检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第1期26卷 1-5页

作者：陈克强朱淮民倪灿荣宋关鸿上海交通大学农业与生物学院动物科学系上海201101 第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院病理科上海200433

目的研究伯氏疟原虫氯喹抗性株(RC株)和氯喹敏感株(N株)感染鼠脾脏B细胞活化与树突状细胞(DC)的关系。方法分别用感染N株或RC株疟原虫的红细胞(iRBC)腹腔接种感染ICR小鼠(1×106个iRBC/只)。当小鼠原虫血症N株达50%～80%、RC株达61... 详细信息

目的研究伯氏疟原虫氯喹抗性株(RC株)和氯喹敏感株(N株)感染鼠脾脏B细胞活化与树突状细胞(DC)的关系。方法分别用感染N株或RC株疟原虫的红细胞(iRBC)腹腔接种感染ICR小鼠(1×106个iRBC/只)。当小鼠原虫血症N株达50%～80%、RC株达61.7%～68.4%时,断颈处死取脾脏。常规方法制作石蜡切片,HE染色或免疫组织化学染色,进行组织学观察。制作超薄切片,透射电镜观察脾脏细胞的变化。制作冰冻切片进行免疫荧光观察。流式细胞仪分析比较B细胞和DC变化。结果RC株感染小鼠脾脏白髓增生明显,抗B细胞的特异性表面分子CD45R/B220和CD19抗体同时表达阳性的B细胞在脾细胞中的百分比增加,中、小淋巴细胞数量增多,在红髓内浆母细胞与成熟的浆细胞数量增多。而N株感染小鼠脾小体则以大、小淋巴细胞为主,生发中心不明显,红髓可见大量的含疟原虫的红细胞、小淋巴细胞,而浆母细胞和其他发育期浆细胞则少见。RC株感染小鼠脾脏内白细胞分化抗原11c(CD11c)阳性的DC数量明显增多,尤其动脉周围淋巴鞘T细胞区。并且这些DC表面主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)类分子表达明显升高,表明主要是成熟的DC增多。DC外形不规则,胞质丰富,电子密度高,含发达的高尔基复合体和吞噬泡样结构。结论RC株感染小鼠脾脏成熟的DC明显增加,从而诱导B细胞的活化增殖。

关键词：伯氏疟原虫氯喹抗性脾脏 B细胞树突状细胞小鼠

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缺血再灌注损伤对兔心肌线粒体钙稳态的影响

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 186-188页

作者：徐美英马宇王学敏张富军第二军医大学长海医院麻醉科上海200433 基础医学部生化与分子生物学教研室

目的 :观察心肌在高钾停搏液保护下经历缺血再灌注损伤时 ,其线粒体钙稳态的变化。方法 :采用改良 L angendorff离体灌注兔心脏模型 ,用高钾停搏液停跳停止灌注 1h后再灌注 30 m in。电镜观察线粒体的变化 ,分离心肌线粒体并负载钙离子... 详细信息

目的 :观察心肌在高钾停搏液保护下经历缺血再灌注损伤时 ,其线粒体钙稳态的变化。方法 :采用改良 L angendorff离体灌注兔心脏模型 ,用高钾停搏液停跳停止灌注 1h后再灌注 30 m in。电镜观察线粒体的变化 ,分离心肌线粒体并负载钙离子敏感荧光试剂 Fura 2 - AM,测定线粒体基质游离钙浓度以及线粒体在高钙环境中摄钙能力和加入钠离子后的释钙能力。结果 :心肌线粒体基质钙离子浓度明显升高 ,但摄钙和释钙能力基本已恢复正常。电镜下大量线粒体中可见高密度的钙盐沉积 ,少量线粒体肿胀、嵴消失。结论 :在再灌注初期线粒体钙超载一方面是由于生理性的摄钙过程启动 ,但也有病理性的摄钙过程参与 ,30 min以后已没有病理性摄钙过程参与 ,摄钙释钙能力基本正常。

关键词：再灌注损伤线粒体钙稳态影响兔心肌缺血

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PTEN cDNA重组腺病毒载体的构建

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第二军医大学学报 2004年第5期25卷 556-558页

作者：杨培丽刘玉环蔡在龙娄永华崔英杨志峰毛积芳长海医院妇产科第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:应用同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的腺病毒载体pAdPTEN cDNA,产生重组腺病毒AdPTEN。方法:将PTEN cDNA自载体pcDNA3-PTEN cDNA中切出,亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中同... 详细信息

目的:应用同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的腺病毒载体pAdPTEN cDNA,产生重组腺病毒AdPTEN。方法:将PTEN cDNA自载体pcDNA3-PTEN cDNA中切出,亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,产生重组PTEN cDNA的腺病毒载体pAdPTEN cDNA,通过脂质体介导将pAdPTEN cDNA转染至HEK293细胞,产生有感染能力的腺病毒AdPTEN,并测定其滴度。结果:产生具有感染能力的重组腺病毒AdPTEN,滴度约为5×109pfu／ml。结论:成功构建出含有PTEN cDNA的具有感染能力的腺病毒,并可获得较高的病毒滴度,为进一步研究PTEN基因的功能和相关肿瘤的基因治疗提供有效的基因转移载体。

关键词： PTEN cDNA 重组腺病毒载体构建抑癌基因

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含CD基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 1996年第3期17卷 289-291页

作者：崔龙曹广文王元和屠岳孟荣贵高军仇小芳吴宗娣谢苏庆第二军医大学长海医院普外科第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院普外科

含ＣＤ基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙，曹广文，王元和，屠岳，孟荣贵，高军，仇小芳，吴宗娣，谢苏庆关键词大肠癌；胞嘧啶脱氨酶基因；逆转录病毒载体；癌胚抗原；转录调控序列胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）是真菌及某些大肠... 详细信息

含ＣＤ基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙，曹广文，王元和，屠岳，孟荣贵，高军，仇小芳，吴宗娣，谢苏庆关键词大肠癌；胞嘧啶脱氨酶基因；逆转录病毒载体；癌胚抗原；转录调控序列胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）是真菌及某些大肠杆菌等ＤＮＡ嘧啶补救合成途径中的关...

关键词：大肠肿瘤 CD基因逆转录病毒载体病毒载体

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睫状神经营养因子单克隆抗体制备

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第二军医大学学报 1999年第8期20卷 560-562页

作者：邓小华周芸曾瑞云蒋春雷路长林第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433 上海第二医科大学医学检验重点实验室上海200025

目的：制备睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＣＮＴＦ）单克隆抗体。方法：将ＣＮＴＦ免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞和ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，经３次克隆化培养，获得... 详细信息

目的：制备睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＣＮＴＦ）单克隆抗体。方法：将ＣＮＴＦ免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞和ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，经３次克隆化培养，获得分泌ＣＮＴＦ单克隆抗体的杂交瘤细胞株；然后进行体内诱生获取含大量ＣＮＴＦ单克隆抗体的腹水和血清；再进行ＣＮＴＦ单克隆抗体鉴定和效价测定。结果：获得５株分泌ＣＮＴＦ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，抗体亚型为ＩｇＧ２ａ；腹水和血清中该抗体效价分别为１∶１０７～１∶１０８和１∶１０６；该抗体能特异性地显示ＳＤ大鼠脑内表达ＣＮＴＦ的神经元，其中１株单克隆抗体能抑制ＣＮＴＦ促进体外培养新生ＳＤ大鼠骨骼肌细胞增殖的功能。结论：制备成功高效且特异的ＣＮＴＦ单克隆抗体，为ＣＮＴＦ结构、功能和机制的研究提供了有效工具。

关键词：神经营养因子单克隆抗体 CNTF

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利用荧光mRNA差异显示技术克隆短芒大麦盐胁迫相关基因的ESTs

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第二军医大学学报 2004年第2期25卷 203-206页

作者：陆一鸣李彦舫白杰英颜宏利贺艳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 解放军军需大学生物学教研室长春130062

目的 :获取短芒大麦盐胁迫相关基因的 ESTs。方法 :应用荧光 m RNA差异显示技术进行筛选 ,并利用反向 North-ern杂交方法对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性。结果 :共获得 32个与盐胁迫相关的 c DNA序列 ,并获得 Gen Bank注册号。BL ... 详细信息

目的 :获取短芒大麦盐胁迫相关基因的 ESTs。方法 :应用荧光 m RNA差异显示技术进行筛选 ,并利用反向 North-ern杂交方法对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性。结果 :共获得 32个与盐胁迫相关的 c DNA序列 ,并获得 Gen Bank注册号。BL AST同源性分析结果表明 ,1 3个与已知基因序列有同源性 ,1 9个为未知 ESTs。其类型分别为 :诱导表达型 ,2 2个 ;增强表达型 ,7个 ;抑制表达型 ,3个。结论 :通过荧光 m RNA差异显示技术获得了短芒大麦盐胁迫相关基因的 ESTs。

关键词：荧光mRNA差异显示技术克隆短芒大麦盐胁迫相关基因 ESTs 基因表达

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阳离子脂质体介导NF-κB“decoy”ODNs转染巨噬细胞条件的优化

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第二军医大学学报 2003年第8期24卷 856-858,F004页

作者：王建李金宝任绪义邓小明第二军医大学长海医院麻醉科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的 :观察 NF- κB“decoy”ODNs在阳离子脂质体 lipofectin介导下转染小鼠巨噬细胞 J774 .1的优化参数以及在细胞内的分布。方法 :改变 ODN与 lipofectin比率、转染时间 ;用流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度和摄取率评价转染效率 ... 详细信息

目的 :观察 NF- κB“decoy”ODNs在阳离子脂质体 lipofectin介导下转染小鼠巨噬细胞 J774 .1的优化参数以及在细胞内的分布。方法 :改变 ODN与 lipofectin比率、转染时间 ;用流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度和摄取率评价转染效率 ;荧光显微镜观察细胞内荧光分布 ;测定细胞上清乳酸脱氢酶 (L DH)观察细胞损伤情况。结果 :lipofectin介导转染显著提高 J774 .1细胞对 NF- κB“decoy”ODNs的摄取 ;在 2 4孔培养板中 ,NF- κB“decoy”ODNs与 lipofectin比率 (W/ W)为 1∶ 5、转染 6 h时 ,转染效率最佳而细胞毒性相对较低 ;lipofectin介导转染 6 h后 ,细胞内荧光物质主要聚集于细胞核和部分细胞质中 ,而直接转染时荧光物质多分布于细胞质。结论 :lipofectin可增加 NF-κB“decoy”ODNs的细胞摄入并改变其细胞内分布 ;NF-κB“decoy”ODNs与 lipofectin比率 (W/ W)为 1∶ 5、转染 6 h时可获得最佳转染效率。

关键词：阳离子脂质体 NF-κB“decoy”ODNS 基因转染巨噬细胞

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聚集蛋白基因在原代培养成肌细胞中的表达

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中华实验外科杂志 2005年第12期22卷 1562-1564页

作者：张盈帆江华林子豪蔡在龙吴包金第二军医大学附属长征医院整形外科上海200003 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的研究神经源性聚集蛋白(agrin)基因在原代培养成肌细胞中的表达。方法原代培养成年大鼠的成肌细胞,免疫细胞化学方法进行鉴定,将agrin—Y428基因cDNA片段亚克隆入 pCDNA3真核表达载体,重组子经脂质体介导转染成肌细胞,G418筛选,获得... 详细信息

目的研究神经源性聚集蛋白(agrin)基因在原代培养成肌细胞中的表达。方法原代培养成年大鼠的成肌细胞,免疫细胞化学方法进行鉴定,将agrin—Y428基因cDNA片段亚克隆入 pCDNA3真核表达载体,重组子经脂质体介导转染成肌细胞,G418筛选,获得具有抗性的克隆,增殖后以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光的方法检测基因的转录和蛋白表达,并初步测定其生物学活性。结果原代培养8周后,90％以上仍为成肌细胞,转染神经源性agrin基因后,成肌细胞可以表达相应的mRNA和有功能活性的蛋白。结论原代培养的成肌细胞可以作为agrin 基因转移的有效载体,可用于进一步肌肉功能减退的基因治疗中。

关键词：基因表达成肌细胞原代培养聚集蛋白基因

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噬菌体展示耐药突变HIV-1蛋白酶敏感切割位点六肽随机文库的构建

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中国药理学通报 2007年第3期23卷 403-406页

作者：卢海妹周波潘卫贾建安王锦红温宗梅何俊陈露邓松华安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的构建耐药性突变HIV-1蛋白酶(protease PR)敏感切割位点序列体外噬菌体筛选模型,研究HIV-1蛋白酶耐药性突变与敏感切割序列的关系。方法用含随机核苷酸序列的引物PCR方法对HIV-1gag基因上的CAP2片段的PR切割位点处的氨基酸序列进行... 详细信息

目的构建耐药性突变HIV-1蛋白酶(protease PR)敏感切割位点序列体外噬菌体筛选模型,研究HIV-1蛋白酶耐药性突变与敏感切割序列的关系。方法用含随机核苷酸序列的引物PCR方法对HIV-1gag基因上的CAP2片段的PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化,再将重组CAP2片段和NC片段拼接克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANT-AB5S上,建立HIV-1蛋白酶靶蛋白切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果该噬菌体展示文库库容量为2.6×106,滴度为4.1×1015TU·L-1,CAP2片段插入率为47.8%;序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布。结论成功地构建HIV-1蛋白酶的敏感切割序列噬菌体筛选文库,为筛选到突变PR敏感切割序列噬菌体及研究耐药HIV-1蛋白酶抑制剂与突变PR的关系打下基础。

关键词：人类免疫缺陷病毒-1 蛋白酶耐药突变噬菌体展示文库

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噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的构建

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第二军医大学学报 2005年第4期26卷 396-401页

作者：杨华李连青王蓓霞徐容沈毅珺贾建安潘欣陈秋莉潘卫山西医科大学基础医学部微生物学与免疫学教研室太原030001 山西省临床检验中心太原030012 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础。方法:PCR扩增制备分别编码Protein A 的A、D结构域、Protein G的B2 结构域和Pro tein L的B3结构... 详细信息

目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础。方法:PCR扩增制备分别编码Protein A 的A、D结构域、Protein G的B2 结构域和Pro tein L的B3结构域的序列片段,片段两端引入XbaⅠ酶切位点,3′端引入分别编码0、1、2、3个氨基酸大小随机连接肽的序列,并克隆于pMD 18T载体构建重组质粒。以上述16种重组质粒为模板,PCR扩增分别制备各种单结构域片段及两端部分T载体序列,XbaⅠ酶切,各种酶切片段混合后连接,并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,挑取单克隆进行序列测定,评价文库的随机性。结果:噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库库容量为2×107,滴度为1.3×1011;文库中含77%以上的阳性克隆,其中由2个以上单结构域组成的阳性克隆占24%;序列分析显示组合文库包含上述4种单结构域序列,连接方式符合随机连接的特点,随机连接肽的编码核酸也呈随机分布。结论:成功构建了免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,该文库库容、多样性和随机性完全可满足进行体外分子进化研究的要求。

关键词：免疫球蛋白结合分子噬菌体展示组合文库结构域随机连接肽

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