗体活化T细胞。用免疫印迹法比较不同时相点,加入OX4 0抗体及转染Survivin负显性突变体基因后,CD4 + T细胞中Survivin蛋白表达差异。流式细胞仪检测AnnexinV染色后细胞凋亡数量。〔3H〕TdR掺入法测细胞增殖。结果　CD4 + T细胞活化后2～8d ,OX4 0抗体刺激可明显增强Survivin表达,并减少2 5 %细胞凋亡;Survivin突变体降低Survivin蛋白表达后使凋亡增加2 2 %。结论　OX4 0信号能够通过上调Survivin表达来抑制CD4 + T细胞凋亡,从而维持细胞存活和增殖。

关键词： OX40 存活素 T淋巴细胞

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Peutz-Jeghers综合征1例及其基因诊断

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第三军医大学学报 2011年第12期33卷 1249-1249,1257页

作者：于妍妍郭洪石彦刘丹许雪青白云第三军医大学基础部医学遗传学教研室第三军医大学西南医院全军普通外科中心微创胃肠外科中心第三军医大学学员旅17队

Peutz-Jeghers综合征（PJS）是一种常染色体显性遗传病,现行的临床诊断条件为消化道2个或2个以上经组织学证实的错构瘤性息肉、皮肤或黏膜色素沉着以及家族史[1]。研究[2]发现STK11基因是PJS的致病基因,主要参与调控细胞周期、代谢和极... 详细信息

Peutz-Jeghers综合征（PJS）是一种常染色体显性遗传病,现行的临床诊断条件为消化道2个或2个以上经组织学证实的错构瘤性息肉、皮肤或黏膜色素沉着以及家族史[1]。研究[2]发现STK11基因是PJS的致病基因,主要参与调控细胞周期、代谢和极性等。由于PJS患者的临床表现存在异质性,因此其确诊需借助于基因诊断。

关键词： Peutz-Jeghers综合征 STK11 基因诊断突变

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小胶质细胞人补体攻膜复合物亚溶破模型制作及功能鉴定

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第四军医大学学报 2006年第10期27卷 872-874页

作者：罗娜白云周静然宋敏王艳艳杨晓亚许雪青段文元熊加祥第三军医大学医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学免疫学教研室重庆400038

目的：体外建立小鼠小胶质细胞补体攻膜复合物亚溶破模型，并进行功能鉴定，探讨补体攻膜复合物（sublytic membrane attack complex，sMAC）对中枢神经系统小胶质细胞的亚溶破刺激效应，方法：分离培养新生小鼠大脑皮层小胶质细胞，用... 详细信息

目的：体外建立小鼠小胶质细胞补体攻膜复合物亚溶破模型，并进行功能鉴定，探讨补体攻膜复合物（sublytic membrane attack complex，sMAC）对中枢神经系统小胶质细胞的亚溶破刺激效应，方法：分离培养新生小鼠大脑皮层小胶质细胞，用酵母多糖激活急性期患者血清制备补体优球蛋白C56，以新鲜正常人血清（NHS）作为C7-C9来源，体外组装小鼠小胶质细胞sMAC亚溶破模型，CCK-8比色实验确定sMAC亚溶破剂量，激光共聚焦显微镜（LSCM）鉴定sMAC沉积，脱落细胞计数及台盼蓝拒染法分别判定细胞黏附力变化及脱落细胞活力．ELISA法测定sMAC对小胶质细胞NO和TNF—α分泌量的影响．结果：确定C561：480，NHS1：20为小胶质细胞亚溶破补体量；LSCM显示sMAC沉积于小胶质细胞表面；sMAC刺激小胶质细胞后与对照组相比细胞脱落增加（P〈0．05），而活力正常．刺激后12hNO及TNF-α分泌量比对照组显著增加（P〈0．05），不同时相观察sMAC刺激后小胶质细胞TNF—α分泌量均显著高于失活sMAC（P〈0．05）．结论：sMAC刺激小胶质细胞后分泌NO及TNF—α增多，并且可降低小胶质细胞黏附力而不影响细胞活力，推测sMAC对小胶质细胞具有炎性刺激效应．

关键词： C56 补体攻膜复合物小神经胶质细胞显微镜检查,共焦细胞活力一氧化氮肿瘤坏死因子

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人OX40-Fc分子的构建、真核表达及活性研究

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免疫学杂志 2005年第1期21卷 13-16页

作者：王艳艳白云李茂全宋建勋许雪青第三军医大学医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学劳动卫生学教研室重庆400038 第三军医大学全军免疫学研究所重庆400038

目的　构建人OX4 0 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人OX4 0 Fc融合蛋白。方法　从活化的人T细胞cDNA文库中以PCR方法扩增OX4 0膜外区cDNA编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,进行酶切并与人IgG1Fc... 详细信息

目的　构建人OX4 0 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人OX4 0 Fc融合蛋白。方法　从活化的人T细胞cDNA文库中以PCR方法扩增OX4 0膜外区cDNA编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,进行酶切并与人IgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中 ,采用脂质体法稳定转染COS 7细胞 ,用夹心ELISA检测其表达情况 ,经蛋白A亲和纯化 ,用SDS PAGE与Westernblotting进行鉴定。检测其对活化后Jurkat细胞增殖的抑制活性。结果　测序证实构建的OX4 0膜外区与OX4 0 FccDNA阅读框完整 ,连接部位序列正确 ;ELISA证实OX4 0 Fc蛋白的表达 ;SDS PAGE与Westernblotting证实其为OX4 0 Fc蛋白。增殖实验证明其对活化后的Jurkat细胞有抑制增殖作用。结论　成功构建了人OX4 0 Fc真核表达载体 ,并使有生物学活性的OX4 0 Fc融合蛋白在COS 7细胞上获得了稳定表达。

关键词： OX40 OX40-Fc 真核表达共刺激分子

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星形胶质细胞抑制T细胞增殖及机制探讨

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第三军医大学学报 2005年第20期27卷 2020-2023页

作者：熊加祥白云宋敏许雪青王艳艳杨晓亚第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室

目的初步探讨星形胶质细胞影响T细胞增殖作用及机制。方法利用分离培养小鼠原代星形胶质细胞,以LPS和IFNγ刺激细胞活化,用RTPCR方法检测非活化与活化状态的星形胶质细胞B7.2、B7.1、MHCⅡ和B7H1等免疫分子的表达情况;将不同状态的细胞... 详细信息

目的初步探讨星形胶质细胞影响T细胞增殖作用及机制。方法利用分离培养小鼠原代星形胶质细胞,以LPS和IFNγ刺激细胞活化,用RTPCR方法检测非活化与活化状态的星形胶质细胞B7.2、B7.1、MHCⅡ和B7H1等免疫分子的表达情况;将不同状态的细胞分别与PHA刺激活化的小鼠T细胞进行共培养,观测其对T细胞增殖的影响,并分析可能的机制。结果小鼠原代星形胶质细胞在非活化状态下组成性表达B7.2和B7H1mRNA,在LPS和IFNγ刺激活化24h后B7H1的表达减少,而同时诱导表达MHCⅡ和B7.1mRNA,而TNFα作用不明显;非活化的星形胶质细胞对PHA刺激活化的T细胞增殖具有明显的抑制作用,而活化的星形胶质细胞的抑制作用减弱。结论小鼠星形胶质细胞在非活化及活化状态下对T细胞增殖具有不同的作用,其机制可能与其表达不同的免疫分子有关。

关键词：星形胶质细胞免疫分子 T细胞增殖

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载体介导的SIRNA抑制B7-H1在星形胶质细胞上的表达

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第三军医大学学报 2006年第4期28卷 298-300页

作者：熊加祥许雪青白云陈雪丹王璞宋敏第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室

目的构建SIRNA稳定表达载体,抑制B7-H1分子在星形胶质细胞上的表达,为研究大脑内B7-H1分子的功能提供有效实验工具。方法设计合成带有双向启动子具有转录功能性SIRNA载体,转入小鼠星形胶质细胞株CRL-2541内,干扰免疫分子B7-H1的表达,利... 详细信息

目的构建SIRNA稳定表达载体,抑制B7-H1分子在星形胶质细胞上的表达,为研究大脑内B7-H1分子的功能提供有效实验工具。方法设计合成带有双向启动子具有转录功能性SIRNA载体,转入小鼠星形胶质细胞株CRL-2541内,干扰免疫分子B7-H1的表达,利用荧光载体N1平行观察转染效果,RT-PCR方法检测B7-H1的MRNA表达,免疫组化检测蛋白表达水平,以观察干扰效率。结果星形胶质细胞株CRL-2541经RNAI沉默后B7-H1MRNA表达下调,免疫组化发现其蛋白水平下降。结论成功建立具有双向启动子的SIRNA载体,并在星形胶质细胞中抑制B7-H1的表达。

关键词： RNAi B7-H1 星形胶质细胞

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大鼠骨骼肌胰岛素受体的部分纯化及其特征

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第三军医大学学报 1998年第6期20卷 548-550页

作者：毛琼国张波第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室

目的：对大鼠骨骼肌胰岛素受体的结构和特征进行分析。方法：采用麦胚凝集素琼脂糖凝胶（ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ）部分纯化骨骼肌胰岛素受体；通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、胰岛素结合实验以及受体自身磷酸化和外源性底物磷酸化实验... 详细信息

目的：对大鼠骨骼肌胰岛素受体的结构和特征进行分析。方法：采用麦胚凝集素琼脂糖凝胶（ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ）部分纯化骨骼肌胰岛素受体；通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、胰岛素结合实验以及受体自身磷酸化和外源性底物磷酸化实验，分析受体的结构，并研究其特征。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明骨骼肌胰岛素受体由两处分子量分别为１３５×１０３ｕ和９５×１０３ｕ亚基组成；受体结合实验经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图分析表明受体与胰岛素结合呈负协同效应，最大结合容量为（０．９６±０．３４）ｐｍｏｌ／ｍｇ，受体β－亚基能自身磷酸化，且能激活受体内在酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活性，并呈胰岛素剂量依赖关系。结论：ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ纯化的骨骼肌胰岛素受体纯度和活性较好。

关键词：骨骼肌胰岛素受体纯化大鼠 TPK

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人LIGHT基因的克隆及其在293T细胞中的表达

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第三军医大学学报 2004年第8期26卷 667-669页

作者：姜曼黄钢黎万玲白云第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部:分子遗传学教研室重庆400038

目的　克隆人LIGHT分子的全长cDNA ,构建重组真核表达质粒pCI neo LIGHT并在 2 93T细胞上获得稳定表达。方法　从人T细胞cDNA文库中用PCR技术克隆人LIGHT全长cDNA ,装入T Easy载体 ,测序证实后 ,将LIGHTcDNA装入质粒pCI neo中构建真核... 详细信息

目的　克隆人LIGHT分子的全长cDNA ,构建重组真核表达质粒pCI neo LIGHT并在 2 93T细胞上获得稳定表达。方法　从人T细胞cDNA文库中用PCR技术克隆人LIGHT全长cDNA ,装入T Easy载体 ,测序证实后 ,将LIGHTcDNA装入质粒pCI neo中构建真核表达载体。用电穿孔法转染 2 93T细胞 ,经G418筛选后 ,用流式细胞仪检测LIGHT分子的表达。结果　测序证实克隆的LIGHT全长cDNA阅读框正确完整 ,酶切证实LIGHT pCI neo中LIGHT插入方向正确。转染的2 93T细胞经G418筛选 3个月后 ,流式细胞仪检测有 78 69%的细胞表达人LIGHT分子。结论　成功克隆LIGHT基因并获得稳定表达膜型LIGHT分子的 2 93T细胞系。

关键词： LIGHT 293T细胞基因克隆真核表达

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Bax基因P53结合位点多态性与食管鳞癌易感性的关联研究

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第三军医大学学报 2012年第10期34卷 963-966页

作者：刘波涛王凯许雪青熊刚郭洪官兴颖白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 西南医院胸心外科

目的探讨Bax基因P53结合位点多态性与我国西南地区食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carci-noma,ESCC)发病的关联性。方法利用SNaPshot技术检测201例食管鳞癌病例组及183例健康对照的Bax基因rs1009316位点多态性的分布情况,分... 详细信息

目的探讨Bax基因P53结合位点多态性与我国西南地区食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carci-noma,ESCC)发病的关联性。方法利用SNaPshot技术检测201例食管鳞癌病例组及183例健康对照的Bax基因rs1009316位点多态性的分布情况,分析不同基因型与食管鳞癌易感性的关联。结果食管鳞癌病例组和对照组中rs1009316的CC和CT/TT基因型频率分别为59.2%、40.8%和73.2%、26.8%,CT/TT相比CC增加食管鳞癌的发病风险(OR值为1.884,95%CI为1.224～2.901),T等位基因增加食管鳞癌的发病风险(OR值1.620,95%CI为1.103～2.379)。分层分析发现,无吸烟史群体中,T等位基因(OR值为1.858,95%CI为1.050～3.288)及CT/TT基因型(OR值为2.178,95%CI为1.143～4.147)分别增加食管鳞癌的发病风险。结论在中国西南地区人群中,Bax基因P53结合区域的多态性位点rs1009316是食管鳞癌的危险因素之一。

关键词： Bax P53 单核苷酸多态性(SNP) 食管鳞状细胞癌危险因素

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降钙素基因相关肽对人脐带间充质干细胞成骨分化的影响

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第三军医大学学报 2018年第6期40卷 479-486页

作者：高振吴琴郭俊峰李铀陈雪丹高强国张纲陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院口腔科重庆400037 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院医学遗传学教研室重庆400038

目的探讨降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)在人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymalstem cells,HUMSCs)向成骨细胞分化过程中的作用及机制。方法体外培养HUMSCs细胞,加入0、10-9、10-8、10-7mol/L浓度的CGRP诱导其向成骨细胞分化,分别在第7、9、11、14天时采用茜素红染色检测成骨分化程度,实时定量PCR和Western blot检测ERK、RUNX2、OSTERIX的mRNA和磷酸化的ERK、RUNX2、OSTERIX的蛋白表达。结果 HUMSCs高表达CD73、CD90、CD105等间充质干细胞表面抗原,但不表达CD14、CD20、CD34、CD45等上皮和造血干细胞的表面抗原,可诱导向成骨细胞分化,随着时间延长矿化结节数量增加(P<0.05);随着CGRP浓度的升高,矿化结节减少,ERK、RUNX2、OSTERIX的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。结论 CGRP通过ERK信号通路抑制HUMSCs向成骨细胞的分化,并呈现出浓度和时间依赖性。

关键词：降钙素基因相关肽人脐带间充质干细胞成骨细胞细胞分化

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