检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学遗传学杂志 2014年第5期31卷 612-614页

作者：李晓刚苏楠李灿杨京杜晓兰陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室、骨代谢与修复中心、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的检测1例Ⅱ型常染色体显性骨硬化症患者氯离子通道7（chloride channel7，CLCN7）基因的突变情况，探讨其分子发病机制。方法收集1例骨硬化症患者及100名健康成年人的血液标本，提取基因组DNA，PCR扩增CLCN7基因外显子并对所有外显... 详细信息

目的检测1例Ⅱ型常染色体显性骨硬化症患者氯离子通道7（chloride channel7，CLCN7）基因的突变情况，探讨其分子发病机制。方法收集1例骨硬化症患者及100名健康成年人的血液标本，提取基因组DNA，PCR扩增CLCN7基因外显子并对所有外显子及其旁侧内含子序列进行DNA测序分析。结果患者CLCN7基因第25外显子存在c．2460delA缺失突变，导致CLCN7基因784位及其后所有密码子移码突变（Arg784GlyfsX29）。该突变为一新突变，正常人均未检测到该突变。结论CLCN7基因Arg784GlyfsX29移码突变是导致该骨硬化症患者发病的原因。

关键词： Ⅱ型常染色体显性遗传性骨硬化症氯离子通道7基因基因突变

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细胞谱系示踪技术

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生理科学进展 2014年第5期45卷 379-384页

作者：李晓刚苏楠杜晓兰陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室骨代谢与修复中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学大坪医院康复理疗科重庆400042

细胞谱系示踪(cell lineage tracing)是指利用各种方式标记细胞,并对包括其后代所有细胞的增殖、分化以及迁移等活动进行追踪观察。自20世纪以来,谱系示踪技术为研究器官发育、组织损伤修复以及单细胞的分化命运提供了重要的手段。近些... 详细信息

细胞谱系示踪(cell lineage tracing)是指利用各种方式标记细胞,并对包括其后代所有细胞的增殖、分化以及迁移等活动进行追踪观察。自20世纪以来,谱系示踪技术为研究器官发育、组织损伤修复以及单细胞的分化命运提供了重要的手段。近些年,随着基因工程技术的飞速发展,细胞谱系示踪技术也有所突破,尤其是诱导性重组酶Cre/loxp系统的应用,极大地拓宽了细胞谱系示踪技术的应用范围。本文将结合细胞谱系示踪技术在多种研究中的应用,对该技术的原理、特点以及最新进展做一综述。

关键词：谱系示踪基因打靶活体示踪

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成纤维细胞生长因子抑制长链非编码RNA Malat1的表达及对软骨细胞增殖的影响

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第三军医大学学报 2017年第10期39卷 946-953页

作者：郭静远王权温轩谭乔燕谢杨丽苏楠陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室骨代谢与修复中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨在软骨细胞模型中成纤维细胞生长因子通路对长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)Malat1的调控作用。方法采用Ⅰ型成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor 1,Fgfr1)组织特异性敲除小鼠和Ⅲ型成纤维细... 详细信息

目的探讨在软骨细胞模型中成纤维细胞生长因子通路对长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)Malat1的调控作用。方法采用Ⅰ型成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor 1,Fgfr1)组织特异性敲除小鼠和Ⅲ型成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor 3,Fgfr3)敲除小鼠的原代软骨,以及利用软骨细胞系培养充当软骨细胞模型,成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)及下游细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路阻断剂U0126处理细胞,利用荧光定量PCR检测Malat1的表达变化。在ATDC5细胞模型中通过siRNA转染干扰Malat1或Fgfr1,质粒转染过表达Fgfr1,利用荧光定量PCR检测Malat1的表达,细胞计数检测细胞增殖变化。结果 Malat1被干扰24、36、48、60 h后,ATDC5细胞增殖速度显著减慢(P<0.05),FGF2处理ATDC5细胞24 h后Malat1表达显著下降(P<0.05),且ERK通路抑制剂U0126处理细胞后FGF2对Malat1的抑制作用消失。Fgfr1条件性敲除或si-Fgfr1干扰后Malat1表达显著升高(P<0.05),且FGF2对Malat1的抑制作用消失,Fgfr1在ATDC5细胞中过表达后Malat1表达与对照组相比显著降低(P<0.05)。结论软骨细胞中FGF2可能通过Fgfr1激活下游ERK通路,抑制了Malat1的表达,从而影响软骨细胞增殖。

关键词：长链非编码RNA Malat1 成纤维细胞生长因子软骨细胞增殖

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构建FGFR3基因沉默慢病毒载体及其对ATDC5细胞增殖和分化的影响

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第三军医大学学报 2013年第11期35卷 1043-1047页

作者：朱莹戚华兵王权王晓凤黄启钊陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室骨代谢修复中心重庆400042

目的通过构建慢病毒介导的FGFR3RNAi,观察FGFR3对小鼠前软骨细胞系ATDC5增殖和分化的影响。方法针对FGFR3基因的有效靶序构建FGFR3RNAi慢病毒载体,并转染293T细胞进行病毒包装。用包装成功的慢病毒转染ATDC5细胞,Real-time PCR和Western... 详细信息

目的通过构建慢病毒介导的FGFR3RNAi,观察FGFR3对小鼠前软骨细胞系ATDC5增殖和分化的影响。方法针对FGFR3基因的有效靶序构建FGFR3RNAi慢病毒载体,并转染293T细胞进行病毒包装。用包装成功的慢病毒转染ATDC5细胞,Real-time PCR和Western blot检测ATDC5中FGFR3RNAi效率,细胞计数及MTT检测ATDC5的增殖变化,Real-time PCR检测ATDC5中软骨分化相关分子Ⅱ型胶原(collagenⅡ,ColⅡ)、Ⅹ型胶原(collagenⅩ,ColⅩ)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达与变化。结果FGFR3RNAi慢病毒载体构建成功,并包装出相应的慢病毒,滴度为5×108TU/mL。FGFR3RNAi慢病毒转染ATDC5后FGFR3mRNA水平分别较空白组和阴性对照(NC)组下降了65.2%和68.8%(P<0.01)。Western blot结果显示,与空白组和NC组相比,FGFR3RNAi组FGFR3蛋白水平显著降低(P<0.01)。细胞计数及MTT检测结果显示,FGFR3RNAi组细胞增殖能力较空白组和NC组增强(P<0.05,P<0.01)。Real-time PCR结果显示,经向软骨诱导分化后,FGFR3RNAi组细胞中ColⅡ、ColⅩ和MMP-13的表达水平较空白组和NC组显著增加(P<0.01)。结论成功包装的FGFR3RNAi慢病毒能有效降低ATDC5细胞中FGFR3基因的表达。FGFR3表达水平降低后对ATDC5细胞增殖和分化的抑制作用明显减弱。

关键词： FGFR3 RNAi 慢病毒 ATDC5 增殖分化

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手术诱导的小鼠骨关节炎模型中关节软骨MMP-13表达上调

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 919-922页

作者：唐浚洲苏楠周思儒李晓刚谢杨丽陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室骨代谢修复中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察小鼠骨关节炎模型中关节软骨组织中基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)表达水平的变化,探讨其与关节损伤之间的关系。方法在小鼠原代软骨细胞培养中用IL-1β诱导炎症细胞外环境,采用RT-PCR检测MMP-13的表达... 详细信息

目的观察小鼠骨关节炎模型中关节软骨组织中基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)表达水平的变化,探讨其与关节损伤之间的关系。方法在小鼠原代软骨细胞培养中用IL-1β诱导炎症细胞外环境,采用RT-PCR检测MMP-13的表达水平。手术诱导不稳定的内侧半月板(destabilization of the medial meniscus,DMM)建立小鼠骨关节炎模型,观察术后5周和10周小鼠关节软骨组织变化情况,并用免疫组化检测MMP-13在受损的关节软骨中的表达。结果用IL-1β处理的原代软骨细胞中MMP-13的mRNA表达明显较高(P<0.01)。DMM术后小鼠关节软骨出现骨关节炎表现,且术后10周小鼠关节损伤程度较术后5周小鼠严重。免疫组化结果显示术后5周小鼠软骨组织中MMP-13的表达高于对照组;术后10周软骨组织中MMP-13进一步增高。结论在小鼠骨关节炎模型发病过程中,MMP-13作为一个具有软骨破坏性的标志分子在关节软骨中持续高表达,在骨关节炎发生过程中起重要作用。

关键词：骨关节炎关节软骨基质金属蛋白酶13 小鼠

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小鼠胫骨稳定性骨折模型制作及评价

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第三军医大学学报 2013年第5期35卷 404-407页

作者：温轩谢杨丽苏楠陈思宇罗凤涛陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室骨代谢修复中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的建立稳定的小鼠稳定性胫骨骨折模型。方法通过骨髓穿钢针的方法,建立了小鼠稳定性胫骨骨折模型,取建模后7、14、21 d 3个时间点小鼠,其中每个时间点6只,分别通过X线片、Micro CT以及病理切片来分析骨折愈合中骨痂大小变化及骨痂中... 详细信息

目的建立稳定的小鼠稳定性胫骨骨折模型。方法通过骨髓穿钢针的方法,建立了小鼠稳定性胫骨骨折模型,取建模后7、14、21 d 3个时间点小鼠,其中每个时间点6只,分别通过X线片、Micro CT以及病理切片来分析骨折愈合中骨痂大小变化及骨痂中细胞类型以评估骨折愈合过程。结果本实验建立的小鼠胫骨稳定性骨折模型愈合,骨折后7 d骨折断端存在极少量软骨痂,基本由未分化间充质细胞构成;第14天软骨痂开始钙化,骨痂中存在大量肥大软骨细胞;第21天骨折已基本愈合,新生骨形成,含有大量成骨细胞及骨细胞。结论通过本方法所制作的骨折模型愈合过程良好,与临床的骨折愈合过程类似,能更客观地观察骨折愈合过程。

关键词：胫骨骨折稳定性小鼠骨折愈合

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FGF2对破骨细胞体外分化以及骨吸收功能的直接调控作用

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第三军医大学学报 2014年第7期36卷 636-639页

作者：李晓刚苏楠唐玉彬温轩唐浚洲陈思宇李灿杜晓兰陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室骨代谢与修复中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的研究成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)对于破骨细胞(osteoclast,OC)体外分化与功能的直接调控作用。方法分离野生型C3H/HeJ小鼠骨髓单核细胞,利用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB lig... 详细信息

目的研究成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)对于破骨细胞(osteoclast,OC)体外分化与功能的直接调控作用。方法分离野生型C3H/HeJ小鼠骨髓单核细胞,利用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)以及巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导向破骨细胞分化,同时在实验组中加入FGF2,观察骨髓单核细胞向破骨细胞分化发育过程,鬼笔环肽(phalloidine)染色观察破骨细胞肌动蛋白环(actin ring)变化,Real-time PCR检测破骨细胞Trap、Mmp9、Ctsk以及Clcn7表达,破骨细胞与骨片共培养检测骨吸收功能变化,并用Western blot检测相关信号通路分子表达情况。结果①TRAP染色显示实验组与对照组破骨细胞数量无明显差异(P>0.05);②鬼笔环肽染色提示实验组与对照组肌动蛋白环均正常;③实验组Trap、Mmp9及Ctsk mRNA表达量均高于对照组(P<0.05),而Clcn7 mRNA表达2组无明显差异;④体外骨片吸收实验提示实验组骨吸收陷窝面积显著大于对照组(P<0.05);⑤Western blot检测实验组磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)较对照组表达明显增多。结论 FGF2不影响破骨细胞前体细胞向破骨细胞的分化以及肌动蛋白环的形成,但可以通过ERK信号通路正向调控成熟破骨细胞的骨吸收功能。

关键词：破骨细胞成纤维细胞生长因子2 细胞外信号调节激酶

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阻断TGF-β/TGF-βRⅠ通路对ATDC5细胞增殖、分化及细胞外基质的影响

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第三军医大学学报 2013年第10期35卷 917-921页

作者：王权戚华兵王晓凤朱莹陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室骨代谢与修复中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的研究转化生长因子βⅠ型受体(transforming growth factor beta typeⅠreceptor,TGF-βRⅠ)阻断剂SB-505124对软骨细胞增殖、分化及细胞外基质的影响与机制。方法利用Western blot检测不同浓度的SB-505124处理后,前软骨细胞系ATDC5... 详细信息

目的研究转化生长因子βⅠ型受体(transforming growth factor beta typeⅠreceptor,TGF-βRⅠ)阻断剂SB-505124对软骨细胞增殖、分化及细胞外基质的影响与机制。方法利用Western blot检测不同浓度的SB-505124处理后,前软骨细胞系ATDC5中p-Smad2/3的变化。MTT法检测SB-505124处理对ATDC5细胞生长、增殖的影响及时间、浓度依赖性效应。Western blot检测c-Myc蛋白水平的变化。Real-time PCR检测SB-505124处理后软骨分化、细胞外基质合成及降解相关分子CollagenⅡ、Aggrecan及Adamts5表达与变化,并利用阿尔新蓝染色法检测SB-505124处理对ATDC5细胞中蛋白聚糖合成的影响。结果 Western blot检测结果示:SB-505124处理ATDC5细胞明显抑制TGF-β1激活的p-Smad2/3,并呈浓度依赖性;MTT检测结果示:SB-505124浓度和时间依赖性的抑制ATDC5细胞增殖;Real-time PCR检测结果示:SB-505124处理明显抑制ATDC5细胞中CollagenⅡ、Aggrecan的表达,同时上调了Adamts5的表达;阿尔新蓝染色结果提示SB-505124处理明显抑制ATDC5细胞中蛋白聚糖的合成。结论利用SB-505124阻断内源性TGF-β信号,可抑制软骨细胞增殖、分化及细胞外基质的合成,同时促进细胞外基质的降解。

关键词：转化生长因子βⅠ型受体 SB-505124 ATDC5 细胞增殖细胞外基质

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小鼠胫骨骨皮质损伤修复过程中成纤维生长因子受体的表达

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第三军医大学学报 2011年第10期33卷 1024-1027页

作者：周锐苏楠李灿陈思宇谢杨丽陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室骨代谢修复中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察小鼠胫骨骨皮质损伤修复过程中成纤维生长因子受体(fibroblast growth factor receptors,FGFRs)的表达变化。方法通过建立小鼠胫骨骨皮质损伤模型,在组织学水平观察皮质损伤后愈合情况,同时提取损伤后3、7、14、21 d 4个时相点... 详细信息

目的观察小鼠胫骨骨皮质损伤修复过程中成纤维生长因子受体(fibroblast growth factor receptors,FGFRs)的表达变化。方法通过建立小鼠胫骨骨皮质损伤模型,在组织学水平观察皮质损伤后愈合情况,同时提取损伤后3、7、14、21 d 4个时相点损伤部位新生骨痂组织RNA,采用定量PCR检测FGFRs及骨形成标记分子核结合因子al(Cbfa1)、骨钙素(OC)、骨桥蛋白(OP)等mRNA的动态表达谱。结果骨皮质损伤后第7天,小鼠骨髓腔有新生骨组织出现,到第21天,皮质骨缺损处出现新的板层骨结构。Cbfa1、OP的mRNA表达水平在骨皮质损伤后早期即迅速升高,OC则在修复阶段中后期表达升高。FGFR1、2在损伤后迅速升高,于第3天达到峰值(2.09±0.25,1.82±0.15,P<0.01),然后逐渐回落;FGFR3于损伤后7 d达到峰值(3.61±0.52,P<0.01).14 d稍有回落,在第21天时则又显著升高(P<0.01)。结论伴随着骨皮质损伤后成骨细胞分化标记基因的表达升高,FGFR1、2、3的mRNA表达水平在皮质损伤后早期即显著升高,并持续高表达到愈合晚期阶段。提示FGFRs参与调节骨皮质损伤后的骨再生过程。

关键词：成纤维生长因子受体骨皮质损伤骨再生

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大剂量1,25二羟维生素D_3对发育期小鼠骨稳态的影响

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第三军医大学学报 2014年第8期36卷 774-779页

作者：黄启钊戚华兵王晓凤朱莹王权王先行杜晓兰陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室骨代谢修复中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所康复科重庆400042

目的观察大剂量1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对小鼠发育期骨稳态的影响。方法怀孕13.5 d的C3h小鼠分成3组,每日分别经腹腔注射1%的乙醇溶液(对照组),0.5 ng/g的1,25(OH)2D3(低剂量组)和5 ng/g的1,25(OH)2D3(大剂量组),持续至孕鼠分娩... 详细信息

目的观察大剂量1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对小鼠发育期骨稳态的影响。方法怀孕13.5 d的C3h小鼠分成3组,每日分别经腹腔注射1%的乙醇溶液(对照组),0.5 ng/g的1,25(OH)2D3(低剂量组)和5 ng/g的1,25(OH)2D3(大剂量组),持续至孕鼠分娩。新生小鼠从第3天开始隔天注射相同剂量的1,25(OH)2D3,连续1个月。观察小鼠出生以及身长、体质量等生长变化情况;1月龄的小鼠分别行X线检查、Micro-CT扫描,胫骨组织石蜡包埋、切片后经HE、藏红固绿染色,行组织学、骨形态计量分析,观察不同分组发育期小鼠骨骼结构及骨代谢的变化情况。结果从E13.5 d开始注射不同剂量的1,25(OH)2D3对孕鼠怀孕过程和小鼠出生没有明显的影响,出生后第7天开始,大剂量组小鼠身长、体质量明显低于对照组(P<0.05),1月龄时,差异增大,大剂量组身长、体质量显著低于对照组和小剂量组(P<0.01);X线检测显示1月龄大剂量组小鼠发生病理性骨折(n=10),其余2组未发现;Micro-CT结果提示大剂量组小鼠骨量较对照组显著降低(P<0.01),低剂量组小鼠仅骨皮质厚度有所增加(P<0.05);胫骨组织切片形态计量分析显示大剂量组小鼠破骨细胞数量较其余2组显著增加(P<0.01),而低剂量组破骨细胞数量的增加差异无统计学意义;低剂量组成骨细胞数量较其余2组有明显增加(P<0.05)。结论大剂量1,25(OH)2D3显著降低C3h小鼠骨量,同时使骨皮质菲薄,骨骼质量变差,从而易骨折。这种作用主要是通过促进破骨细胞的形成实现的。

关键词：小鼠 1, 25二羟维生素D3 大剂量发育期骨稳态

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