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中华医学会烧伤外科学分会第十二届学术年会

作者：周俊驿张小容胡晓红吴军罗高兴陈志强杨思思谭江琳詹日兴孙薇姚智慧崔艳艳杨俊杰第三军医大学西南医院烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市疾病蛋白质组学重点实验定重庆 400038

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ITGB4BP对Wnt/β-catenin信号通路活性的下调作用

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第三军医大学学报 2010年第18期32卷 1945-1948页

作者：赖庆梧彭旭谭江琳张小容胡小红张毅罗高兴吴军华南理工大学生物科学与工程学院广州510006 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室疾病蛋白质组学重庆市市级重点实验室重庆400038

目的探讨β4整合素结合蛋白ITGB4BP对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将对照组空载体pCMV-3B质粒和实验组pCMV-ITGB4BP质粒分别转染至HEK293细胞中,用Western blot和激光共聚焦技术检测细胞中β-catenin含量的变化,用含TCF/LEF启动... 详细信息

目的探讨β4整合素结合蛋白ITGB4BP对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将对照组空载体pCMV-3B质粒和实验组pCMV-ITGB4BP质粒分别转染至HEK293细胞中,用Western blot和激光共聚焦技术检测细胞中β-catenin含量的变化,用含TCF/LEF启动子的荧光素酶TOPFlash质粒和内参pRL-TK质粒共转染对照组和实验组的HEK293细胞,用荧光素酶活性分析法检测ITGB4BP转染后HEK293细胞TCF/LEF活性的变化。设不转染质粒组为正常组,对照组和实验组均分别设未加LiCl组和加LiCl组。结果 Western blot检测结果:与正常组或对照组比较,实验组细胞β-catenin表达显著减少(P<0.05)。加LiCl之后,β-catenin的表达显著增强(P<0.05),与未加有LiCl的正常组或对照组比较,加LiCl的实验组细胞内β-catenin仍有较高的表达,但差异无显著性。激光共聚焦技术观察:实验组β-catenin(绿色荧光)表达较对照组降低。加LiCl之后,β-catenin(绿色荧光)表达增强,与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光强度。荧光素酶活性分析法检测:实验组的荧光素酶活性较对照组显著降低(P<0.05)。LiCl作用之后,Wnt/β-catenin信号通路活性明显增强(P<0.05),与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光素酶活性(P<0.05)。结论ITGB4BP可以下调Wnt/β-catenin信号通路的活性。

关键词： β4整合素结合蛋白 Wnt/β-catenin信号通路氯化锂

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临床应用生长因子促进创面愈合进展

临床应用生长因子促进创面愈合进展

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2010年第七届全国烧伤救治专题研讨会

作者：周俊峄罗高兴吴军 400038重庆第三军医大学西南医院烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室疾病蛋白质组学重庆市重点实验室

本文检索回顾了近年来国内外有关商品化的重组EGF、FGF、PDGF及TGF等应用于各种急慢性创面治疗的临床研究进展，综合评价其临床效果和副作用。相关临床证据表明，当前临床上应用的上述几种重组生长因子产品在促进创面愈合、减少病理性...

本文检索回顾了近年来国内外有关商品化的重组EGF、FGF、PDGF及TGF等应用于各种急慢性创面治疗的临床研究进展，综合评价其临床效果和副作用。相关临床证据表明，当前临床上应用的上述几种重组生长因子产品在促进创面愈合、减少病理性瘢痕形成、改善功能遗留方面作用确切，除PDGF外尚无明确的严重不良反应报道。其结果与之前的研究结论有较好的一致性，但重组生长因子产品的临床应用方面尚有一些问题需要进步研究探讨。

关键词：

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胎猪皮肤前体组织异种移植后的生长发育鉴定

胎猪皮肤前体组织异种移植后的生长发育鉴定

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第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会

作者：黄正根吴军罗高兴贺伟峰谭江琳王晓娟胡婕杨世伟彭旭杨俊杰彭彦孟甘成军陈希炜程文广袁顺宗张小容葛良鹏魏泓创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学西南医院全军烧伤研究所重庆市器官移植研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室

目的:鉴定胎猪皮肤前体组织异种移植后新生组织的来源。方法:利用精确孕龄为56d的贵州香猪胎猪建立皮肤前体组织移植裸鼠的创面微粒移植模型,术后12w于愈合创面取材鉴定其移植后生长发育情况。采用石蜡切片行免疫组织化学染色,利用角蛋... 详细信息

目的:鉴定胎猪皮肤前体组织异种移植后新生组织的来源。方法:利用精确孕龄为56d的贵州香猪胎猪建立皮肤前体组织移植裸鼠的创面微粒移植模型,术后12w于愈合创面取材鉴定其移植后生长发育情况。采用石蜡切片行免疫组织化学染色,利用角蛋白抗体(Cytokeratin MNF 116,DAKO)及Fortana法黑色素染色检测新生皮肤组织的表皮是否为猪

关键词：异种移植体组织生长发育

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应用胚胎皮肤前体组织修复皮肤创面的实验研究

应用胚胎皮肤前体组织修复皮肤创面的实验研究

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第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会

作者：吴军黄正根罗高兴贺伟峰谭江琳王晓娟胡婕杨世伟彭旭杨俊杰彭彦孟甘成军贾雄飞陈希炜程文广袁顺宗张小容葛良鹏魏泓创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学西南医院全军烧伤研究所重庆市器官移植研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室

随着干细胞及组织工程的发展,创伤修复取得了很大的进步,然而如何提高大面积烧创伤患者的愈后功能、改善其生活质量仍旧是医学工作者面临的巨大挑战。近年有研究表明特定胎龄的猪或者人胚胎前体组织/器官(肝、肾、胰、脾等)异种移植后...

随着干细胞及组织工程的发展,创伤修复取得了很大的进步,然而如何提高大面积烧创伤患者的愈后功能、改善其生活质量仍旧是医学工作者面临的巨大挑战。近年有研究表明特定胎龄的猪或者人胚胎前体组织/器官(肝、肾、胰、脾等)异种移植后既能够生长发育成为相应的成熟组织(或器官)又不形成畸胎瘤,且能发挥一定的生理功能。胎猪皮肤前体组织是否也具有这种特性呢?我们对此做了系统的研究。

关键词：

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增生性瘢痕组织和正常皮肤来源的成纤维细胞分泌蛋白的差异蛋白质组学研究

增生性瘢痕组织和正常皮肤来源的成纤维细胞分泌蛋白的差异蛋白质...

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第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会

作者：贺伟峰吴军罗高兴甘成军程文广袁顺宗彭旭贾雄飞谭江琳王晓娟胡婕黄正根杨世伟陈希炜张小容创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学西南医院全军烧伤研究所重庆市器官移植研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室

目的:分析增生性瘢痕组织和正常皮肤来源的成纤维细胞分泌蛋白组成,并对这些蛋白进行初步分析,为进一步探讨瘢痕的形成机制奠定基础。方法:首先采用丙酮沉淀法提取不同来源的成纤维细胞培养上清蛋白,然后将提取出的上清蛋白根据分子量... 详细信息

目的:分析增生性瘢痕组织和正常皮肤来源的成纤维细胞分泌蛋白组成,并对这些蛋白进行初步分析,为进一步探讨瘢痕的形成机制奠定基础。方法:首先采用丙酮沉淀法提取不同来源的成纤维细胞培养上清蛋白,然后将提取出的上清蛋白根据分子量大小通过SDS-PAGE进行初步分离,进一步将分离出的蛋白进行胶内酶解,酶解后的肽段通过液相-芯片-离子阱质谱技术进行鉴定和生物信息学分析,建立增生性瘢痕组织和正常皮肤来源的成纤维细胞分泌蛋白谱图,并通过GO(Gene Ontology)对这些分泌蛋白进行功能分析。结果:在正常皮肤成纤维细胞培养上清中鉴定出82个蛋白,增生性瘢痕组织成纤维细胞培养上清中鉴定出79个蛋白。其中48个蛋白为共有蛋白,34个为正常纤维细胞所特有,31个为增生性瘢痕组织成纤维细胞所特有。通过生物信息学分析和查询相关的数据库以及WB回复性验证,确定前胶原C内肽酶增强子1(Procollagen C-endopeptidase enhancer 1)瘢痕的形成密切有关。结论:通过对比增生性瘢痕组织和正常皮肤组织来源的成纤维细胞的培养上清,我们找到了与瘢痕组织形成密切相关的成纤维细胞分泌蛋白前胶原C内肽酶增强子1,为进一步阐明增生性瘢痕组织的发生机制和临床干预打下了初步的基础。

关键词：增生性瘢痕组织培养上清成纤维细胞正常皮肤分泌蛋白差异蛋白质组学

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胎猪皮肤前体组织异种移植模型的研究

胎猪皮肤前体组织异种移植模型的研究

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第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会

作者：黄正根吴军罗高兴贺伟峰谭江琳王晓娟胡婕杨世伟彭旭杨俊杰彭彦孟甘成军陈希炜程文广袁顺宗张小容葛良鹏魏泓第三军医大学:西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市器官移植基础研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室

目的:如何有效地修复烧伤创面、异种皮肤移植等是烧伤研究的重要内容,本文探讨了胎猪皮肤前体组织异种移植模型及移植后发育过程。方法:取精确胎龄为56d的胎猪皮肤前体组织,分组进行移植,①背部创面模型组:制备成微粒皮后移植到BALB/c... 详细信息

目的:如何有效地修复烧伤创面、异种皮肤移植等是烧伤研究的重要内容,本文探讨了胎猪皮肤前体组织异种移植模型及移植后发育过程。方法:取精确胎龄为56d的胎猪皮肤前体组织,分组进行移植,①背部创面模型组:制备成微粒皮后移植到BALB/c裸鼠背部创面,以人尸体皮覆盖;背部皮下模型组:制备成小张邮票皮,植入裸鼠背部皮下;耳廓皮下模型组:制备成微粒皮植入裸鼠耳廓皮下。各组于移植后观察其生长发育特性,并于移植后6周和12周取材行HE染色观察其组织结构形态。新生组织块大小采用双样本t检验。结果:各模型的胎猪皮肤前体组织移植后均能存活并继续生长,背部创面模型组生长能力显著大于耳廓皮下模型组,新生皮肤组织均具有真皮和表皮,耳廓皮下模型的真皮附属器仅见毛囊(毛发),偶见皮脂腺,未见汗腺,但是背部创面模型组及背部皮下模型组不仅能发育成毛囊(毛发)、还见大量皮脂腺和汗腺。结论:背部创面移植模型最适合于胎猪皮肤前体组织异种移植及移植后发育的研究。

关键词：异种移植模型模型组微粒皮体组织

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整合素β1在微粒皮混合移植中的异位表达及定量分析

整合素β1在微粒皮混合移植中的异位表达及定量分析

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第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会

作者：林恒彭代智严泉周新刘敬创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学西南医院全军烧伤研究所重庆市器官移植研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室第三军医大学基础医学部实验动物学教研室

目的:初步探索自异体微粒皮混合移植促进创面愈合的机理。方法:建立自异体微粒皮混合移植大鼠动物模型。实验分两部分,第一部分分为三组:(1)自体皮组,移植面积扩张比为10:1的自体微粒皮;(2)混合1组,自异体微粒皮移植面积扩张比各为10:1;... 详细信息

目的:初步探索自异体微粒皮混合移植促进创面愈合的机理。方法:建立自异体微粒皮混合移植大鼠动物模型。实验分两部分,第一部分分为三组:(1)自体皮组,移植面积扩张比为10:1的自体微粒皮;(2)混合1组,自异体微粒皮移植面积扩张比各为10:1;(3)混合2组,自异体微粒皮移植面积扩张比分别为10:1和10:3。第二部分也分为三组:(1)自体皮组,移植面积扩张比为20:1的自体微粒皮;(2)混合1组,自异体微粒皮移植面积分别为20:1和20:3;(3)混合2组,自异体微粒皮移植面积扩张比分别为20:1和20:6。于混合移植术后从各组大鼠愈合创面取样,第一部分动物实验取样时间为术后2、3、4周,第二部分动物实验取样时间为术后3、4周,每组动物每个时相点取3个标本。然后进行HE染色和整合素β1(Integrinβ1)免疫组织化学染色,并对表皮层厚度进行显微测量,然后软件测定、比较各组标本中整合素β1的表达情况。结果:(1)HE染色:微粒皮移植后大鼠创面的表皮层厚度明显增加,真皮内有不同程度的血管扩张和单个核细胞浸润;(2)术后2～4周,第一部分动物实验中两个混合组大鼠皮肤表皮层厚度均明显厚于自体皮组(p<0.05);术后3～4周,第二部分动物实验中两个混合组大鼠皮肤表皮层厚度均明显厚于自体皮组(p<0.05)。(3)混合移植术后各组新生表皮中均可见整合素β1阳性细胞,以棘细胞层和颗粒层为主。术后2周,第一部分实验中混合组整合素β1的表达情况明显强于自体皮组(p<0.01),且混合1组的表达也要明显强于混合2组(p<0.01);术后3～4周,混合1组的表达仍然明显强于自体皮组和混合2组(p<0.01)。第二部分实验仅在术后3周时混合2组整合素β1的表达要高于自体皮组(p<0.05)。结论:在白异体微粒皮混合移植中,整合素β1的异位表达和表达增强与表皮细胞的增殖分化、创面再上皮化以及表皮层增厚有密切关系,而且在自异体微粒皮混合移植促进创面愈合的过程中,整合素β1表达阳性细胞很可能发挥了重要的作用。

关键词：微粒皮扩张比混合移植整合素异位表达定量分析

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HT036是纤维化相关基因P311的相互作用蛋白

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创伤外科杂志 2009年第5期11卷 412-415页

作者：彭旭谭江琳袁顺宗贺伟峰陈烯伟罗高兴吴军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室疾病蛋白质组学重庆市市级重点实验室重庆400038

目的利用激光共聚焦显微镜观察未知蛋白(HT036)与纤维化相关蛋白(P311)的细胞内表达与共定位。方法构建带绿色荧光的HT036真核表达载体,经鉴定正确后,与前期构建带红色荧光的P311真核表达载体共转染人胚肾上皮细胞株(HEK293),同时共转... 详细信息

目的利用激光共聚焦显微镜观察未知蛋白(HT036)与纤维化相关蛋白(P311)的细胞内表达与共定位。方法构建带绿色荧光的HT036真核表达载体,经鉴定正确后,与前期构建带红色荧光的P311真核表达载体共转染人胚肾上皮细胞株(HEK293),同时共转染空载体做对照,激光共聚焦显微镜下观察蛋白在细胞内表达、分布和共定位。结果HT036真核表达载体经聚合酶链反应(PCR)、双酶切和测序鉴定正确,与P311共转染HEK293细胞后,激光共聚焦显微镜观察到绿色和红色荧光表达。HT036和P311主要分布在细胞胞浆,两者在HEK293细胞中存在共定位,而对照组则无该现象。结论通过酵母双杂交筛选出的P311相互作用蛋白HT036,在活体细胞内存在空间上的共定位,进一步证明它们之间的相互作用,为探讨P311纤维化机制提供新的切入点。

关键词：创伤修复蛋白基因成纤维细胞瘢痕

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β4整合素结合蛋白调控成纤维细胞胞外基质生成的实验研究

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创伤外科杂志 2009年第5期11卷 397-401页

作者：谭江琳彭旭袁顺宗马兵张小容胡小红罗高兴吴军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室疾病蛋白质组学重庆市市级重点实验室重庆400038

目的探讨β4整合素结合蛋白(ITGB4BP)对成纤维细胞胞外基质生成的调控作用。方法分别构建、包装能在哺乳动物细胞中促进和抑制ITGB4BP表达的腺病毒表达载体pAdEasy-ITGB4BP-EGFP和慢病毒表达载体Lentivirus-FIV-H1/U6-copGFP-ITGB4BP-RN... 详细信息

目的探讨β4整合素结合蛋白(ITGB4BP)对成纤维细胞胞外基质生成的调控作用。方法分别构建、包装能在哺乳动物细胞中促进和抑制ITGB4BP表达的腺病毒表达载体pAdEasy-ITGB4BP-EGFP和慢病毒表达载体Lentivirus-FIV-H1/U6-copGFP-ITGB4BP-RNAi,经筛选鉴定有效后,分别感染人正常皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕(HTS)成纤维细胞,利用ELISA检测细胞培养上清内基质金属蛋白酶(MMP-9)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)的表达情况。结果正常皮肤成纤维细胞内IT-GB4BP高表达后,引起MMP-9、TGF-β1和collagenⅠ表达降低;反之HTS成纤维细胞内ITGB4BP表达抑制后,MMP-9、TGF-β1和collagenⅠ表达增高。结论ITGB7BP对MMP-9、TGF-β1和collagenⅠ表达具有重要调节功能。提示ITGB4BP可能具有抗纤维化的重要功能,为下一步深入探讨HTS的形成机制提供了重要依据。

关键词： β4整合素结合蛋白腺病毒慢病毒成纤维细胞

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