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^(60)Co照射后SMMC7721细胞线粒体DNA部分非编码区断裂敏感位点初探

第二军医大学学报 2005年第6期26卷 615-617页

作者：王洁王学敏龙建纲汪振诚高建国第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学海军医学系辐照中心上海200433

目的:观察SMMC7721细胞在接受不同剂量60Coγ射线照射后线粒体DNA非编码区是否存在特定的断裂敏感点。方法:根据人线粒体DNA非编码区的基因序列设计相应的引物序列,再通过接头介导PCR(LMPCR)及基因扫描来检测其断裂程度和位点。结果:PC... 详细信息

目的:观察SMMC7721细胞在接受不同剂量60Coγ射线照射后线粒体DNA非编码区是否存在特定的断裂敏感点。方法:根据人线粒体DNA非编码区的基因序列设计相应的引物序列,再通过接头介导PCR(LMPCR)及基因扫描来检测其断裂程度和位点。结果:PCR产物电泳结果显示,接受不同剂量γ射线照射后,各剂量都有相同大小的片段。通过基因扫描的方法,发现不同照射剂量下的断裂位点位置是相同的。结果说明这些断裂敏感位点不是随机分布的。并且,位点的损伤频率也是随着剂量的增加而呈现递增趋势,随着剂量的增加还出现了新的断裂位点。结论:SMMC7721细胞线粒体DNA非编码区确实存在对γ射线敏感的位点。

关键词： DNA 线粒体断裂敏感点 γ射线肝肿瘤

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TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡及其与FHIT基因突变关系的初步研究

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 136-139页

作者：王梁华朱玉平蔡清萍娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长征医院普通外科

目的 :分析原核重组表达的人可溶性 TRAIL分子诱导多种肿瘤细胞的凋亡 ,并观察凋亡作用与 FHIT基因突变的关系。方法 :观察人可溶性 TRAIL对 2 8株不同来源的肿瘤细胞和正常细胞的直接细胞毒作用 ,RT- PCR法分析部分细胞的FHIT基因缺失... 详细信息

目的 :分析原核重组表达的人可溶性 TRAIL分子诱导多种肿瘤细胞的凋亡 ,并观察凋亡作用与 FHIT基因突变的关系。方法 :观察人可溶性 TRAIL对 2 8株不同来源的肿瘤细胞和正常细胞的直接细胞毒作用 ,RT- PCR法分析部分细胞的FHIT基因缺失突变情况。结果 :1～ 10 0 mg/ L的重组人可溶性 TRAIL蛋白即可诱导 19株细胞 (包括人肿瘤细胞株 )如 1990(胰腺导管癌 )、MCF- 7(乳腺癌 )、A 5 4 9(肺癌 )、U 2 5 1(星形胶质瘤 )、Hep G- 2 (肝细胞癌 )、M85 (胃癌 )、CNE- 2 (鼻咽癌 )、Hep- 2(喉癌 )、AT- 2 9(结肠癌 )、3AO (卵巢癌 )和 B16 - MB(黑色素瘤 ) ,髓性恶性细胞如 Jurkat、K5 6 2、U937、6 T- CEM,鼠源性 S180(肉瘤 )、Ehrlich(腹水瘤 )和 L ewis(肺癌 ) ,以及人内皮细胞株 ECV 30 4等发生凋亡 ;而其他 9株细胞 ,如 SK- N - SH(人神经母细胞瘤 )、8898(人胰腺导管癌 )、He L a(人宫颈癌 )、SMMU 772 1(人肝癌 )、HL 6 0 (人白血病 )、COS- 7(猴肾 )、人成纤维细胞、L 92 9(鼠成纤维细胞 )、Wish(人羊膜细胞 )等需大于 10 0 mg/ L的 TRAIL才能使其凋亡 ;观察到上述部分对 TRAIL敏感的人源细胞的 FHIT基因有缺失突变 ,而不敏感的人源细胞 FHIT基因完整。结论 :原核表达的人可溶性 TRAIL 具有明显诱导多种?

关键词： TRAIL 细胞凋亡 FHIT基因基因突变肿瘤细胞

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酪氨酸酶启动子调控的CD基因治疗恶性黑色素瘤

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第二军医大学学报 1998年第3期19卷 205-208页

作者：曹广文戚中田潘欣张晓琴高军崔龙孔宪涛第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科第二军医大学长征医院实验诊断科

目的：克隆酪氨酸酶（Ｔｙｒ）启动子并探索其调控细菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）在黑色素瘤基因治疗中的应用价值。方法：用ＰＣＲ法从小鼠恶性黑色素瘤细胞Ｂ１６基因组中克隆Ｔｙｒ启动子片段并与正常序列比较，并于逆转录病毒载体Ｇ１Ｎ... 详细信息

目的：克隆酪氨酸酶（Ｔｙｒ）启动子并探索其调控细菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）在黑色素瘤基因治疗中的应用价值。方法：用ＰＣＲ法从小鼠恶性黑色素瘤细胞Ｂ１６基因组中克隆Ｔｙｒ启动子片段并与正常序列比较，并于逆转录病毒载体Ｇ１Ｎａ中调控ＣＤ基因（ＴｙｒＣＤ）。测体外表达和体内抗肿瘤作用。结果：来源于Ｂ１６基因组的Ｔｙｒ启动子重要反式作用位点未见突变。该Ｔｙｒ启动子可使ＣＤ基因在Ｂ１６中特异表达。转ＴｙｒＣＤ的Ｂ１６可以抑制亲代细胞的成瘤作用。含ＴｙｒＣＤ的重组病毒可在体内感染黑色素瘤细胞和骨髓细胞。体内注射５氟胞嘧啶后可使黑色素瘤消退，并对骨髓细胞有保护作用。结论：来源于正常组织或肿瘤组织的Ｔｙｒ启动子指导的ＣＤ基因在恶性黑色素瘤ｉｎｖｉｖｏ基因治疗方面是安全。

关键词：酪氨酸酶胞嘧啶脱氨酶黑色素瘤基因治疗

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HBV转基因在C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU3小鼠基因组中的整合分析

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 271-274页

作者：訾晓渊张南巴月张树忠姚玉成熊俊李建秀王新民胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室郑州大学公共卫生学院环境卫生学教研室

目的:分析HBV转基因在乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系基因组中的整合特征.方法:以F6～F17代乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU为研究对象,采用基因组DNA PCR、Southern印迹和DNA测序的方法,分析HBV转基因... 详细信息

目的:分析HBV转基因在乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系基因组中的整合特征.方法:以F6～F17代乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU为研究对象,采用基因组DNA PCR、Southern印迹和DNA测序的方法,分析HBV转基因在该品系转基因小鼠基因组中的整合特征.结果:PCR分析显示,F6～F17代乙肝转基因小鼠基因组中均已稳定整合了相同拷贝数的HBV转基因,整合的HBV DNA可通过生殖系在世代间稳定遗传.整合在转基因小鼠基因组中的HBV DNA含有HBVpres、s、c、x基因,Southern印迹证实HBV转基因含有全长HBV基因组DNA,DNA测序结果表明,该品系转基因小鼠所整合的转基因为adr亚型的HBV DNA.结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU'3号'品系转基因小鼠基因组中均整合有adr亚型的全长HBV基因组DNA,从DNA水平证实该转基因小鼠品系已具备了乙肝实验动物模型的基本条件.

关键词：病毒乙型肝炎小鼠转基因整合

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乙型肝炎病毒(adr亚型)preS2-S基因转基因小鼠的建立

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 168-171页

作者：苏小平姚玉成訾晓渊赵书民熊俊李建秀王新民丁佳许燕余宏宇胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学长征医院感染科长征医院病理科

目的 :建立可表达乙型肝炎病毒 (adr亚型 )包膜中蛋白的转基因小鼠品系。方法 :通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因的转基因小鼠。应用 PCR方法筛选乙型肝炎病毒 pre S2 - S基因转基因首建者 (founder... 详细信息

目的 :建立可表达乙型肝炎病毒 (adr亚型 )包膜中蛋白的转基因小鼠品系。方法 :通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因的转基因小鼠。应用 PCR方法筛选乙型肝炎病毒 pre S2 - S基因转基因首建者 (founder)小鼠 ,再以免疫组织化学法分析乙型肝炎病毒蛋白在这些小鼠中的表达特性 ,PCR和免疫组化均阳性的转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配用于传代培育 ,并用 PCR法检测其子代小鼠。结果 :共注射受精卵 6 9枚。选取存活受精卵 5 8枚分别植入 4只假孕小鼠 ,产仔并存活 2 3只。经尾组织 DNA PCR筛选得到 5只整合 pre S2 - S基因的 founder小鼠 ,免疫组织化学法发现其中3只小鼠的肝脏中表达 HBs Ag,进而对其中表达较强的阳性鼠进行保种。结论 :所建立的乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因转基因小鼠品系具有表达乙肝病毒中蛋白的生物学特性。

关键词：乙型肝炎病毒 MHBs 转基因小鼠 preS2-S基因

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血透患者血清庚型肝炎病毒RNA及抗体检测

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第二军医大学学报 1999年第5期20卷 286-288页

作者：许臻缪晓辉戚中田崔晓红潘卫朱诗应第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院肾内科第二军医大学长征医院感染科

目的：了解血透患者庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染率及与其他肝炎病毒重叠感染的情况。方法：收集５７份血透患者血清标本，根据ＨＧＶＲＮＡ保守片段５′非编码区序列，设计了两对引物，采用逆转录巢式ＰＣＲ扩增ＨＧＶＲＮＡ，以及ＥＩ... 详细信息

目的：了解血透患者庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染率及与其他肝炎病毒重叠感染的情况。方法：收集５７份血透患者血清标本，根据ＨＧＶＲＮＡ保守片段５′非编码区序列，设计了两对引物，采用逆转录巢式ＰＣＲ扩增ＨＧＶＲＮＡ，以及ＥＩＡ法检测ＨＧＶＩｇＧ抗体。同时还检测了ＨＢＶＤＮＡ及ＨＣＶＩｇＧ抗体。结果：５７份标本中，４份ＨＧＶＲＮＡ阳性（７．０％），２份ＨＧＶＩｇＧ抗体阳性（３．５％）。ＨＧＶＲＮＡ与ＨＧＶＩｇＧ抗体呈“分离”现象。４份ＨＧＶＲＮＡ阳性标本中２份为ＨＢＶＤＮＡ阳性，２份为ＨＣＶＩｇＧ抗体阳性；其中１份标本ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＩｇＧ抗体均为阳性。结论：血透患者ＨＧＶ感染率高于健康献血员和正常人群，ＨＧＶ可与ＨＢＶ和ＨＣＶ重叠感染。

关键词：血液透析庚型肝炎病毒重叠感染 RNA

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减毒沙门菌介导联合基因对腺样囊性癌血管生成的抑制作用

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第二军医大学学报 2005年第6期26卷 609-612页

作者：江中明吕春堂周中华赵平高军第二军医大学长海医院口腔科上海200433 第二军医大学长海医院基础医学部微生物学教研室上海200433

目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒沙门菌对腺样囊性癌荷瘤裸鼠肿瘤血管生成的抑制作用。方法:4周龄BALB/cnunu雄鼠25只,随机分成5组,对照组(PBS组)、单纯减毒沙门菌组(SL7207组)、携带人IFN-γ基... 详细信息

目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒沙门菌对腺样囊性癌荷瘤裸鼠肿瘤血管生成的抑制作用。方法:4周龄BALB/cnunu雄鼠25只,随机分成5组,对照组(PBS组)、单纯减毒沙门菌组(SL7207组)、携带人IFN-γ基因减毒沙门菌治疗组(SL7207/pCIIFN组)、携带Tip30基因减毒沙门菌治疗组(SL7207/pCITip30组)、携带Tip30与人IFNγ基因的真核共表达质粒的重组减毒沙门菌治疗组(SL7207/pCITip30/IFN组),均于颌下接种腺样囊性癌(ACC2)细胞。10d后对照组裸鼠口服PBS,其余各治疗组口服相应的减毒沙门菌,隔周1次,共3次。然后检测肿瘤生长体积、带瘤存活期、裸鼠体内肿瘤的微血管密度(MVD)。结果:各治疗组比较对照组、携带基因治疗组比较SL7207组、联合基因治疗组比较单基因治疗组肿瘤生长慢、体积小,带瘤存活期长(P<0.05);携带Tip30基因治疗组MVD较其他3组低,联合基因组较携带Tip30单基因组MVD低(P<0.05)。结论:减毒沙门菌载体分别介导Tip30、IFN-γ基因有抑制肿瘤生长作用,联合基因较单基因治疗效果好,有协同作用。

关键词： Tip30 干扰素γ 减毒沙门菌基因疗法腺样囊性癌

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后基因组时代的基因工程小鼠

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 117-119页

作者：胡以平曾溢滔第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 上海医学遗传学研究所上海200040

基因工程小鼠是当今生命科学中集成度最高的综合性研究体系之一 ,在认识“基因 -蛋白质 -生命现象”、制备人类疾病研究的实验动物模型 ,以及新药开发的评价体系等领域中具有重要作用。随着生命科学中功能基因组学的兴起和模式生物时代... 详细信息

基因工程小鼠是当今生命科学中集成度最高的综合性研究体系之一 ,在认识“基因 -蛋白质 -生命现象”、制备人类疾病研究的实验动物模型 ,以及新药开发的评价体系等领域中具有重要作用。随着生命科学中功能基因组学的兴起和模式生物时代的到来 ,使得生物医药研究对基因工程小鼠的需求日趋增加 ,同时也促使基因工程小鼠技术体系得到了快速的发展。然而 ,在基因工程小鼠的产生中 ,仍存在着一些问题。它们的解决。

关键词：基因工程小鼠转基因小鼠基因剔除小鼠基因替换小鼠

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肝细胞癌和癌旁肝组织中HCV　RNA正、负链的检测

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第二军医大学学报 1995年第5期16卷 401-404页

作者：崔晓红吴孟超张晓华潘卫印慨宋艳斌裴红伟陈汉戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院东方肝胆外科研究所

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了４２例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者肝癌及癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的正、负链。结果显示：肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正、负链的检出率分别为５４．８％和３５．７％；ＨＣＶＲＮ... 详细信息

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了４２例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者肝癌及癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的正、负链。结果显示：肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正、负链的检出率分别为５４．８％和３５．７％；ＨＣＶＲＮＡ的正链和负链在肝癌和癌旁肝组织中，同时阳性的患者分别占４５．２％和３１．０％；血清ＨＣＶＲＮＡ和抗ＨＣＶ阴性者肝组织中ＨＣＶＲＮＡ的检出率仍有５１．３％；肝组织ＨＣＶＲＮＡ与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的感染状态无显著相关。提示，ＨＣＶ感染可能是ＨＣＣ发生的另一病原学因素；血清ＨＣＶＲＮＡ和抗ＨＣＶ阴性时不能排除体内存在ＨＣＶ感染的可能性。

关键词：肝肿瘤丙型肝炎病毒逆转录聚合酶链反应

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HBV adr亚型基因疫苗诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 819-821,F004页

作者：余宏宇景洪标孙静何金戴益民刘会敏张佩华胡以平第二军医大学长征医院病理科上海200003 第二军医大学长海医院病理科第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室

目的 :构建乙型肝炎病毒 (HBV ) adr亚型基因疫苗 p CMV- S2 .S(PS) ,观察其诱导小鼠所产生的特异性体液和细胞免疫应答。方法 :将 PS注射于 C5 7BL / 6小鼠胫骨前肌内 ,应用 EL ISA方法检测不同时间小鼠血清中抗 HBs抗体以及采用 51Cr... 详细信息

目的 :构建乙型肝炎病毒 (HBV ) adr亚型基因疫苗 p CMV- S2 .S(PS) ,观察其诱导小鼠所产生的特异性体液和细胞免疫应答。方法 :将 PS注射于 C5 7BL / 6小鼠胫骨前肌内 ,应用 EL ISA方法检测不同时间小鼠血清中抗 HBs抗体以及采用 51Cr释放实验检测淋巴细胞杀伤功能。结果 :注射基因疫苗 1周后 ,血清中抗 HBs抗体转阳 ,4周后抗体达到高峰 ,并以高水平维持至少 8周 ;第 12周时 PS诱导小鼠产生了良好的 HBV特异的细胞免疫应答 (P<0 .0 5 )。结论 :所构建的 HBV adr亚型基因疫苗

关键词：乙型肝炎病毒基因疫苗体液免疫应答细胞免疫应答

来源：评论

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