检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验动物学报 2007年第6期15卷 419-424页

作者：商海涛夏放魏泓第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038 成都生物制品研究所成都610023

目的检测和评估金黄地鼠封闭群SPF化后的遗传学变化,为SPF金黄地鼠遗传质量的控制提供技术资料。方法应用小鼠和大鼠的微卫星标记筛选适于金黄地鼠遗传检测的微卫星标记,并结合微卫星荧光标记-半自动基因分型技术,对成都生物制品研究所... 详细信息

目的检测和评估金黄地鼠封闭群SPF化后的遗传学变化,为SPF金黄地鼠遗传质量的控制提供技术资料。方法应用小鼠和大鼠的微卫星标记筛选适于金黄地鼠遗传检测的微卫星标记,并结合微卫星荧光标记-半自动基因分型技术,对成都生物制品研究所的SPF级金黄地鼠及其来源的普通级金黄地鼠进行遗传检测,计算其群体遗传学参数。结果对18个小鼠和6个大鼠微卫星标记进行了筛选,分别有2个小鼠和2个大鼠微卫星标记在金黄地鼠种群中具PCR扩增多态性。4个检测的微卫星位点在普通级金黄地鼠和SPF金黄地鼠种群分别发现25和20个等位基因,两群体的期望杂合度分别为0.4979和0.5048,其群体遗传多样性无显著差异;群体间的不同微卫星位点FST范围从0.0095到0.0367,平均为0.0315,表明两群体间的遗传分化很弱,其遗传多样性主要存在于群体内;Nei(1972)遗传距离和Nei(1978)无偏遗传距离分别为0.0678和0.0570,表明了2群体之间很高的遗传相似度和非常近的亲缘关系;Hardy-Weinberg平衡检验表明普通级和SPF金黄地鼠分别有2个和3个位点偏离遗传平衡,且偏离位点均表现为杂合子缺陷。结论该SPF金黄地鼠基本保持了其来源普通级黄地鼠的遗传多样性,两群体间遗传分化程度和遗传差异很小,但应进一步加强其封闭群的繁育控制,保持其遗传稳定性。

关键词：金黄地鼠微卫星无特定病原体动物封闭群遗传分化

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山羊精子介导法转染外源基因影响因素及最适条件的研究

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生物技术通报 2009年第S1期25卷 310-314,330页

作者：孙新明邱效武江嘉陵魏泓井冈山大学医学院吉安343000 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038

探讨山羊精子与外源DNA共孵育转染外源DNA效率的影响因素,优化精子转染程序。用DIG免疫组化方法检测和比较精子转染效率,因素为精子洗涤程度、转染缓冲液、精子活力、BSA、肝素、异种动物精浆等。离心洗涤3次以内的山羊精子DNaseⅠ消化... 详细信息

探讨山羊精子与外源DNA共孵育转染外源DNA效率的影响因素,优化精子转染程序。用DIG免疫组化方法检测和比较精子转染效率,因素为精子洗涤程度、转染缓冲液、精子活力、BSA、肝素、异种动物精浆等。离心洗涤3次以内的山羊精子DNaseⅠ消化前、后阳性率随洗涤次数增加而显著增加(P<0.05),而离心3次以上的转染效率略有下降;以mDM为共孵育缓冲体系可获得较高的转染效率;活力为0.55的精子转基因阳性率显著低于活力为0.9的精子(消化前、后阳性率分别为35.4±2.9%和21.8±5.3%vs 63.5±7.2%和50.3±2.8%,P<0.05);共孵育体系中异种动物精浆可显著降低转染效率(P<0.01),甚至与肝素可置换出已结合和内化转运到精子内的外源DNA,而共孵育体系中的BSA可抑制精子内化外源DNA。山羊共孵育法转染外源基因最适转染条件为mDM缓冲液洗涤3次后上浮收集高活力精子进行转染。

关键词：精子介导基因转染最适转染条件山羊

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5-氮杂-2'-脱氧胞苷抑制肾癌细胞增殖的机制研究

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 847-851页

作者：熊浩君赵凯何凤田曾益军陈姗陈丙波第三军医大学实验动物中心重庆400038 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制肾癌细胞增殖的分子机制。方法采用不同浓度的5-Aza-CdR作用于769-P和ACHN 2种肾癌细胞,处理72 h后CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h后,流式细胞仪测定细胞周... 详细信息

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制肾癌细胞增殖的分子机制。方法采用不同浓度的5-Aza-CdR作用于769-P和ACHN 2种肾癌细胞,处理72 h后CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h后,流式细胞仪测定细胞周期分布,RT-PCR测定甲基化转移酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b以及细胞信号抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的表达,Western blot测定SOCS3、P21在蛋白质水平的表达;siRNA干扰SOCS3表达以后,加5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h,Western blot检测细胞内SOCS3、P21的表达。结果 5-Aza-CdR可以剂量性依赖地抑制肾癌细胞系769-P和ACHN的增殖(P<0.05),且使769-P细胞阻滞在G2/M期。RT-PCR检测发现,5-Aza-CdR可以下调DNMT1和DNMT3a的表达和上调SOCS3的表达(P<0.05)。Western blot检测发现5-Aza-CdR可以促进SOCS3蛋白质的表达,并且伴随着P21蛋白的升高。在干扰SOCS3的表达后,用5-Aza-CdR处理769-P细胞48 h,P21的表达明显降低。结论 5-Aza-CdR通过抑制甲基化转移酶,增强SOCS3介导P21的表达,从而抑制肾癌细胞769-P增殖。

关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷肾细胞癌细胞增殖细胞信号抑制因子3 P21

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CYP3A29稳定表达HepG_2细胞株的建立及其硝苯地平代谢活性鉴定

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中国人兽共患病学报 2009年第7期25卷 640-644,649页

作者：薛正楷魏泓商海涛叶彬重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 第三军医大学实验动物学教研室

目的建立稳定表达Bama小型猪CYP3A29的HepG2细胞株。方法通过总RNA提取、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A29的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体PMD18-T上得到重组质粒pMD-3A29;以测序正确的重组质粒pMD-3A29为模板,采用PCR扩增CYP3A29基因... 详细信息

目的建立稳定表达Bama小型猪CYP3A29的HepG2细胞株。方法通过总RNA提取、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A29的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体PMD18-T上得到重组质粒pMD-3A29;以测序正确的重组质粒pMD-3A29为模板,采用PCR扩增CYP3A29基因并在其3′添加组氨酸标签,扩增产物经BamHI/XhoI双酶切,将带有组氨酸标签的CYP3A29基因定向克隆至pcDNA3.1(+)中,并测序验证;将测序正确的CYP3A29基因通过脂质体转染至HepG2细胞,G418筛选10代,经RT-PCR及Western-blot分析及探针药物硝苯地平对重组细胞进行活性鉴定。结果与HepG2相比,HepG2-CYP3A29细胞株具有极显著的硝苯地平氧化活性。结论成功建立了稳定表达CYP3A29的HepG2细胞株,可用于相关药物代谢研究。

关键词：巴马小型猪 CYP3A29同工酶 HepG2 逆转录酶PCR Western-blot 硝苯地平

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pBR002-HLA-DRB1＊ 0803转基因载体构建、表达及其抗原递呈功能研究

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第三军医大学学报 2016年第9期38卷 916-920页

作者：张旭晖何韦韦谭文婷但芸婕李辉文王勇邓国宏第三军医大学西南医院全军感染病研究所感染病研究重庆市重点实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的构建可以表达人类HLA-DRB1*0803的转基因载体,并在细胞水平验证其表达及抗原递呈功能。方法提取人WATANABE细胞株(基因型为HLA-DRB1*0803纯合子)的总RNA,RTPCR扩增DRB1*0803基因片段,与小鼠Eαpromoter和兔β-globin基因内含子序列... 详细信息

目的构建可以表达人类HLA-DRB1*0803的转基因载体,并在细胞水平验证其表达及抗原递呈功能。方法提取人WATANABE细胞株(基因型为HLA-DRB1*0803纯合子)的总RNA,RTPCR扩增DRB1*0803基因片段,与小鼠Eαpromoter和兔β-globin基因内含子序列同时导入p BR002-lacz载体。pBR002-HLA-DRB1*0803转基因载体转染小鼠DCS细胞和B细胞系,用Western blot和免疫荧光的方法对HLA-DRB1蛋白进行检测。流式细胞术检测转染小鼠DCS细胞对HBc Ag特异性CD4+T细胞的刺激和极化效应。结果经双酶切和测序验证,成功构建了p BR002-HLA-DRB1*0803转基因载体;转染载体后的小鼠DCS细胞和B细胞系均表达出了大小约为29×10~3的HLA-DRB1蛋白;免疫荧光结果表明HLA-DRB1蛋白主要表达于细胞质内。转染后的小鼠DCS细胞可将负载的HBcAg递呈给HLA-DRB1*0803阳性基因型的人CD4^+T细胞,产生明显的CD4^+T细胞应答。结论成功构建了HLA-DRB1*0803转基因载体,该载体可以在细胞水平特异性表达HLA-DRB1蛋白,并具有HLADRB1*0803特异性抗原递呈功能。

关键词： HLA-DR 转基因载体乙型肝炎病毒抗原递呈

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无菌动物在饮食干涉肠道菌群研究中的应用

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中国实验动物学报 2017年第6期25卷 676-680页

作者：董飒爽曾本华王洁魏泓方祥华南农业大学食品学院广州510640 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038

膳食干涉对肠道菌群与健康的影响已成为医学健康领域的研究热点,从发展来看,肠道菌群有可能会成为研究饮食方式、保健食品、中药制剂等对人体健康影响的重要靶标。然而,肠道菌群由于其复杂性,研究它和饮食干涉的关系对动物模型有高标准... 详细信息

膳食干涉对肠道菌群与健康的影响已成为医学健康领域的研究热点,从发展来看,肠道菌群有可能会成为研究饮食方式、保健食品、中药制剂等对人体健康影响的重要靶标。然而,肠道菌群由于其复杂性,研究它和饮食干涉的关系对动物模型有高标准的要求,无菌动物体内外不携带任何活的微生物和寄生虫,在生物医学及人体疾病和健康等方面均有一定的应用和研究,是当前肠道菌群研究中应用最多的基础动物模型。采用无菌动物构建人源菌群动物是研究饮食、菌群与健康关系的常用方式。本文主要综述无菌动物构建人源菌群动物的研究应用及饮食干涉对肠道菌群的影响。

关键词：无菌动物肠道菌群饮食干涉

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仔猪睾丸间质细胞培养方法的比较

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中国兽医杂志 2013年第11期49卷 29-31,35页

作者：卿利娟魏泓李婧肖榕吴群葛亮商海涛郑小波刘宇西南大学动物科技学院重庆北碚400715 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆沙坪坝400038

为了对比仔猪睾丸间质细胞不同培养方法的培养效果。运用过筛培养法、不过筛培养法,组织块培养法3种方法对仔猪睾丸间质细胞进行体外分离和培养,并对其进行细胞各项指标的比较。结果显示,不过筛培养法培养的细胞活力、纯度、细胞功能都... 详细信息

为了对比仔猪睾丸间质细胞不同培养方法的培养效果。运用过筛培养法、不过筛培养法,组织块培养法3种方法对仔猪睾丸间质细胞进行体外分离和培养,并对其进行细胞各项指标的比较。结果显示,不过筛培养法培养的细胞活力、纯度、细胞功能都较好,培养时间也短;过筛培养法培养的细胞活力较低;组织块培养法培养的细胞纯度较低。但在其他细胞指标上,后两种方法又各自有优点。结果3种培养方法都能简单有效的培养出状态良好的仔猪睾丸间质细胞,但其在纯度,活力,培养时间等方面有所差别。

关键词：睾丸间质细胞猪纯度活力功能

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茶多酚对apoE^(-/-)小鼠脂类代谢和肠道双歧杆菌的影响

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食品与机械 2012年第4期28卷 106-109页

作者：王玮曾本华李桂花廖振林张晓婧魏泓方祥华南农业大学食品学院广东广州510642 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038

研究茶多酚对小鼠脂类代谢和结肠双歧杆菌的影响,探讨茶多酚采食与脂类代谢和肠道双歧杆菌之间的关系。ApoE-/-小鼠以高脂饲料饲养并在饮水中添加1.6g/L茶多酚,8周后用变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析肠道双歧杆菌多样性。结果表明,高脂饮... 详细信息

研究茶多酚对小鼠脂类代谢和结肠双歧杆菌的影响,探讨茶多酚采食与脂类代谢和肠道双歧杆菌之间的关系。ApoE-/-小鼠以高脂饲料饲养并在饮水中添加1.6g/L茶多酚,8周后用变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析肠道双歧杆菌多样性。结果表明,高脂饮食对照组(HF)和茶多酚组(T)肠道双歧杆菌多样性有显著差异;16周后,T组血清中TC、LDL-C含量分别为19.8,16.1mmol/L,显著低于HF组的36.4,28.4mmol/L(P<0.05)。说明茶多酚采食对apoE-/-小鼠肠道双歧杆菌菌群多样性和脂类代谢均有显著的影响。

关键词：茶多酚双歧杆菌脂类代谢 PCR-DGGE

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PCR-DGGE法评价连续培养模型中肠道菌群的多样性

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中国微生态学杂志 2008年第2期20卷 105-107页

作者：陈廷涛曾本华袁静唐欢魏泓第三军医大学基础部实验动物学教研室

目的建立人体肠道菌群连续培养模型，验证连续培养模型培养肠道菌群的可行性和稳定性。方法建立连续培养系统，把正常人粪便接种于发酵罐中培养，通过活菌计数和PCR—DGGE法分析连续培养系统中菌群的多样性变化。结果连续培养系统中菌... 详细信息

目的建立人体肠道菌群连续培养模型，验证连续培养模型培养肠道菌群的可行性和稳定性。方法建立连续培养系统，把正常人粪便接种于发酵罐中培养，通过活菌计数和PCR—DGGE法分析连续培养系统中菌群的多样性变化。结果连续培养系统中菌群数量由接种前的10^10～10^11CFU／ml降至10^8-10^9CFU／ml并最终达到稳态；PCR—DGGE法分析结果表明，菌群的多样性指数稳定，各条带均匀度趋于一致。结论连续培养模型能较好模拟人体肠道微生态环境，再现了肠道菌群组成的多样性，可作为肠道菌群培养及菌群相关性研究的离体模型。

关键词：活菌计数 PCR—DGGE 连续培养系统

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hu-PBL-SCID小鼠体内人淋巴细胞状况及其对人肺癌移植瘤转移的影响

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中国实验动物学报 1999年第2期7卷 65-70页

作者：魏泓牛荣周建华吴丰春邢瑞昌第三军医大学实验动物学教研室重庆400038 中国药品生物制品检定所实验动物中心

将人外周血淋巴细胞经腹腔移植于T、B细胞严重联合免疫缺陷的SCID小鼠后,成功地建立了hu - PBL- SCID小鼠模型。在移植后4 周,其小鼠血清中存在人免疫球蛋白,其脾淋巴细胞中,所检测的8 种免疫表型人淋巴细胞亚群均存在,表明人淋巴细胞在... 详细信息

将人外周血淋巴细胞经腹腔移植于T、B细胞严重联合免疫缺陷的SCID小鼠后,成功地建立了hu - PBL- SCID小鼠模型。在移植后4 周,其小鼠血清中存在人免疫球蛋白,其脾淋巴细胞中,所检测的8 种免疫表型人淋巴细胞亚群均存在,表明人淋巴细胞在SCID小鼠体内出现了增殖或重建。但hu- PBL- SCID小鼠及未免疫重建的SCID小鼠体内人肺巨细胞癌PLA- 801DL的生长及转移情况未见明显差异,提示hu- PBL- SCID小鼠体内的人淋巴细胞不具有明显的抗肿瘤活性。

关键词： SCID小鼠人淋巴细胞体内 PBL 移植瘤人肺癌转移生长增殖脾淋巴细胞

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