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rhBMP-2和rhVEGF转染ADSCs后体外表达及诱导骨缺损成骨修复的实验研究

创伤外科杂志 2007年第4期9卷 296-300页

作者：杨在亮张波周继红黄宏张良刘大维第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察重组人骨形成蛋白2(rhBMP-2)和血管内皮生长因子(rhVEGF)转染脂肪源性干细胞(ADSCs)后的体外表达情况,并以含该转染体系的组织工程骨进行大动物负重骨缺损的修复研究。方法将外源性基因rhBMP-2和rhVEGF通过脂质体LipofectamineT... 详细信息

目的观察重组人骨形成蛋白2(rhBMP-2)和血管内皮生长因子(rhVEGF)转染脂肪源性干细胞(ADSCs)后的体外表达情况,并以含该转染体系的组织工程骨进行大动物负重骨缺损的修复研究。方法将外源性基因rhBMP-2和rhVEGF通过脂质体LipofectamineTM2000介导的方式转染第四代ADSCs,以G418筛选出阳性克隆并扩大培养后,用RT-PCR和SABC免疫组化法在转录和蛋白质水平观察其转染后第2天和第4周表达情况。建立小香猪自体前肢尺骨中段1.5cm骨缺损模型,分3组进行对比试验:(A组)转染了生物活性因子的ADSCs与脱细胞骨基质材料(ACBM)复合而成新型组织工程骨植入修复组;(B组)未转染生物活性因子的ADSCs复合ACBM植入修复组;(C组)未处理组。以X线和组织切片评价其修复效果。结果转基因ADSCs在转染后瞬时和4周时都可表达rhBMP-2和rhVEGF。大动物骨缺损修复实验中,前2周内3组动物均未出现明显的急性炎症反应;连续X线观察和骨切片显示:A组在术后第3个月已完全修复,且修复效果和进程明显优于B组,C组缺损则主要由纤维结缔充填。结论rhBMP2及rh-VEGF转染ADSCs后可获得4周内稳定的表达。携带该缓释体系的新型组织工程骨是一种具有显著成骨能力的优良骨缺损修复材料。

关键词：重组人骨形成蛋白2 血管内皮生长因子转染转染脂肪源性干细胞表达组织工程骨骨缺损修复

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水下冲击伤伤情特点的实验研究

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创伤外科杂志 2007年第6期9卷 540-543页

作者：王峰周继红杨志焕王正国李晓炎宁心张波刘大维严军董蕻张良杨在亮杨列第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨水下冲击伤的伤情特点。方法成年杂种犬19只,布放于离爆心10.36、12.79、15.25m,1.019kg和1.020kg TNT水下3m爆炸,PCB压力传感器测定冲击波物理参数,观察现场至伤后20-28小时动物存活情况和大体形态学改变。结果犬死亡率为31.58... 详细信息

目的探讨水下冲击伤的伤情特点。方法成年杂种犬19只,布放于离爆心10.36、12.79、15.25m,1.019kg和1.020kg TNT水下3m爆炸,PCB压力传感器测定冲击波物理参数,观察现场至伤后20-28小时动物存活情况和大体形态学改变。结果犬死亡率为31.58%（6/19）。形态学观察发现肺损伤发生率最高（100%）,主要表现为不同程度的肺出血和肺水肿;其次为肠道损伤（26.32%）,主要表现为浆膜下出血,浆肌层撕裂和浆膜下血肿;部分可见肝脾轻微的包膜下出血和血肿。1例出现膀胱浆膜和黏膜下出血,体表未见损伤。结论水下冲击伤具有死亡率高,肺损伤发生率高、肠道损伤发生率较高、肝脾等实质脏器损伤轻微,胆囊、膀胱等含液脏器和体表很少发生损伤等特点。

关键词：水下爆炸冲击波冲击伤伤情特点

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参芪扶正注射液对心肌挫伤后家兔心肌细胞凋亡的影响

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第三军医大学学报 2007年第7期29卷 588-591页

作者：吴正国梁贵友李正勋刘日辉牛义民周继红遵义医学院第一附属医院胸心外科遵义563003 湖北省仙桃市第一人民医院胸心外科仙桃433000 湖北省襄樊市中心医院胸心外科襄樊441000 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨参芪扶正注射液对心肌挫伤后家兔心肌细胞凋亡及其Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法健康家兔50只,简单随机化摸球法分为4组,参考组(Reference,n=20)、对照组(Control,n=10)、参芪扶正注射液治疗组(Sen,n=10)和心肌挫伤组(MC,n=10... 详细信息

目的探讨参芪扶正注射液对心肌挫伤后家兔心肌细胞凋亡及其Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法健康家兔50只,简单随机化摸球法分为4组,参考组(Reference,n=20)、对照组(Control,n=10)、参芪扶正注射液治疗组(Sen,n=10)和心肌挫伤组(MC,n=10)。利用BIM-Ⅱ型生物撞击机制备心肌挫伤模型,应用ELISA法测定心肌肌钙蛋白I(cTnI),应用TUNEL法并结合流式细胞术观察心肌细胞凋亡发生的情况,应用免疫组化SABC法观察Bcl-2和Bax蛋白的表达。对照组除不撞击胸部外,余处理均同MC组。结果MC组与Sen组在伤后4h血清cTnI含量均高于各自伤前及对照组相应时相点(P<0.05);对照组未见TUNEL阳性细胞,MC组和Sen组心肌细胞凋亡指数(AI)分别为(15.6860±0.6887)%和(5.5790±0.1917)%(P<0.05),凋亡率分别为(6.9320±0.6380)%和(3.0210±0.2540)%(P<0.05);与对照组比较,MC组的Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达光密度值均明显增高(P<0.05);而Sen组的Bcl-2蛋白表达光密度值高于MC组(P<0.05),Bax蛋白表达光密度值低于MC组(P<0.05)。结论参芪扶正注射液能有效的减少或抑制钝性心肌挫伤家兔心肌细胞的凋亡,对钝性心肌挫伤具有一定的保护作用,其抑制凋亡可能是通过上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax蛋白表达来实现的。

关键词：参芪扶正注射液心肌挫伤细胞凋亡 Bcl-2蛋白 Bax蛋白 cTnI

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小鼠急性脑损伤后微量脑脊液谷氨酸浓度的测定

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第三军医大学学报 2006年第12期28卷 1290-1291页

作者：李玮安建宏朱佩芳熊仁平周元国第三军医大学大坪医院野战外科研究所第七室研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四室研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的建立急性脑损伤后微量脑脊液谷氨酸浓度测定方法。方法采用邻苯二甲醛柱前衍生，梯度高效液相色谱荧光检测法测定急性脑损伤小鼠脑脊液中谷氨酸（glutamate，GLu）含量。结果谷氨酸的平均加样回收率为84．26％～125．6％（n=3）... 详细信息

目的建立急性脑损伤后微量脑脊液谷氨酸浓度测定方法。方法采用邻苯二甲醛柱前衍生，梯度高效液相色谱荧光检测法测定急性脑损伤小鼠脑脊液中谷氨酸（glutamate，GLu）含量。结果谷氨酸的平均加样回收率为84．26％～125．6％（n=3），日内相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）均小于4．94％（n=3），日间相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）均小于0．78％（n=3）。急性脑损伤后6h小鼠脑脊液谷氨酸含量相对于假手术组有明显升高（P〈0．01）。结论本方法准确、快速，可用于微量脑脊液谷氨酸含量的测定。

关键词：急性脑损伤微量脑脊液谷氨酸

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创伤后并发症及死亡结局的预测研究进展

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中华创伤杂志 2006年第4期22卷 310-312页

作者：梁华平王正国第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第一研究室重庆400042 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第四研究室重庆400042

尽管严重创伤后常见并发症的早期诊断和早期治疗已取得进展,但创伤后并发症如感染/脓毒症、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、多器官功能障碍综合征(MODS)等的发生率及其引发的病死率仍居高不下.其主要原因为上述并发症的发作凶险、发展极快,... 详细信息

尽管严重创伤后常见并发症的早期诊断和早期治疗已取得进展,但创伤后并发症如感染/脓毒症、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、多器官功能障碍综合征(MODS)等的发生率及其引发的病死率仍居高不下.其主要原因为上述并发症的发作凶险、发展极快,一经明确诊断,即使采用目前最先进的治疗手段与治疗措施也难以遏制其发展进程.如能早期预测创伤后并发症及死亡结局,并对高危创伤患者实施早期干预措施,则可有效降低创伤后并发症的发生率及病死率.由于颅脑损伤后其预后判定有其特殊性,笔者着重对非颅脑损伤后并发症及死亡结局的预测研究进展进行综述。

关键词：后并发症早期预测创伤后急性呼吸窘迫综合征(ARDS) 多器官功能障碍综合征早期干预措施早期诊断常见并发症颅脑损伤后非颅脑损伤

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谷氨酸对腺苷A2A受体调节一氧化氮合酶活力的影响

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中华创伤杂志 2006年第6期22卷 459-461页

作者：李玮安建宏朱佩芳熊仁平周元国重庆第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第七研究室400042 重庆第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第四研究室400042

目的探讨谷氨酸是否能够影响腺苷A2A受体对一氧化氮合酶(NOS)活力的调节。方法用1000 ng/ml脂多糖(LPS)刺激小胶质细胞,分别加入100 nmol/L A2A受体激动剂CGS21680以及不同浓度的谷氨酸(0．1,0．25,0．5 mmol/L)干预,观察NOS活力变化。... 详细信息

目的探讨谷氨酸是否能够影响腺苷A2A受体对一氧化氮合酶(NOS)活力的调节。方法用1000 ng/ml脂多糖(LPS)刺激小胶质细胞,分别加入100 nmol/L A2A受体激动剂CGS21680以及不同浓度的谷氨酸(0．1,0．25,0．5 mmol/L)干预,观察NOS活力变化。结果LPS诱导NOS活力增高,激活A2A受体可以产生抑制作用；0．25及0．5 mmol/L谷氨酸和A2A受体激动剂同时存在时,NOS活力进一步增高。结论高浓度谷氨酸可逆转腺苷A2A受体激动剂抑制升高NOS活力的作用。

关键词：一氧化氮合酶谷氨酸腺苷A2A受体

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TLR4基因3'未翻译区内11 367位点突变对荧光素酶表达的影响

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第三军医大学学报 2006年第21期28卷 2115-2118页

作者：段朝霞朱佩芳王正国蒋建新第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的分别构建含TLR4基因3'未翻译区及11 367位点突变的含荧光素酶基因的表达质粒,应用双荧光报告系统观察TLR4基因3'未翻译区对荧光素酶基因表达的影响.方法采用基因工程的方法构建含TLR4基因3'未翻译区及11 367位点突变... 详细信息

目的分别构建含TLR4基因3'未翻译区及11 367位点突变的含荧光素酶基因的表达质粒,应用双荧光报告系统观察TLR4基因3'未翻译区对荧光素酶基因表达的影响.方法采用基因工程的方法构建含TLR4基因3'未翻译区及11 367位点突变的含荧光素酶基因的表达载体,用LipofectAMINE TM2000转染HEK293细胞,化学发光法检测荧光素酶活性.结果经酶切及测序鉴定显示,TLR4基因3'未翻译区及11 367位点突变的片段正确插入荧光素酶表达载体pGL3-promoter中,应用双荧光报告系统检测显示pGL3-11 367G质粒转染后荧光素酶活性显著高于pGL3-11 367C.结论 TLR4基因3'未翻译区单核苷酸多态性能抑制荧光素酶基因的表达.

关键词： TLR4 单核苷酸多态性荧光素酶定点突变

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摩托车事故伤的伤情特点与影响因素(英文)

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中国临床康复 2006年第40期10卷 187-190页

作者：陈海斌解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市400042

目的:探讨摩托车事故伤的伤情特点与影响因素。资料来源:检索Medline1980-01/2005-12和EMCC1995-01/2005-12期间与摩托车事故伤相关的文献,检索词为“motorcycle,crash,injury,trafficaccident”,并限定语言种类为英语,另一些文章和资料通过手工检索中文杂志和专著。资料选择:根据可靠性、先进性和时效性的原则,对资料进行初审,选取该领域的研究原著,查找全文。排除重复性研究及综述类文章。资料提炼:关于摩托车事故伤的伤情特点、发生机制和防护方法方面的文献,一共收集到87篇,排除了36篇,最终纳入51篇。资料综合:①摩托车事故中影响死亡率的最重要伤型是头部伤,佩戴头盔有助于减小伤亡率;胸部伤、腹部伤、以及骨盆环骨折伴长骨损伤是造成伤亡的第二大影响因素。②驾驶或搭乘摩托车而受伤者主要是年轻人、初学而无经验的驾驶员和男性驾驶员。引擎容量较大的摩托车、与重型车辆的碰撞、两车相向对撞等更容易引起致命的后果。酒后驾车和超速行驶是引起摩托车事故的常见因素。结论:摩托车交通事故已成为当今世界日益严重的公共健康问题。深入了解摩托车伤的伤情特点和影响因素,可以改进病人的早期诊断和处理、减少治疗并发症的发生率。更先进、更有力的防护努力是急需的。需要实行更严格的头盔法规,有效增加头盔与主动防护设备的兼容性。需要实行更严格的强制措施,防止酒后驾车造成的交通事故。

关键词：摩托车创伤和损伤事故,交通

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培养细胞牵张损伤装置及测试系统的研制与应用

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第三军医大学学报 2006年第13期28卷 1363-1366页

作者：尹志勇王正国蒋建新杨志焕周萍王克万麻晓林第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室车辆/生物碰撞安全重庆市重点实验室重庆400042

目的为从细胞水平直接观察应力、应变作用后细胞形态和功能的改变,研制计算机控制的培养细胞牵张损伤装置和相应的测试系统。方法应用空气动力学原理,采用微型空气压缩机、电磁阀、压力传感器、程控放大器和模数转换多功能卡研制了体外... 详细信息

目的为从细胞水平直接观察应力、应变作用后细胞形态和功能的改变,研制计算机控制的培养细胞牵张损伤装置和相应的测试系统。方法应用空气动力学原理,采用微型空气压缩机、电磁阀、压力传感器、程控放大器和模数转换多功能卡研制了体外培养细胞牵张损伤装置,用于实验研究。其致伤参数由计算机精确控制,并采用压力法获取细胞在致伤过程中的应变规律。对培养的新生大鼠大脑皮层星型胶质细胞应用本致伤装置采用不同的条件致伤,检测乳酸脱清酶(LDH)活性和台盼蓝含量,并观察其形态学的改变。结果采用不同的致伤参数可复制出轻、中、重度的细胞损伤模型。结论培养细胞牵张损伤装置及测试系统的各项性能指标均达到设计要求,致伤过程简便、重复性好、结果稳定。新的乳胶膜变形规律检测方法和装置,明显优于国外文献报道的图像处理检测法,满足实验研究的需要。

关键词：培养细胞牵张损伤模型

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内毒素血症大鼠交感-迷走神经平衡的改变

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中华创伤杂志 2006年第10期22卷 771-774页

作者：黄健杨志焕张年春陈力勇周健第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所ICU 重庆市400042 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第四研究室重庆市400042 第三军医大学附属新桥医院骨科第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所麻醉科重庆市400042

目的观察内毒素血症时交感-迷走神经张力平衡的改变以及迷走神经刺激对二者间平衡的影响。方法24只SD大鼠按随机数字法分为内毒素组(LPS组)、内毒素+迷走神经刺激组(LPS+VNS组)、等渗盐水+迷走神经刺激组(NS+VNS组)和对照组(CON组,只注... 详细信息

目的观察内毒素血症时交感-迷走神经张力平衡的改变以及迷走神经刺激对二者间平衡的影响。方法24只SD大鼠按随机数字法分为内毒素组(LPS组)、内毒素+迷走神经刺激组(LPS+VNS组)、等渗盐水+迷走神经刺激组(NS+VNS组)和对照组(CON组,只注射等量的等渗盐水)。各组分别于注射LPS或等渗盐水后0min、2h、4h、6h进行心率变异性(HRV)分析,观察极低频功率(VLF)、标准化低频功率(LFnm)、标准化高频功率(HFnm)、低频与高频功率比值(LF/HF),并检测各组肝组织中去甲肾上腺素(NE)和乙酰胆碱(ACh)的水平。结果注射LPS后HFnm、LFnm、LF/HF、VLF以及肝组织ACh水平均升高,肝组织NE水平下降,与NS+ VNS组和CON组比较,差异有统计学意义(P＜0．05)；VNS后,HFnm升高,LF、VLF和LF/HF降低,肝组织ACh水平升高。与NS+VNS组和CON组比较,差异有统计学意义(P＜0．05)。结论内毒素血症时交感-迷走神经张力平衡失衡,交感神经张力高于迷走神经；VNS是调节交感-迷走神经张力平衡的有效措施之一,可提高迷走神经兴奋性,降低交感神经兴奋性,有利于迷走神经发挥其抗炎作用。

关键词：内毒素血症迷走神经电刺激心率变异性交感-迷走神经平衡

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