检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2006年第24期28卷 2403-2405页

作者：李昆霖吴国明戢福云徐智黄桂君第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的构建小细胞肺癌多药耐药细胞(H446/CDDP)差异表达消减cDNA文库。方法①以H446/CDDPcDNA为实验方(Tester),小细胞肺癌细胞H446cDNA为对照方(Driver),应用抑制消减杂交(SSH)技术结合T/A克隆技术构建小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达消... 详细信息

目的构建小细胞肺癌多药耐药细胞(H446/CDDP)差异表达消减cDNA文库。方法①以H446/CDDPcDNA为实验方(Tester),小细胞肺癌细胞H446cDNA为对照方(Driver),应用抑制消减杂交(SSH)技术结合T/A克隆技术构建小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达消减cDNA文库。②通过斑点杂交筛选、测序及同源性分析获取H446/CDDP细胞差异表达cDNA片段。结果成功构建了小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP差异表达消减cDNA文库,获得21个H446/CDDP细胞差异表达cDNA片段,经测序及同源性分析表明它们分别代表6个已知基因(同源性为96%～100%)。结论SSH技术是筛选新的功能基因的有效方法;获取的6个差异表达基因可能参与了小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP的耐药形成,进一步的功能研究有利于了解它们在小细胞肺癌多药耐药机制中所发挥的作用。

关键词：小细胞肺癌多药耐药抑制消减杂交技术

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缺氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞Akt mRNA表达的变化

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第三军医大学学报 2006年第3期28卷 192-194页

作者：易斌钱桂生白莉王关嵩第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的通过观察缺氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞(pu lmonary arterial smooth musc le cell,PASMC)3种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt1、Akt2、Akt3)mRNA的表达水平变化,初步探讨Akt信号途径在缺氧肺动脉高压(hypoxia pu lmonaryhypertension,HPH)血管重建中的作用。方法组织贴片法建立纯PASMC细胞系。采用半定量RT-PCR技术检测常氧组(N组)、低氧2、8、12、24组的Akt1、Akt2和Akt3基因mRNA的表达水平。结果建立了纯PASMC细胞系。各组均检测出Akt1、Akt2和Akt3基因的mRNA,图像定量分析光值显示各组表达的mRNA含量与缺氧时限存在一定的关系。结论Akt信号通路可能是大鼠缺氧肺动脉高压中PASMC增殖和分化的重要传导途径,其中Akt1可能起主要作用。

关键词：平滑肌细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶缺氧肺动脉高压

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慢性乙型肝炎患者外周血T细胞KIR表达研究

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中国免疫学杂志 2006年第3期22卷 257-259页

作者：王沂芹柏健鹰傅晓岚王惠明赵婷婷徐文越吴玉章中国人民解放军第三军医大学基础部全军免疫研究所重庆400038 中国人民解放军第三军医大学新桥医院消化科重庆400037 中国人民解放军第三军医大学中心实验室重庆400038

目的:检测慢性乙型肝炎患者外周血T细胞表面KIR的表达情况。方法:采用三色流式细胞术检测慢性乙型肝炎患者外周血CD4+T细胞和CD8highT细胞表面KIR分子表达,并与正常外周血比较。结果:慢性乙型肝炎患者外周血中CD8highT细胞KIR表达明显... 详细信息

目的:检测慢性乙型肝炎患者外周血T细胞表面KIR的表达情况。方法:采用三色流式细胞术检测慢性乙型肝炎患者外周血CD4+T细胞和CD8highT细胞表面KIR分子表达,并与正常外周血比较。结果:慢性乙型肝炎患者外周血中CD8highT细胞KIR表达明显高于对照组CD8highT细胞。正常外周血CD4+T细胞几乎不表达KIR,慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+T细胞表达KIR。结论:慢性乙型肝炎患者T细胞表面KIR表达明显增加。

关键词：慢性乙型肝炎 T淋巴细胞杀伤细胞抑制性受体

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针对CTGF的shRNA抑制TGFβ1诱导人肾小管上皮细胞合成胶原

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中国现代医学杂志 2006年第7期16卷 981-984页

作者：卓文磊王彦张璟第三军医大学新桥医院肾内科(全军肾脏病中心重庆市肾病研究所) 重庆400037 第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所(全军呼吸病研究重点实验室) 重庆400037

目的研究针对结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞株(humanrenaltubularepithelialcell,HKC)合成胶原的抑制作用。方法设计和构建带有U6启动子的能产生针对CTGF的shRNA的RNA干扰表达质粒,转染至受TGFβ1刺激的HKC,以RT-PCR和Westernblot检测HKC转染前后CTGF表达,以3H脯氨酸掺入法检测总胶原合成量。结果和仅受TGFβ1刺激组相比,转染了RNA干扰表达质粒的受TGFβ1刺激的HKCCTGFmRNA和蛋白表达明显减弱,总胶原合成量下降(P<0.01)。结论针对CTGF的短发夹RNA能明显抑制TGFβ1诱导HKC合成胶原。

关键词： RNA干扰结缔组织生长因子胶原人肾小管上皮细胞

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ALA-PDT结合TGF-β1基因转染对结肠癌细胞抑制作用的研究

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激光杂志 2006年第6期27卷 89-90页

作者：陈祖林刘嘉廖海洋潘英俊葛海燕肖卫东第三军医大学新桥医院普外科重庆400037 重庆大学光电技术及系统教育部重点实验室重庆400044

目的:探讨ALA-PDT结合hTGF-β1基因转染对结肠癌细胞体外增殖的抑制作用。方法:以腺病毒为载体将hTGF-β1基因导入人结肠癌细胞株8W480后,行PDT处理,应用免疫组化法检测TGF-β1的表达情况。通过MTT法检测转染后细胞增殖的抑制情况,应用... 详细信息

目的:探讨ALA-PDT结合hTGF-β1基因转染对结肠癌细胞体外增殖的抑制作用。方法:以腺病毒为载体将hTGF-β1基因导入人结肠癌细胞株8W480后,行PDT处理,应用免疫组化法检测TGF-β1的表达情况。通过MTT法检测转染后细胞增殖的抑制情况,应用流式细胞技术检测细胞周期的变化。结果:转染hTGF-β1基因后,TGF-β1蛋白表达明显增强。与单纯行PDT相比,G0/S周期阻滞作用更为明显。对SW480的增殖抑制效果明显提高(p<0.05)。结论:转染hTGF-β1基因可明显增强ALA-PDT对体外培养的结肠癌细胞SW480的增殖抑制作用。

关键词：光动力疗法转化生长因子β1 结肠癌增殖抑制周期阻滞

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钙信号在ALA-PDT诱导SW480细胞凋亡及细胞自身保护机制中的作用

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癌症 2006年第6期25卷 683-688页

作者：郑江华时德赵渝陈祖林重庆医科大学附属第一医院血管外科/重庆市普外科学重点实验室重庆400037 第三军医大学附属新桥医院普外科重庆400016

背景与目的:肿瘤的光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)是基于光敏剂选择性积聚在肿瘤组织中,肿瘤细胞接受可见光照后凋亡或坏死的一种治疗方法。细胞内游离钙作为重要的第二信使参与多种细胞功能的调节,但钙信号在PDT中的作用却不甚... 详细信息

背景与目的:肿瘤的光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)是基于光敏剂选择性积聚在肿瘤组织中,肿瘤细胞接受可见光照后凋亡或坏死的一种治疗方法。细胞内游离钙作为重要的第二信使参与多种细胞功能的调节,但钙信号在PDT中的作用却不甚清楚。本研究的目的是探讨钙信号在!氨基酮戊酸-光动力学疗法(ALA-PDT)诱导SW480细胞凋亡及细胞自身保护机制中的作用。方法:将SW480细胞分为4组:空白对照组、激光照射组、ALA组和ALA-PDT组。用TUNEL法检测细胞凋亡;用激光共聚焦显微镜观测各组细胞内游离钙离子浓度的变化;放射免疫法测定各组细胞内cAMP及cGMP含量;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组细胞中钙调素的基因表达;Western蛋白印迹检测各组细胞MEK和ERK1/2蛋白产物及磷酸化蛋白产物的表达。结果:TUNEL法显示ALA-PDT组的人结肠癌细胞在PDT后30min凋亡指数(apoptosisindex,AI)为(25.26±5.04)%,60minAI为(50.45±7.85)%;激光共聚焦结果为ALA-PDT组细胞内游离钙离子浓度在10min时荧光强度为100.00±19.83,而20min时达185.40±18.90(P<0.01),而空白对照组、单独激光照射组、ALA组细胞内钙离子浓度无明显变化;在监测时间内,cAMP含量在30min时为(3.215±0.245)pmol/L,显著高于其它各组及各组内不同时相的cAMP含量(P<0.001);空白对照组、激光照射组、ALA组以及ALA-PDT后30min、60min、90min组的CaM3的相对表达量分别为3.97±0.29、4.28±0.39、4.51±0.44、12.60±1.84、11.39±1.13和12.77±1.35,ALA-PDT后30～90min组的CaM3表达显著高于空白对照组、激光照射组和ALA组(P<0.001);ALA-PDT后SW480细胞的ERK通路激活。结论:钙信号对ALA-PDT诱导SW480细胞凋亡起着重要作用,同时也诱导了细胞自身的保护机制——ERK通路激活。

关键词：肿瘤 ALA PDT SW480细胞钙信号凋亡

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光敏化BPD-MA后膀胱癌细胞凋亡的研究

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激光技术 2006年第1期30卷 78-81页

作者：许川山吴士明虞乐华王志刚周媛杨青重庆医科大学超声影像学研究所重庆400010 第三军医大学新桥医院重庆400037 重庆医科大学附属第二医院康复中心激光研究室重庆400010 第三军医大学西南医院整形外科中心重庆400038

为了研究光动力抑癌作用机制,采用流式细胞仪和TUNEL法检测激光光敏化BPD-MA后人膀胱癌细胞株B IU-87细胞凋亡的发生状况。激光光敏化BPD-MA后人膀胱癌细胞株B IU-87组细胞凋亡发生率明显增高,许多细胞核呈棕黄色,高倍镜下可见细胞核内... 详细信息

为了研究光动力抑癌作用机制,采用流式细胞仪和TUNEL法检测激光光敏化BPD-MA后人膀胱癌细胞株B IU-87细胞凋亡的发生状况。激光光敏化BPD-MA后人膀胱癌细胞株B IU-87组细胞凋亡发生率明显增高,许多细胞核呈棕黄色,高倍镜下可见细胞核内有大量棕褐色颗粒,与阳性对照中凋亡细胞核的特征相符合,而对照组此种细胞少见。TUNEL阴性对照中细胞核均呈蓝色。结果表明,激光激活BPD-MA光动力作用明显诱导人膀胱癌细胞株B IU-87细胞发生凋亡,这可能是其抑癌作用机制之一。

关键词：医用光学与生物技术 BPD-MA 光动力作用膀胱癌细胞细胞凋亡

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基于超顺磁珠的微流控免疫分析系统的设计

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中国医疗器械杂志 2006年第5期30卷 369-371页

作者：黄辉郑小林潘静赵志强蒲晓允重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400044 第三军医大学临床检验学教研室重庆400038 第三军医大学新桥医院检验科重庆400037

介绍采用激光直接加工法制备微流控芯片,建立基于超顺磁珠的化学发光微流控免疫分析系统,用于甲胎蛋白的测定。芯片系统可以在20min内完成AFP的分析,所需要的标本量和试剂量为5μl,线性范围在1～800ng/ml。

关键词：超顺磁珠化学发光微流控芯片免疫分析

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大豆异黄酮的开发及市场前景

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中国药房 2006年第2期17卷 92-94页

作者：刘葵张恩娟重庆药剂学校药剂教研室重庆市400030 第三军医大学新桥医院药学部重庆市400037

目的:为我国医药企业及研究机构开发大豆异黄酮产品提供参考。方法:对大豆异黄酮的国内、外市场及开发现状进行较详细的分析。结果与结论:大豆异黄酮具有开发价值,市场前景广阔。

关键词：大豆异黄酮开发市场前景

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噬菌体PaP3推定基因tls核酸内切酶活性的初步验证

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解放军医学杂志 2006年第3期31卷 196-198页

作者：申晓冬胡福泉李明胡晓梅周莹冰张克斌第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 新桥医院医学实验技术中心

目的对BLAST推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的tls基因功能进行实验验证。方法采用PCR方法从噬菌体PaP3基因组扩增出tls基因,克隆至pMD18-T载体中,再经酶切纯化后将目的基因插入表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达目的蛋白,... 详细信息

目的对BLAST推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的tls基因功能进行实验验证。方法采用PCR方法从噬菌体PaP3基因组扩增出tls基因,克隆至pMD18-T载体中,再经酶切纯化后将目的基因插入表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌后收集包涵体,并用裂解缓冲液溶解包涵体蛋白。然后利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白,通过透析使H6-TLS复性。最后构建含有末端酶大亚基酶切位点的底物质粒pMD-cos,检测复性蛋白活性。结果通过上述方法,成功构建了pQE-tls表达载体,融合蛋白H6-TLS表达量占菌体总量的30%。同时成功构建了目的蛋白的底物质粒pMD-cos。经由亲和层析初步纯化及透析复性后,H6-TLS可检测出核酸内切酶的活性,能将底物质粒部分线性化。结论成功地获得了具有内切酶活性的H6-TLS融合蛋白,为tls基因的认证提供了实验证据,为进一步鉴定和利用该基因奠定了基础。

关键词：末端酶大亚单位细菌噬菌体PaP3 基因表达

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