检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2005年第10期27卷 951-953页

作者：张芳钱桂生陈维中苏踊跃第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的　利用载体介导的RNA干扰技术,建立糖皮质激素受体(GR)基因阻断的人U93 7巨噬细胞株模型。方法　构建两个针对GR的RNAi重组表达载体,分别命名为pSilencer 3 1 GR1和pSilencer 3 1 GR2 ,经测序确认后,转染人U93 7巨噬细胞株。RT PC... 详细信息

目的　利用载体介导的RNA干扰技术,建立糖皮质激素受体(GR)基因阻断的人U93 7巨噬细胞株模型。方法　构建两个针对GR的RNAi重组表达载体,分别命名为pSilencer 3 1 GR1和pSilencer 3 1 GR2 ,经测序确认后,转染人U93 7巨噬细胞株。RT PCR、Westernblot分别检测糖皮质激素受体mRNA水平和蛋白水平表达变化;相对荧光素酶活性法检测地塞米松作用后GR转录激活功能的变化。结果　经测序证实:成功构建两个针对GR的RNAi表达载体(pSilencer3 1 GR1和pSilencer 3 .1 GR2 ) ;转染pSilencer 3 .1 GR2 可明显降低细胞内GRmRNA的丰度及GR蛋白表达,细胞内GR转录激活功能明显降低;转染pSilencer 3 .1 GR1与对照组相比无显著变化。结论　成功地构建并筛选出一个高效且特异阻断GR表达及功能的RNAi质粒表达载体,为进一步研究糖皮质激素受体的功能提供新方法。

关键词：糖皮质激素受体人巨噬细胞株U937 RNA干扰

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Delta1-IRES-EGFP双顺反子逆转录病毒表达载体的构建及鉴定

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第三军医大学学报 2005年第12期27卷 1197-1200页

作者：何飞谭颖徽杨峥嵘第四军医大学秦都口腔医院西安710032 第三军医大学新桥医院口腔科重庆400037 第三军医大学预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的　构建并鉴定人Delta1和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子逆转录病毒表达载体。方法　利用基因重组技术将人Delta1基因构建到含IRES EGFP逆转录病毒载体中;电穿孔法将重组质粒pDelta1 IRES EGFP分别转入单、双嗜性包装细胞GP +... 详细信息

目的　构建并鉴定人Delta1和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子逆转录病毒表达载体。方法　利用基因重组技术将人Delta1基因构建到含IRES EGFP逆转录病毒载体中;电穿孔法将重组质粒pDelta1 IRES EGFP分别转入单、双嗜性包装细胞GP +E86和PA3 17,嘌呤霉素(puromycin)筛选获得阳性表达克隆;“乒乓球”法提高病毒滴度;重组病毒感染NIH3T3细胞,流式细胞仪(FACS)及RT PCR法分别检测细胞荧光和Delta1mRNA表达变化;C2C12共培养实验检测蛋白的功能。结果　酶切、PCR鉴定及DNA测序证实逆转录病毒表达载体pDelta1 IRES EGFP构建正确;经体外包装,获得最高滴度9 7×10 5CFU ml的重组病毒液;重组病毒液感染NIH3T3细胞,FACS检测部分细胞荧光强度显著提高;RT PCR证实细胞内有外源基因Delta1表达;C2C12共培养实验证实外源蛋白Delta1可抑制C2C12细胞的分化。结论　逆转录病毒基因转移系统安全,效率较高,可获得外源基因长期、稳定的表达。

关键词： Delta GFP IRES 逆转录病毒基因转移基因表达

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巨噬细胞炎性蛋白4的非融合表达载体的构建和表达

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第三军医大学学报 2005年第21期27卷 2111-2114页

作者：李树钧钱桂生戚好文黄桂君第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037 第四军医大学西京医院呼吸内科西安710032

目的探索如何抑制嗜酸性粒细胞的趋化作用,选择β-趋化因子巨噬细胞炎性蛋白4(MIP4)的突变体(Met-MIP4)作为趋化因子受体3的拮抗剂,将Met-MIP4基因在原核细胞中进行非融合表达。方法设计MIP4基因的PCR引物并进行氨基酸突变,将MIP4N末端... 详细信息

目的探索如何抑制嗜酸性粒细胞的趋化作用,选择β-趋化因子巨噬细胞炎性蛋白4(MIP4)的突变体(Met-MIP4)作为趋化因子受体3的拮抗剂,将Met-MIP4基因在原核细胞中进行非融合表达。方法设计MIP4基因的PCR引物并进行氨基酸突变,将MIP4N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸。以正常人肺cDNA文库为模板,PCR方法获取Met-MIP4基因。克隆入载体pUC19,测序验证序列已得到突变。将正确的基因插入到非融合表达载体pBV220中进行表达。结果PCR产物为220bp左右的片段,连接入pUC19质粒后测序验证获得正确突变。构建的pBV220非融合表达载体在大肠杆菌DH5-α中表达,经Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳显示有大小约8×103的非融合蛋白表达。结论成功突变并克隆了β-趋化因子MIP4基因。Tricine-SDS-PAGE表明,非融合的Met-MIP4突变体已得到表达,为进一步研究其对哮喘的生物治疗奠定了基础。

关键词：趋化因子基因克隆基因表达表达载体

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噬菌体随机肽库筛选MUC1抗原模拟表位

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第三军医大学学报 2005年第13期27卷 1332-1334页

作者：杨清浩王祥卫金燕张立新第三军医大学新桥医院泌尿外科重庆400037 北京军事医学科学院附属307医院肿瘤分子室北京100850

目的噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位。方法利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。结果经3轮筛选,获得... 详细信息

目的噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位。方法利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。结果经3轮筛选,获得了30个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP。鉴定结果表明:4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上。结论所得序列TAPDLRP、SAPDLRPAAPDSRP及LAPDFRP模拟MUC1抗原表位。

关键词： MCU1抗原模拟表位噬菌体随机7肽库抗体

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新型阳离子脂质体的制备及其转染效率的测定

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第三军医大学学报 2005年第2期27卷 139-142页

作者：雷撼钱桂生吴国明黄桂君第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究所重点实验室重庆400037

目的　制备以新型细胞转染素为阳性成分的阳离子脂质体 ,作为基因载体 ,用于基因转染的实验研究和肺部疾病的基因治疗。方法　用薄膜法制备N4 精胺胆固醇羰酰氨阳离子脂质体 ,通过电镜观察和电泳 ,检测其形态、结构和细胞转染条件 ,并对... 详细信息

目的　制备以新型细胞转染素为阳性成分的阳离子脂质体 ,作为基因载体 ,用于基因转染的实验研究和肺部疾病的基因治疗。方法　用薄膜法制备N4 精胺胆固醇羰酰氨阳离子脂质体 ,通过电镜观察和电泳 ,检测其形态、结构和细胞转染条件 ,并对SPC肿瘤细胞进行转染 ,评估其转染效率。结果　制备的新型阳离子脂质体具有良好的微囊形态 ,当脂质体∶质粒为 (6～ 8)∶1时 ,其转染效率可达 60 %。结论　成功制备了新型阳离子脂质体 ,在适当条件下其具有较高的转染活性 ,为以后的基因转染和基因治疗打下基础。

关键词： N^4-精氨胆固醇羰酰氨阳离子脂质体细胞转染素基因转染基因载体

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脊神经节损伤与脊髓背角C-fos原癌基因表达

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中国行为医学科学 2005年第10期14卷 882-884页

作者：周跃梅芳瑞刘正津廖维宏第三军医大学附属新桥医院骨科重庆400037 第三军医大学解剖教研室第三军医大学野战外科研究所

目的探讨脊神经节(DRG)不同损伤方式后,不同损伤时间的脊髓背角C-fos原癌基因蛋白表达情况,并探讨该蛋白表达程度与神经行为异常改变之间的关系。方法健康家兔42只随机分为手术对照组、机械性压迫组、炎性损伤组和正常对照组,制备相应... 详细信息

目的探讨脊神经节(DRG)不同损伤方式后,不同损伤时间的脊髓背角C-fos原癌基因蛋白表达情况,并探讨该蛋白表达程度与神经行为异常改变之间的关系。方法健康家兔42只随机分为手术对照组、机械性压迫组、炎性损伤组和正常对照组,制备相应的脊神经节损伤模型。术后检测动物神经行为改变,并对中枢神经伤害性刺激反应物C-fos原癌基因蛋白进行免疫组化检测分析。结果DRG损伤后1周,伤侧脊髓背角C-fos癌基因蛋白的阳性细胞数分别为手术对照组(47±17)、机械性压迫组(58±22)、炎性损伤组(55±20),均较正常对照组(28±18)显著增强(P<0.05);术后2,4,8周3个实验组结果也比对照组显著增强(P<0.05)。结论DRG损伤所导致动物脊髓背角伤害感受性神经元的过度兴奋,可能介导了神经细胞的兴奋性毒性损伤和伤肢的痛觉过敏。

关键词：脊神经节损伤 C-fos原癌基因蛋白痛觉过敏脊神经节损伤背角C-fos 脊髓背角原癌基因表达 C-fos原癌基因蛋白正常对照组神经行为改变机械性压迫伤害性刺激

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骨髓活检在诊断全血细胞减少症中的意义

骨髓活检在诊断全血细胞减少症中的意义

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第10届全国实验血液学会议

作者：刘红江渝陈幸华孔佩艳彭贤贵刘林张曦王庆余第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学基础部生化教研室第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学附属新桥医院血液科

目的探讨骨髓组织活检在全血细胞减少症中的临床作用。方法选常规骨髓穿刺部位, 用骨髓活检针取骨髓组织活检;分析21例全血细胞减少患者骨髓活检的结果。结果 21例全血细胞减少患者骨髓活检提示,多数骨髓增生程度活跃或明显活跃,少数增... 详细信息

目的探讨骨髓组织活检在全血细胞减少症中的临床作用。方法选常规骨髓穿刺部位, 用骨髓活检针取骨髓组织活检;分析21例全血细胞减少患者骨髓活检的结果。结果 21例全血细胞减少患者骨髓活检提示,多数骨髓增生程度活跃或明显活跃,少数增生低下;诊断以骨髓增生异常综合征(MDS)最多见,占71．4％(15/21),慢性再生障碍性贫血、急性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓纤维化各1例,诊断不明2例。结论骨髓活检能反映骨髓组织结构、细胞分布情况,在全血细胞

关键词：全血细胞减少症骨髓活检骨髓增生

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美罗华联合FMD方案治疗难治性B细胞淋巴瘤的疗效

美罗华联合FMD方案治疗难治性B细胞淋巴瘤的疗效

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第10届全国实验血液学会议

作者：刘红江渝孔佩艳陈幸华刘林张曦王庆余第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学基础部生化教研室第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学附属新桥医院血液科

目的研究美罗华(Rituximab)联合FMD方案治疗复发、难治的B细胞淋巴瘤的临床疗效和不良反应。方法治疗第1天用美罗华375mg／m2,第2天开始用FMD方案(氟达拉滨50mg第 1、2、3天、米西宁10mg/m2第2天、地塞米松20mg第1-5天),共用4个周期。结... 详细信息

目的研究美罗华(Rituximab)联合FMD方案治疗复发、难治的B细胞淋巴瘤的临床疗效和不良反应。方法治疗第1天用美罗华375mg／m2,第2天开始用FMD方案(氟达拉滨50mg第 1、2、3天、米西宁10mg/m2第2天、地塞米松20mg第1-5天),共用4个周期。结果 10例中完全缓解4例(40％),部分缓解5例(50％),有效率90％。3例(30％)发生Ⅲ-Ⅳ度中性粒细胞减少。结论美罗华联合FMD方案治疗复发、难治的B细胞淋巴瘤的临床疗效显著,没有增加不良反应。讨论美罗华是一种人鼠嵌合型单克隆抗体,它能与B淋巴细胞上CD20抗原特异性地结合,通

关键词：细胞淋巴瘤美罗华 FMD 难治性

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1例腹腔镜全结肠切除术的手术配合

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护理学杂志 2005年第4期20卷 73-74页

作者：唐棠周莉第三军医大学新桥医院手术室重庆400037

对1例结肠、直肠多发性息肉患者在全身麻醉下实施腹腔镜全结肠切除术。结果麻醉及手术过程顺利,手术历时约10h,术中失血量约500ml;术后患者恢复良好,8d出院。提示手术室护士娴熟的配合技术是手术顺利进行的有力保障。

关键词：腹腔镜结肠切除手术中护理

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流体剪切力调节内皮细胞组织因子表达的初步探讨

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医用生物力学 2005年第4期20卷 212-215,238页

作者：崔晓萍应大君李黔宁糜建红余资江孙建森刘乐斌第三军医大学解剖学教研室第三军医大学新桥医院神经内科重庆400037

目的探讨流体剪切力调节内皮细胞组织因子(tissue factor,TF)表达的机制。方法将脐静脉内皮细胞置于平行板流动腔中接受1．2 Pa(1 dyn／cm2=0．1 Pa)剪切力作用20 min后,采用凝胶电泳迁移率改变法(electorohoretic mobility shift analy... 详细信息

目的探讨流体剪切力调节内皮细胞组织因子(tissue factor,TF)表达的机制。方法将脐静脉内皮细胞置于平行板流动腔中接受1．2 Pa(1 dyn／cm2=0．1 Pa)剪切力作用20 min后,采用凝胶电泳迁移率改变法(electorohoretic mobility shift analysis,EMSA)和蛋白免疫印迹分析(Western Blot,WB)检测转录因子Egr-1和Sp1在TF基因表达过程中的表达情况。结果 (1)静止组可见Sp1表达而无Egr-1表达;(2)剪切力组Sp1磷酸化水平和Egr-1表达水平均明显增高;(3)EMSA显示,对于Sp1／Egr-1结合位点,Egr-1对Sp1具有较强的竞争抑制作用。结论流体剪切力调节TF基因表达过程中,不同转录因子起着不同的作用:Sp1主要维持内皮细胞TF基因的基础表达;Egr-1竞争靶位点上的Sp1和磷酸化Sp1可能共同参与流体剪切力诱导TF基因表达。

关键词：剪切力转录因子内皮细胞:组织因子

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