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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：林恒彭代智严泉周新刘敬创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学西南医院全军烧伤研究所重庆市器官移植研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室第三军医大学基础医学部实验动物学教研室

目的:初步探索自异体微粒皮混合移植促进创面愈合的机理。方法:建立自异体微粒皮混合移植大鼠动物模型。实验分两部分,第一部分分为三组:(1)自体皮组,移植面积扩张比为10:1的自体微粒皮;(2)混合1组,自异体微粒皮移植面积扩张比各为10:1;... 详细信息

目的:初步探索自异体微粒皮混合移植促进创面愈合的机理。方法:建立自异体微粒皮混合移植大鼠动物模型。实验分两部分,第一部分分为三组:(1)自体皮组,移植面积扩张比为10:1的自体微粒皮;(2)混合1组,自异体微粒皮移植面积扩张比各为10:1;(3)混合2组,自异体微粒皮移植面积扩张比分别为10:1和10:3。第二部分也分为三组:(1)自体皮组,移植面积扩张比为20:1的自体微粒皮;(2)混合1组,自异体微粒皮移植面积分别为20:1和20:3;(3)混合2组,自异体微粒皮移植面积扩张比分别为20:1和20:6。于混合移植术后从各组大鼠愈合创面取样,第一部分动物实验取样时间为术后2、3、4周,第二部分动物实验取样时间为术后3、4周,每组动物每个时相点取3个标本。然后进行HE染色和整合素β1(Integrinβ1)免疫组织化学染色,并对表皮层厚度进行显微测量,然后软件测定、比较各组标本中整合素β1的表达情况。结果:(1)HE染色:微粒皮移植后大鼠创面的表皮层厚度明显增加,真皮内有不同程度的血管扩张和单个核细胞浸润;(2)术后2～4周,第一部分动物实验中两个混合组大鼠皮肤表皮层厚度均明显厚于自体皮组(p<0.05);术后3～4周,第二部分动物实验中两个混合组大鼠皮肤表皮层厚度均明显厚于自体皮组(p<0.05)。(3)混合移植术后各组新生表皮中均可见整合素β1阳性细胞,以棘细胞层和颗粒层为主。术后2周,第一部分实验中混合组整合素β1的表达情况明显强于自体皮组(p<0.01),且混合1组的表达也要明显强于混合2组(p<0.01);术后3～4周,混合1组的表达仍然明显强于自体皮组和混合2组(p<0.01)。第二部分实验仅在术后3周时混合2组整合素β1的表达要高于自体皮组(p<0.05)。结论:在自异体微粒皮混合移植中,整合素β1的异位表达和表达增强与表皮细胞的增殖分化、创面再上皮化以及表皮层增厚有密切关系,而且在自异体微粒皮混合移植促进创面愈合的过程中,整合素β1表达阳性细胞很可能发挥了重要的作用。

关键词：微粒皮扩张比混合移植整合素异位表达定量分析

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自体脂肪颗粒及微粒皮混合移植对大面积深度烧伤创面术后质量影响的临床研究

自体脂肪颗粒及微粒皮混合移植对大面积深度烧伤创面术后质量影响...

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：刘顺利彭毅志李晓鲁创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学西南医院全军烧伤研究所重庆市器官移植研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室第三军医大学基础医学部实验动物学教研室

目的:观察大面积深度烧伤患者自体脂肪颗粒及微粒皮混合移植对创面术后功能的作用,并初步探讨其机制方法:符合条件的20病例,按照入院先后顺序编号,自身对照,双侧肢体对称部位创面随机分为试验组与对照组,对照组采用自体微粒皮移植,试验... 详细信息

目的:观察大面积深度烧伤患者自体脂肪颗粒及微粒皮混合移植对创面术后功能的作用,并初步探讨其机制方法:符合条件的20病例,按照入院先后顺序编号,自身对照,双侧肢体对称部位创面随机分为试验组与对照组,对照组采用自体微粒皮移植,试验组采用自体微粒皮+脂肪颗粒(按照体积比1:1)混合移植。术后2周、5周、10周测定创面挛缩程度,术后30天、60天、90天观察患肢肘/膝关节活动度,SPSS软件比较两组间差异。术后7天、14天、21天、28天切取部分创面组织作组织切片HE染色。结果:(1)移植术后30天、60天、90天试验组肘/膝关节自主活动最大角度平均为(38.3±.62)°、(55.37±7.07)°、(61.57±8.12)°,均明显大于对照组(20.1±2.83)°、(37.00±6.33)°、(46.00±8.25)°(p<0.01)。(2)移植术后30天、60天、90天试验组30秒内肘/膝关节达到自主活动最大角度的活动次数依次为2.25±0.25、5±1.89、6.43±0.81,均明显大于对照组1.25±0.16、2.0±1.89、3.43±0.20(p<0.01)。(3)移植术后14天、35天试验组创面收缩率为(5.67±0.48)%、(6.64±0.78)%,与对照组(5.51±0.38)%、(7.90±1.65)%相比(p>0.05),无明显差异;移植术后70天试验组创面收缩率为(9.14±0.82)%,与对照组(11.25±1.25)%相比(p<0.05),有显著差别。(4)HE染色显示试验组上皮化早于对照组,胶原纤维排列较整齐。结论:自体脂肪颗粒及微粒皮混合移植后,能够明显提高深度烧伤创面的愈合质量,改善关节功能。

关键词：微粒皮大面积深度烧伤混合移植体脂肪临床研究

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应用胚胎皮肤前体组织修复皮肤创面的实验研究

应用胚胎皮肤前体组织修复皮肤创面的实验研究

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：吴军黄正根罗高兴贺伟峰谭江琳王晓娟胡婕杨世伟彭旭杨俊杰彭彦孟甘成军贾雄飞陈希炜程文广袁顺宗张小容葛良鹏魏泓创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学西南医院全军烧伤研究所重庆市器官移植研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室第三军医大学基础医学部实验动物学教研室

随着干细胞及组织工程的发展,创伤修复取得了很大的进步,然而如何提高大面积烧创伤患者的愈后功能、改善其生活质量仍旧是医学工作者面临的巨大挑战。近年有研究表明特定胎龄的猪或者人胚胎前体组织/器官(肝、肾、胰、脾等)异种移植后... 详细信息

随着干细胞及组织工程的发展,创伤修复取得了很大的进步,然而如何提高大面积烧创伤患者的愈后功能、改善其生活质量仍旧是医学工作者面临的巨大挑战。近年有研究表明特定胎龄的猪或者人胚胎前体组织/器官(肝、肾、胰、脾等)异种移植后既能够生长发育成为相应的成熟组织(或器官)又不形成畸胎瘤,且能发挥一定的生理功能。胎猪皮肤前体组织是否也具有这种特性呢?我们对此做了系统的研究。

关键词：皮肤创面组织修复

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正常与脑缺血大鼠脑皮质线粒体的比较蛋白质组学研究

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第三军医大学学报 2008年第10期30卷 964-968页

作者：杨涌涛陈康宁贺伟峰黄河清刘国军周振华冉鸿第三军医大学西南医院神经内科重庆400038 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室、疾病蛋白质组学重庆市市级重点实验室重庆400038

目的采用比较蛋白质组学方法观察正常与脑缺血大鼠脑皮质线粒体蛋白表达差异。方法SD大鼠按随机数字表法分为正常组和缺血组,采用改进的栓线法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral antery occlusion,MCAO)模型,分离大鼠缺血及正常大脑皮... 详细信息

目的采用比较蛋白质组学方法观察正常与脑缺血大鼠脑皮质线粒体蛋白表达差异。方法SD大鼠按随机数字表法分为正常组和缺血组,采用改进的栓线法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral antery occlusion,MCAO)模型,分离大鼠缺血及正常大脑皮层,纯化线粒体蛋白进行二维电泳和凝胶图像分析,对差异蛋白质用HPLC-Chip/MS纳流液质联用技术进行序列分析,经Spectrum Mill搜索NCBInr数据库后鉴定蛋白质。结果正常与脑缺血大鼠脑皮层线粒体蛋白表达存在显著差异,这些差异蛋白经鉴定,主要为TUC-4b、肌酸激酶同工酶、HS1结合蛋白、线粒体核糖体蛋白S27、异柠檬酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、二氢硫辛酸脱氢酶、泛醌-细胞色素C还原酶、琥珀酸辅酶A还原酶、细胞色素氧化酶、F1-ATP beta链、热休克蛋白70、热休克蛋白60、脂酰辅酶A脱氢酶等差异线粒体蛋白。结论脑缺血可以导致皮层线粒体相关蛋白表达改变,提示其作用可能与线粒体能量代谢、凋亡有关。

关键词：脑缺血线粒体蛋白质组学凋亡

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VEGF165基因转染EPCs移植对大鼠阿霉素肾病组织学的影响

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第三军医大学学报 2008年第2期30卷 93-97页

作者：赵洪雯余荣杰彭侃夫刘宏吴雄飞贺伟峰张晓蓉第三军医大学西南医院肾科重庆400038 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室疾病蛋白质组学重庆市市级重点实验室重庆400038

目的构建含血管内皮生长因子165基因的重组腺病毒(Ad-VEGF165),转染血管内皮祖细胞(EPCs)后,观察其对阿霉素肾病大鼠肾脏组织学的影响。方法用细菌内同源重组法构建含VEGF165基因的重组腺病毒Ad-VEGF165,通过PCR和Western blot鉴定所构... 详细信息

目的构建含血管内皮生长因子165基因的重组腺病毒(Ad-VEGF165),转染血管内皮祖细胞(EPCs)后,观察其对阿霉素肾病大鼠肾脏组织学的影响。方法用细菌内同源重组法构建含VEGF165基因的重组腺病毒Ad-VEGF165,通过PCR和Western blot鉴定所构建的腺病毒。贴壁法体外培养获得大鼠骨髓来源的EPCs,Ad-VEGF165体外转染EPCs,检测转染后目的基因的蛋白表达。大鼠阿霉素肾病模型形成过程中,尾静脉注射转染Ad-VEGF165的EPCs,在第16周时观察肾脏组织学变化。结果PCR和Western blot证实构建的重组腺病毒含有目的基因,滴度为1.4×1010PFU/ml;培养第6天的EPCs用于Ad-VEGF165转染,转染后24h,培养上清中VEGF蛋白表达较对照组和转染前增加。转染了VEGF165基因的EPCs移植后第12周(切肾术后16周),转染组的肾小球硬化和肾小管间质纤维化的程度明显较肾病组轻。结论转染了VEGF165基因的EPCs可以减轻阿霉素肾病的肾小球和肾小管的损伤程度,为VEGF在慢性肾脏病治疗提供了实验基础。

关键词：血管内皮生长因子腺病毒内皮祖细胞阿霉素肾病

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类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞的差异蛋白质谱分析

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第三军医大学学报 2008年第2期30卷 166-169页

作者：柏干苹周丽娜贺伟峰罗高兴陈烯伟陈光兴胡晓红石东文方勇飞吴军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所疾病蛋白质组学重庆市重点实验室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学西南医院关节外科中心重庆400038 第三军医大学西南医院风湿科重庆400038

目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异，探讨差异蛋白在类风湿关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度（immobilized pH gradient，IPG）双向凝胶电泳... 详细信息

目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异，探讨差异蛋白在类风湿关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度（immobilized pH gradient，IPG）双向凝胶电泳（two—dimensional gel eleetrophoresis，2-DE）分离正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质，银染显色，PDQuest软件分析图像，比较两种细胞蛋白质组表达差异，对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定，并用Western blot验证部分表达差异蛋白质。结果①采用窄范围的pH4～7IPG胶条进行2-DE分析，正常人及RA患者滑膜细胞蛋白胶图上分别平均显示852、837个点。有49个蛋白点在正常、RA滑膜细胞问有2倍以上的显著性量变。②分别在胶图上共选取40个表达水平存在明显差异的蛋白质点进行质谱鉴定，鉴定出23个在RA患者滑膜细胞中表达上调蛋白质。Western blot验证Enolase α、Annexin I、CathepsinD、SOD2、Peroxiredoxin2在RA滑膜细胞中表达显著升高。结论正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异。这些差异蛋白可能参与类风湿关节炎的发病。

关键词：滑膜成纤维细胞蛋白质组双向电泳类风湿关节炎

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肾移植急性排斥反应早期诊断尿液蛋白质组学研究

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第三军医大学学报 2008年第24期30卷 2267-2271页

作者：贾雄飞贺伟峰罗高兴甘成军黄正根袁顺宗王小娟彭旭程文广谭江琳胡婕吴军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室疾病蛋白质组学重庆市市级重点实验室重庆400038 第三军医大学西南医院成都军区昆明总医院检验科昆明650032

目的利用二维凝胶电泳和生物信息学技术,从严格筛选的2例肾移植术后发生急性排斥反应患者尿液标本中,寻找急性排斥反应早期标志物。方法在pH值为4～7范围,采用Sypro-Ruby染色,对发生急性排斥反应过程的不同时间点(-3,-2,-1,7,14,21d)的... 详细信息

目的利用二维凝胶电泳和生物信息学技术,从严格筛选的2例肾移植术后发生急性排斥反应患者尿液标本中,寻找急性排斥反应早期标志物。方法在pH值为4～7范围,采用Sypro-Ruby染色,对发生急性排斥反应过程的不同时间点(-3,-2,-1,7,14,21d)的患者尿液二维凝胶电泳(Two-dimensional Gel Electrophoresis,2-DE)图谱进行比较,挑选了30个有上调或者下调趋势的蛋白点。将这些蛋白点进行切胶、胰酶消化后用MALDI-TOF-MS/MS分析。结果得到了重复性好、分辨率高的肾移植术后尿蛋白2-DE图谱。30个差异蛋白点经质谱分析和数据库检索,鉴定了16个蛋白点,对应13种蛋白质。根据蛋白功能查询结果,发现了3个蛋白含量变化趋势与排斥反应密切相关的蛋白,分别是α-1抗胰凝乳蛋白酶(alpha-1-antichymotrypsin,AACT)、肿瘤排斥抗原gp96(tumor rejection antigen gp96)和锌-α2糖蛋白(Zn-Al-pha-2-Glycoprotein)。结论肾移植术后发生急性排斥反应患者的不同时间点尿液2-DE图谱存在明显差异。AACT、肿瘤排斥抗原gp96和锌-α2糖蛋白可能作为临床诊断肾移植术后急性排斥反应的标志物候选蛋白。

关键词：肾移植急性排斥反应二维电泳质谱

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胎猪皮肤前体组织异种移植模型的研究

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第三军医大学学报 2008年第22期30卷 2072-2074页

作者：黄正根吴军罗高兴甘成军程文广贾雄飞葛良鹏魏泓第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市器官移植基础研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的探讨胎猪皮肤前体组织异种移植模型及移植后发育过程。方法取精确胎龄为56d的胎猪皮肤前体组织,分组进行移植,①背部创面模型组:制备成微粒皮后移植到BALB/c裸鼠背部创面,以人尸体皮覆盖;背部皮下模型组:制备成小张邮票皮,植入裸鼠... 详细信息

目的探讨胎猪皮肤前体组织异种移植模型及移植后发育过程。方法取精确胎龄为56d的胎猪皮肤前体组织,分组进行移植,①背部创面模型组:制备成微粒皮后移植到BALB/c裸鼠背部创面,以人尸体皮覆盖;背部皮下模型组:制备成小张邮票皮,植入裸鼠背部皮下;耳廓皮下模型组:制备成微粒皮植入裸鼠耳廓皮下。各组于移植后观察其生长发育特性,并于移植后6周和12周取材行HE染色观察其组织结构形态。新生组织块大小采用双样本t检验。结果各模型的胎猪皮肤前体组织移植后均能存活并继续生长,背部创面模型组生长能力显著大于耳廓皮下模型组,新生皮肤组织均具有真皮和表皮,耳廓皮下模型的真皮附属器仅见毛囊(毛发),偶见皮脂腺,未见汗腺,但是背部创面模型组及背部皮下模型组不仅能发育成毛囊(毛发)、还见大量皮脂腺和汗腺。结论背部创面移植模型最适合于胎猪皮肤前体组织异种移植及移植后发育的研究。

关键词：贵州香猪 BALB/c裸鼠皮肤前体组织异种移植移植模型

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局灶性脑缺血大鼠皮层神经元超微结构及线粒体呼吸功能变化的研究

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现代生物医学进展 2008年第9期8卷 1640-1642,1622,F0003页

作者：杨涌涛陈康宁黄河清贺伟峰刘国军周振华冉鸿第三军医大学西南医院神经内科第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤烧伤复合伤国家重点实验室疾病蛋白质组学重庆市市级重点实验室重庆400038

目的:研究局灶性脑缺血大鼠脑细胞超微结构及脑组织线粒体呼吸链功能的变化。方法:采用改良Zea Longa方法复制大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,透射电镜观察缺血后脑组织神经元超微结构的改变;检测呼吸链R3、R4、RCR、OPR等评价呼吸功能... 详细信息

目的:研究局灶性脑缺血大鼠脑细胞超微结构及脑组织线粒体呼吸链功能的变化。方法:采用改良Zea Longa方法复制大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,透射电镜观察缺血后脑组织神经元超微结构的改变;检测呼吸链R3、R4、RCR、OPR等评价呼吸功能的指标。结果:局灶性脑缺血大鼠脑组织神经元细胞结构严重破坏;与对照组相比,脑缺血时大鼠脑线粒体ST3、RCR和OPR降低,ST4升高。结论:脑缺血急性期线粒体结构破坏,功能受损严重,随着时间延长均有所恢复;保护线粒体呼吸链可能对脑缺血损伤有保护作用。

关键词： MCAO 线粒体超微结构呼吸功能

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局灶性脑缺血大鼠皮层神经元超微结构及线粒体呼吸功能变化的研究

局灶性脑缺血大鼠皮层神经元超微结构及线粒体呼吸功能变化的研究

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第十一届全国神经病学学术会议

作者：杨涌涛陈康宁黄河清贺伟峰刘国军周振华冉鸿第三军医大学西南医院神经内科全军烧伤研究所创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室疾病蛋白质组学重庆市市级重点实验室

目的研究大鼠脑细胞超微结构及脑组织线粒体呼吸链功能在局灶性脑缺血前后的变化。方法采用改良ZeaLonga方法复制大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,透射电镜观察缺血后脑组织神经元超微结构的改变;检测呼吸链R3、R4、RCR、OPR等评价呼吸功... 详细信息

目的研究大鼠脑细胞超微结构及脑组织线粒体呼吸链功能在局灶性脑缺血前后的变化。方法采用改良ZeaLonga方法复制大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,透射电镜观察缺血后脑组织神经元超微结构的改变;检测呼吸链R3、R4、RCR、OPR等评价呼吸功能的指标。结果①局灶性脑缺血大鼠脑组织神经元细

关键词：局灶性脑缺血线粒体呼吸功能微结构皮层神经元

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