检索结果-内蒙古大学图书馆

中国肿瘤生物治疗杂志 2008年第3期15卷 259-263页

作者：高云王梁华任娜孙铭娟郭爱云焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮-单核活化多肽2(endothelail monocyte-activating polypeptideⅡ,EMAP-Ⅱ),并探讨重组EMAP-Ⅱ的抗肿瘤生物学活性。方法:采用pMAL-p2x表达系统和BL-21菌株克隆表达人EMAP-Ⅱ_(14... 详细信息

目的:采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮-单核活化多肽2(endothelail monocyte-activating polypeptideⅡ,EMAP-Ⅱ),并探讨重组EMAP-Ⅱ的抗肿瘤生物学活性。方法:采用pMAL-p2x表达系统和BL-21菌株克隆表达人EMAP-Ⅱ_(147-312),对表达产物进行纯化。以发光底物法测定重组EMAP-Ⅱ介导人脐静脉内皮细胞ECV-304产生组织因子的活性;以流式细胞术测定其增强ECV-304细胞对于TNFα致凋亡的敏感性;以MTF法检测定其对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制效果。结果:测序证实EMAP-Ⅱ编码序列被正确克隆进表达载体,经诱导表达、纯化,获得重组EMAP-Ⅱ产物,每克菌体(湿重)可获得约500μg的重组蛋白,纯度为电泳纯。重组EMAP-Ⅱ在体外培养条件下可使ECV-304细胞产生TF因子;并可增强ECV-304细胞对于TNFα介导凋亡的敏感性,使凋亡率明显增加[(16.6±2.5)% vs(25.6±2.3)%,P<0.01];在一定的质量浓度(1μg/ml)下,EMAP-Ⅱ对SW1990细胞的增殖有一定抑制作用(P<0.05)。结论:本研究采用原核表达系统pMAL-p2x可表达高纯度的重组EMAP-Ⅱ,该因子具有良好的抗肿瘤生物学活性。

关键词：内皮-单核活化多肽2 克隆表达抗肿瘤增殖抑制凋亡

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猫心肌缺血再灌注对Ca2+┐ATPase活力及肌浆网钙摄取能力的影响

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第二军医大学学报 1998年第4期19卷 347-349页

作者：陈龙胡寿鹏张荣良魏尧梅缪明永第二军医大学基础医学部生物化学教研室南京军区福州总医院胸心外科

目的：观察猫心肌缺血再灌注过程中心肌细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力、肌浆网钙摄取能力、线粒体丙二醛及心肌ＡＴＰ含量变化。方法：利用猫体外循环模型，心脏低温停搏６０ｍｉｎ后，恢复正常血液灌注６０ｍｉｎ。测定心肌细胞膜... 详细信息

目的：观察猫心肌缺血再灌注过程中心肌细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力、肌浆网钙摄取能力、线粒体丙二醛及心肌ＡＴＰ含量变化。方法：利用猫体外循环模型，心脏低温停搏６０ｍｉｎ后，恢复正常血液灌注６０ｍｉｎ。测定心肌细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力、肌浆网钙摄取能力、心肌ＡＴＰ及线粒体丙二醛含量。结果：心脏缺血６０ｍｉｎ时，随着心肌ＡＴＰ含量的下降，Ｃａ２＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ活力及肌浆网钙摄取能力下降，而丙二醛含量仅有轻微增加；恢复灌注６０ｍｉｎ后，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力及肌浆网钙摄取能力进一步下降，同时丙二醛含量明显增加。结论：缺血期间心肌细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力及肌浆网钙摄取能力的下降主要与心肌能量储备降低有关，而复灌后Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力及肌浆网钙摄取能力进一步下降，可能与复灌过程中氧自由基大量产生。

关键词：心肌缺血再灌注损伤肌浆网钙 ATPase

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川芎嗪对肝缺血再灌注大鼠线粒体功能的保护作用

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第二军医大学学报 1996年第5期17卷 434-436页

作者：孙经建缪明永吴孟超王学敏陈汉钱光相第二军医大学长海医院东方肝胆外科研究所第二军医大学基础医学部生物化学教研室

目的：评价川芎嗪对肝缺血再灌注后大鼠肝线粒体功能的影响，并探讨其保护作用。方法：实验动物分为３组：阻断组、阻断＋川芎嗪组和假处理组。肝线粒体分离后以氢电极法测定其呼吸活性。结果：肝缺血再灌注后大鼠肝线粒体呼吸比率、磷... 详细信息

目的：评价川芎嗪对肝缺血再灌注后大鼠肝线粒体功能的影响，并探讨其保护作用。方法：实验动物分为３组：阻断组、阻断＋川芎嗪组和假处理组。肝线粒体分离后以氢电极法测定其呼吸活性。结果：肝缺血再灌注后大鼠肝线粒体呼吸比率、磷氧比值和氧化磷酸化效率均显著降低，应用川芎嗪能保持正常的线粒体功能。结论：川芎嗪具有保护缺血再灌注肝线粒体功能的作用。

关键词：川芎嗪肝缺血再灌注线粒体川芎

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血管内皮细胞生长因子在哺乳动物细胞的表达

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第二军医大学学报 1999年第10期20卷 777-779页

作者：顾洪蔡在龙陈少萍邹鲁峰宋春桥毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学教研室上海200433 第二军医大学长海医院心血管内科

目的：本实验试图构建具有生物学活性的ＶＥＧＦ真核表达载体，为ＶＥＧＦ基因治疗提供载体。方法：将已获得的ｈＶＥＧＦ１６５ｃＤＮＡ克隆到ＧＳＴ融合表达载体，构建原核表达质粒，转染大肠杆菌ＤＨ５α，ＩＰＴＧ诱导表达，Ｗｅ... 详细信息

目的：本实验试图构建具有生物学活性的ＶＥＧＦ真核表达载体，为ＶＥＧＦ基因治疗提供载体。方法：将已获得的ｈＶＥＧＦ１６５ｃＤＮＡ克隆到ＧＳＴ融合表达载体，构建原核表达质粒，转染大肠杆菌ＤＨ５α，ＩＰＴＧ诱导表达，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定表达产物。在此基础上构建真核表达载体ｐｃＤＮＡ３／ｈＶＥＧＦ１６５，脂质体介导转染ＣＨＯ－Ｋ１细胞，Ｇ－４１８筛选，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｗｅｓｔ－ｅｒｎｂｌｏｔ分别检测其在细胞内的转录和表达情况，３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测表达蛋白的活性。结果：实验组的Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ出现特异性条带，而对照组在相应部位未出现条带。实验组的大鼠心肌血管内皮细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率明显高于对照组（Ｐ＜０．００１）。结论：本实验所构建的ＶＥＧＦ真核表达质粒能够在真核细胞内获得表达，其表达产物具有血管内皮细胞增殖刺激活性。

关键词：血管内皮细胞生长因子哺乳动物基因治疗

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阳离子脂质体介导NF-κB“decoy”ODNs转染巨噬细胞条件的优化

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第二军医大学学报 2003年第8期24卷 856-858,F004页

作者：王建李金宝任绪义邓小明第二军医大学长海医院麻醉科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的 :观察 NF- κB“decoy”ODNs在阳离子脂质体 lipofectin介导下转染小鼠巨噬细胞 J774 .1的优化参数以及在细胞内的分布。方法 :改变 ODN与 lipofectin比率、转染时间 ;用流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度和摄取率评价转染效率 ... 详细信息

目的 :观察 NF- κB“decoy”ODNs在阳离子脂质体 lipofectin介导下转染小鼠巨噬细胞 J774 .1的优化参数以及在细胞内的分布。方法 :改变 ODN与 lipofectin比率、转染时间 ;用流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度和摄取率评价转染效率 ;荧光显微镜观察细胞内荧光分布 ;测定细胞上清乳酸脱氢酶 (L DH)观察细胞损伤情况。结果 :lipofectin介导转染显著提高 J774 .1细胞对 NF- κB“decoy”ODNs的摄取 ;在 2 4孔培养板中 ,NF- κB“decoy”ODNs与 lipofectin比率 (W/ W)为 1∶ 5、转染 6 h时 ,转染效率最佳而细胞毒性相对较低 ;lipofectin介导转染 6 h后 ,细胞内荧光物质主要聚集于细胞核和部分细胞质中 ,而直接转染时荧光物质多分布于细胞质。结论 :lipofectin可增加 NF-κB“decoy”ODNs的细胞摄入并改变其细胞内分布 ;NF-κB“decoy”ODNs与 lipofectin比率 (W/ W)为 1∶ 5、转染 6 h时可获得最佳转染效率。

关键词：阳离子脂质体 NF-κB“decoy”ODNS 基因转染巨噬细胞

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乳清酸对急性心肌梗塞非梗塞区心肌线粒体的有益作用

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第二军医大学学报 1994年第1期15卷 47-51页

作者：李志梁章同华秦永文陈克明陈晓睛第一军医大学珠江医院心内科第二军医大学长海医院心内科第二军医大学基础医学部生物化学教研室

结扎大鼠冠状动脉前降支造成急性心肌梗塞（ＡＭＩ），分成乳清酸治疗组（ＡＭＩＯＡ），生理盐水治疗组（ＡＭＩＮＳ）和假手术组（ＳＯＮＳ）。观察非梗塞区心肌线粒体功能、结构及心肌纤维的改变。在ＡＭＩ后２４，７２ｈ，ＡＭＩＮ... 详细信息

结扎大鼠冠状动脉前降支造成急性心肌梗塞（ＡＭＩ），分成乳清酸治疗组（ＡＭＩＯＡ），生理盐水治疗组（ＡＭＩＮＳ）和假手术组（ＳＯＮＳ）。观察非梗塞区心肌线粒体功能、结构及心肌纤维的改变。在ＡＭＩ后２４，７２ｈ，ＡＭＩＮＳ组Ｒ３，ＲＣＲ，ＯＰＲ有意义降低，ＡＭＩＯＡ组则明显增加（Ｐ＜０．０１），且与ＳＯＮＳ组相似（Ｐ＞０．０５）。ＡＭＩＮＳ组非梗塞区心肌超微结构，特别是边缘区表现为线粒体基质减少，外膜崩解，嵴模糊；肌纤维Ⅰ带增宽，Ｚ线突出，扭曲或断裂，收缩带形成。在ＡＭＩＯＡ组上述结构基本正常。结果提示：乳清酸保护了非梗塞区心肌功能和结构。其可能机制是乳清酸增加蛋白质和磷脂的合成，修复了线粒体结构。

关键词：乳清酸心肌梗塞心肌线粒体

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聚集蛋白基因在原代培养成肌细胞中的表达

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中华实验外科杂志 2005年第12期22卷 1562-1564页

作者：张盈帆江华林子豪蔡在龙吴包金第二军医大学附属长征医院整形外科上海200003 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的研究神经源性聚集蛋白(agrin)基因在原代培养成肌细胞中的表达。方法原代培养成年大鼠的成肌细胞,免疫细胞化学方法进行鉴定,将agrin—Y428基因cDNA片段亚克隆入 pCDNA3真核表达载体,重组子经脂质体介导转染成肌细胞,G418筛选,获得... 详细信息

目的研究神经源性聚集蛋白(agrin)基因在原代培养成肌细胞中的表达。方法原代培养成年大鼠的成肌细胞,免疫细胞化学方法进行鉴定,将agrin—Y428基因cDNA片段亚克隆入 pCDNA3真核表达载体,重组子经脂质体介导转染成肌细胞,G418筛选,获得具有抗性的克隆,增殖后以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光的方法检测基因的转录和蛋白表达,并初步测定其生物学活性。结果原代培养8周后,90％以上仍为成肌细胞,转染神经源性agrin基因后,成肌细胞可以表达相应的mRNA和有功能活性的蛋白。结论原代培养的成肌细胞可以作为agrin 基因转移的有效载体,可用于进一步肌肉功能减退的基因治疗中。

关键词：基因表达成肌细胞原代培养聚集蛋白基因

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晕船易感大鼠与不晕大鼠脑干蛋白质双向电泳图谱的鉴定与分析

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第二军医大学学报 2005年第4期26卷 411-414页

作者：杜鹏张建鹏苏波任绪义郭俊生第二军医大学海军医学系军队卫生学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的:利用蛋白组学技术,建立晕船易感及不晕大鼠脑干总蛋白的双向电泳图谱,分析并鉴定差异表达蛋白质。方法:据模拟晕船刺激后异嗜高岭土量的增减将大鼠分为晕船易感组和不晕组,应用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向电泳(tw... 详细信息

目的:利用蛋白组学技术,建立晕船易感及不晕大鼠脑干总蛋白的双向电泳图谱,分析并鉴定差异表达蛋白质。方法:据模拟晕船刺激后异嗜高岭土量的增减将大鼠分为晕船易感组和不晕组,应用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向电泳(two dimensional electrophoresis,2 DE)技术,分离2 组大鼠脑干总蛋白,分析并用肽指纹图谱(peptide massfingerprint,PMF)鉴定差异蛋白质。结果:鉴定5个晕船易感相关蛋白质,上调酪氨酸3 单加氧酶/色氨酸5 单加氧酶激活蛋白、铁效应元件结合蛋白1,下调硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅰ、磷酸甘油酸变位酶B、线粒体电压依赖型阴离子通道1。结论:成功建立分辨率和重复性高的晕船易感和不晕组大鼠2 DE图谱,研究表明差异蛋白质与神经递质合成、氧化损伤、能量代谢、细胞凋亡及铁代谢有关。

关键词：晕船蛋白质组双向电泳肽指纹图谱

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^(60)Co照射后SMMC7721细胞线粒体DNA部分非编码区断裂敏感位点初探

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第二军医大学学报 2005年第6期26卷 615-617页

作者：王洁王学敏龙建纲汪振诚高建国第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学海军医学系辐照中心上海200433

目的:观察SMMC7721细胞在接受不同剂量60Coγ射线照射后线粒体DNA非编码区是否存在特定的断裂敏感点。方法:根据人线粒体DNA非编码区的基因序列设计相应的引物序列,再通过接头介导PCR(LMPCR)及基因扫描来检测其断裂程度和位点。结果:PC... 详细信息

目的:观察SMMC7721细胞在接受不同剂量60Coγ射线照射后线粒体DNA非编码区是否存在特定的断裂敏感点。方法:根据人线粒体DNA非编码区的基因序列设计相应的引物序列,再通过接头介导PCR(LMPCR)及基因扫描来检测其断裂程度和位点。结果:PCR产物电泳结果显示,接受不同剂量γ射线照射后,各剂量都有相同大小的片段。通过基因扫描的方法,发现不同照射剂量下的断裂位点位置是相同的。结果说明这些断裂敏感位点不是随机分布的。并且,位点的损伤频率也是随着剂量的增加而呈现递增趋势,随着剂量的增加还出现了新的断裂位点。结论:SMMC7721细胞线粒体DNA非编码区确实存在对γ射线敏感的位点。

关键词： DNA 线粒体断裂敏感点 γ射线肝肿瘤

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持续灌注温血心脏停搏液对心肌保护作用的实验研究

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第二军医大学学报 1995年第2期16卷 145-148页

作者：陈龙张宝仁朱家麟陈如坤郝家骅缪明永陈克明第二军医大学长海医院胸心外科南京军区福州总医院胸心外科第二军医大学基础医学部生物化学教研室

用猫体外循环模型对比观察间断冷血、持续冷血及持续温血心脏停搏液灌注对心肌的保护作用。结果发现，心脏停搏３ｈ后心肌线粒体呼吸功能和氢化磷酸化能力，间断冷血组明显下降，持续冷血组呈轻度下降，持续温血组保持正常；而再灌注后... 详细信息

用猫体外循环模型对比观察间断冷血、持续冷血及持续温血心脏停搏液灌注对心肌的保护作用。结果发现，心脏停搏３ｈ后心肌线粒体呼吸功能和氢化磷酸化能力，间断冷血组明显下降，持续冷血组呈轻度下降，持续温血组保持正常；而再灌注后间断冷血组和持续冷血组进一步下降，持续温血组仍保持正常。丙二醛含量间断冷血组明显增加，持续冷血组有增加趋势，再灌注后两组都进一步升高；而持续温血组始终维持在接近正常水平。表明持续灌注温血停搏液技术可使心脏在停搏期间有充足的血供，心肌不存在缺血、缺氧状态，消除了氧自由基产生的必要条件，有利于保护线粒体功能，同时避免了因缺血、缺氧所诱发的心肌再灌注损伤，是一种理想的心肌保护方法。

关键词：心肌再灌注损伤温血心脏停搏液心肌缺血

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